Efeito da Dieta de Eliminação na Barreira de Muco Intestinal em Bebés com Alergia à Proteína do Leite de Vaca

O estudo incluiu bebés amamentados com menos de 26 semanas de idade que foram diagnosticados com nova APLV não mediada por IgE por um alergologista, tiveram uma dieta de eliminação e candidataram-se a dois hospitais designados na Turquia. Os bebés e suas mães sem alergias ou doenças atópicas, semelhantes em idade e género, estavam no grupo de controlo. De acordo com a análise de poder realizada com G*Power, foram necessários um total de 32 bebés para detectar uma diferença de tamanho médio com uma taxa de erro tipo I de 5% e 85% de poder. O estudo começou com 20 bebés com APLV e 18 bebés saudáveis. Após não conformidade dietética e desistências, o estudo concluiu com 17 bebés em cada grupo.

Os dados foram recolhidos em dois momentos: o início e o fim do estudo. Em cada ponto, foram realizados inquéritos presenciais às mães, foram obtidos registos alimentares de três dias para ambas as mães e bebés, e foram recolhidas medições antropométricas dos bebés, Pontuações de Sintomas Relacionados com Proteína do Leite de Vaca (CoMiSS) e amostras de fezes.

As mães no grupo de caso receberam formação detalhada sobre dietas de eliminação de proteína do leite de vaca (PLV) e alimentação complementar e foram suplementadas com 1000 mg/dia de cálcio. O grupo de controlo recebeu apenas orientação sobre alimentação complementar. Foram realizados acompanhamentos mensais para monitorizar a conformidade. A dieta de eliminação no grupo de caso foi prescrita e supervisionada por um nutricionista, com reintrodução seguindo o protocolo "milk ladder" após uma média de 1,9±0,79 meses. No grupo de controlo, as avaliações finais foram realizadas três meses após a linha de base. Na conclusão do estudo, todas as medições iniciais foram repetidas e uma segunda amostra de fezes foi recolhida.

As medições do peso corporal (kg), comprimento (cm) e perímetro cefálico (cm) dos bebés foram realizadas por um médico usando uma balança padronizada, um infantómetro e uma fita métrica não elástica, de acordo com o método recomendado pela Organização Mundial da Saúde. As medições antropométricas [comprimento para idade (LFA), peso para idade (WFA), peso para comprimento (WFL) e perímetro cefálico para idade (HCFA)] foram avaliadas usando o Software WHO ANTHRO de acordo com escores Z (z-score=valor do paciente-valor médio/desvio padrão).

Foram recolhidos registos alimentares de três dias (dois dias de semana, um dia de fim de semana) das mães e dos bebés. Os registos das mães foram usados para avaliar a adesão à dieta de eliminação, e os participantes que consumiram lacticínios durante a dieta foram excluídos. Os tamanhos das porções foram estimados usando um livro de imagens de tamanhos de porções. As ingestões diárias de energia e nutrientes foram analisadas usando o software BeBiS (versão 9.0). As ingestões dos bebés foram avaliadas em relação aos valores de referência de Ingestão Adequada (AI) das Ingestões de Referência Dietéticas (DRI). A ingestão de leite materno foi estimada usando o método ALSPAC: 100 mL para mamadas >10 minutos e 50 mL para mamadas <5 minutos, com valores de referência de 780 mL/dia para 0-6 meses e 600 mL/dia para 7-12 meses.

Os sintomas clínicos dos bebés foram avaliados usando CoMiSS. CoMiSS é um sistema de pontuação que avalia o choro, a regurgitação, o tipo de fezes (escala de Bristol de fezes), sintomas cutâneos e respiratórios, com uma pontuação total variando de 0 a 33.

As amostras de fezes foram recolhidas num recipiente com uma colher no início e no fim do estudo para garantir que foi obtida uma quantidade adequada (≥50 mg). As amostras foram armazenadas a -80°C para evitar perda de bioatividade e contaminação. As análises de MUC2 e sIgA foram realizadas usando o método de imunoensaio enzimático sanduíche com kits ELISA de MUC2 Humano e sIgA Humano através do método de ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). O kit ELISA de MUC2 Humano tem uma sensibilidade de 0,57 ng/mL e uma gama de medição de 1,57-100 ng/mL. O kit ELISA de sIgA Humano tem uma sensibilidade de 0,098 µg/mL e uma gama de medição de 0,312-20 µg/mL. De acordo com o protocolo de análise, as amostras e os padrões foram adicionados em duplicado aos poços de microtitulação. Em seguida, foram aplicados anticorpo específico conjugado com biotina e conjugado avidina-HRP. Após o desenvolvimento da cor com o substrato TMB, a reação foi parada com uma solução de paragem contendo ácido sulfúrico. A absorbância foi medida a um comprimento de onda de 450±10 nm. As concentrações foram então calculadas usando uma curva padrão baseada nos valores de densidade ótica obtidos.