Effekten av eliminationsdiet på tarmens slembarriär hos spädbarn med komjölksproteinallergi

Studien inkluderade ammade barn under 26 veckors ålder som diagnostiserades med ny icke-IgE-medierad CMPA av en allergolog, hade en elimineringsdiet och ansökte till två sjukhus utsedda i Turkiet. Spädbarn och deras mödrar utan allergier eller atopiska sjukdomar, liknande i ålder och kön, ingick i kontrollgruppen. Enligt effektanalysen som utfördes med G*Power behövdes totalt 32 spädbarn för att upptäcka en medelstor skillnad med 5 % typ I-fel och 85 % styrka. Studien inleddes med 20 spädbarn med CMPA och 18 friska spädbarn. Efter dietbristande följsamhet och utträden avslutades studien med 17 spädbarn i varje grupp.

Data samlades in vid två tidpunkter: studiens början och slut. Vid varje tidpunkt genomfördes ansikte-mot-ansikte-enkäter till mödrarna, tre-dagars matdagböcker erhölls för både mödrar och spädbarn, och spädbarnens antropometriska mätningar, symtompoäng för komjölksprotein (CoMiSS) samt avföringsprover samlades in.

Mödrar i fallgruppen fick detaljerad utbildning om elimineringsdieter för komjölksprotein (CMP) och komplementär utfodring och fick tillskott av 1000 mg/dag kalcium. Kontrollgruppen fick endast vägledning om komplementär utfodring. Månatliga uppföljningar genomfördes för att övervaka följsamhet. Elimineringsdieten i fallgruppen ordinerades och övervakades av en dietist, med återinförande enligt "mjölkstegs"-protokollet efter i genomsnitt 1,9±0,79 månader. I kontrollgruppen utfördes slutliga bedömningar tre månader efter baslinjen. Vid studiens avslut upprepades alla initiala mätningar och ett andra avföringsprov samlades in.

Spädbarnens kroppsvikt (kg), längd (cm) och huvudomfång (cm) mättes av en läkare med en standardiserad våg, infantometer och icke-töjbart måttband, i enlighet med metoden som rekommenderas av Världshälsoorganisationen. Antropometriska mätningar [längd-för-ålder (LFA), vikt-för-ålder (WFA), vikt-för-längd (WFL) och huvudomfång-för-ålder (HCFA)] bedömdes med WHO ANTHRO-programvaran enligt Z-poäng (z-poäng=patientens värde-medelvärde/standardavvikelse).

Tre-dagars matdagböcker (två vardagar, en helgdag) samlades in från mödrar och spädbarn. Mödrarnas dagböcker användes för att bedöma följsamhet till elimineringsdieten, och deltagare som konsumerade mejeriprodukter under dieten uteslöts. Portionsstorlekar uppskattades med hjälp av en bildbok över portionsstorlekar. Dagligt energi- och näringsintag analyserades med BeBiS-programvara (version 9.0). Spädbarnens intag utvärderades mot adekvata intagsreferensvärden (AI) från Dietary Reference Intakes (DRI). Bröstmjölksintag uppskattades med ALSPAC-metoden: 100 mL för amning >10 minuter och 50 mL för amning <5 minuter, med referensvärden på 780 mL/dag för 0–6 månader och 600 mL/dag för 7–12 månader.

Spädbarnens kliniska symtom bedömdes med CoMiSS. CoMiSS är ett poängsystem som bedömer gråt, regurgitation, avföringstyp (Bristol avföringsskala), hud- och respiratoriska symtom, med en total poäng från 0 till 33.

Avföringsprover samlades i en behållare med en sked i början och slutet av studien för att säkerställa att tillräcklig mängd (≥50 mg) erhölls. Proverna förvarades vid -80°C för att förhindra förlust av bioaktivitet och kontamination. MUC2- och sIgA-analyser utfördes med sandwich-enzymimmunoanalysmetoden med Human MUC2- och Human sIgA ELISA-kit via enzymkopplad immunadsorberande analys (ELISA)-metoden. Human MUC2 ELISA-kit har en känslighet på 0,57 ng/mL och ett mätområde på 1,57–100 ng/mL. Human sIgA ELISA-kit har en känslighet på 0,098 µg/mL och ett mätområde på 0,312–20 µg/mL. Enligt analysprotokollet tillsattes prover och standarder i dubbeluppsättning till mikrotiterbrunnar. Därefter applicerades biotinkonjugerat specifikt antikropp och avidinkonjugerat HRP. Efter att färgen utvecklats med TMB-substrat stoppades reaktionen med en stopplösning innehållande svavelsyra. Absorbans mättes vid en våglängd på 450±10 nm. Koncentrationer beräknades sedan med en standardkurva baserad på de erhållna optiska densitetsvärdena.