血清sST2／miR-223：HDM誘発性アレルギー性鼻炎における疾患活動性とSLITの臨床効果のためのデュアルバイオマーカー

可溶性腫瘍原性抑制因子2（sST2）は、アレルギー性炎症に関与するインターロイキン-33（IL-33）のデコイ受容体である。 目的：本研究は、ハウスダストマイト（HDM）誘発性アレルギー性鼻炎（AR）患者において、疾患活動性のバイオマーカーおよび舌下免疫療法（SLIT）に対する臨床反応を予測するための血清sST2を検討した。

第1段階：2025年2月から5月にかけて、ザガジグ大学医学部医微生物学・免疫学教室とザガジグ大学病院アレルギー部門の共同研究により、3ヶ月間実施された症例対照研究。 第2段階：6ヶ月間実施された（MSAR患者対象の）介入研究（準実験的）。

研究対象集団、適格基準および除外基準：適格参加者は、HDM誘発性ARとその喘息への影響（ARIA）ガイドラインの診断を受けた14歳以上の患者。 患者は、少なくとも2年間持続する中等度から重度の症状があり、6ヶ月間SLITを開始・維持する意思があることが求められた。 除外基準には、自己免疫性または慢性炎症性疾患の存在、重度の喘息またはその他の肺疾患、登録前4週間以内の全身性コルチコステロイドまたは免疫抑制療法、妊娠または授乳、インフォームドコンセントの提供拒否が含まれた。 アレルギー疾患の既往がなく、皮膚プリックテスト（SPT）結果が陰性の健康な年齢・性別一致対照者を対照群として募集した。

サンプルサイズ：

サンプルサイズは、Open Epi Infoを用いて、以下の平均sST2レベル（AR症例対対照：19.8±7.5対14.3±6.9（参考文献））に基づき、検出力80%、信頼区間95%、症例：対照1：1で計算した。 最小必要サンプルサイズは各群27名であった。 しかし、各群54名の参加者を募集することができ、全員が最終解析に含まれた。 参加者は、事前に定義された適格基準に従い、単純無作為抽出法を用いて選択された。

• 臨床および検査手順
• ベースライン評価：全参加者は、人口統計学的データ、疾患期間、体格指数（BMI）、既往治療歴を含む詳細な臨床評価を受けた。
• 症状スコアリング：症状の重症度は、TNSSを用いて評価された。TNSSは、鼻汁、鼻閉、鼻痒み、くしゃみの4つのパラメータを含み、各項目は0から4点で評価され、最大スコアは16点である。 10cmの視覚的アナログスケール（VAS）も、全体的な症状負担を定量化するために使用された。
• 皮膚プリックテスト（SPT）：SPTは、Dermatophagoides pteronyssinusおよびD. farinaeを含む標準化されたアレルゲン抽出液を用いて実施された。 ヒスタミンと生理食塩水がそれぞれ陽性対照および陰性対照として使用された。 陰性対照と比較して膨疹直径が≥3mmの場合を陽性と判定した。
• 免疫学的マーカーおよびsST2測定：全参加者からベースライン時に静脈血サンプルを採取し、血清好酸球数、総免疫グロブリンE（IgE）レベル、および製造元のプロトコル（Chemus Bioscience, USA）に従い酵素結合免疫吸着法（ELISA）で測定したハウスダストマイト特異的HDM-IgE（kU/l）を測定した。

sST2濃度は、市販のELISAキット（Elabscience、カタログ番号E-EL-H6082）を用いて定量した。 SLITを受ける患者については、6ヶ月間の治療後に追加の血清サンプルを採取した。 すべての測定は複製して実施された。 測定を実施した検査室担当者は、臨床情報およびサンプリング時間について盲検化された。

- 定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qRT-PCR）によるマイクロRNA-223発現レベルの検出：マイクロRNAは、製造元の指示に従い、市販のmiRNeasy血清／血漿キット（Qiagen、ドイツ）を用いて抽出した。 抽出後、マイクロRNAは、製造元の指示に従い、逆転写キット（miScript II RT Kit、Qiagen、ドイツ）を用いて逆転写された。 その後、ドライバスブロック（Rocker Sahara 320ドライバスヒートブロック、Rocker Scientific、台湾）で、最初に37℃で60分間、次に95℃で5分間（miScript RTを失活化するため）インキュベートした。 その後、反応混合物を-80℃で保存した。成熟miR-223の定量的測定は、製造元の指示に従い、市販キット（miScript SYBR GreenリアルタイムPCRキット、Qiagen、ドイツ）を用いた標的特異的miScriptプライマーアッセイにより実施された。 ヒトRNU6B（RNU6-2）をハウスキーピング遺伝子として使用した。 HotStar Taq DNAポリメラーゼの初期活性化ステップ（95℃で15分間）の後、リアルタイムPCR反応を40サイクル実行した。各サイクルは、95℃で15秒間の変性、55℃で30秒間のアニーリング、70℃で30秒間の伸長からなる。 Stratagene Mx3005Pプラットフォームソフトウェア（Agilent Technologies、USA）を使用して閾値サイクル（Ct）値を算出した。 デルタ-デルタCt法の式を用いて、miR-223発現の倍数変化を推定した。

- （MSAR患者対象の）介入段階：舌下免疫療法（SLIT）プロトコル：患者は、6ヶ月間、HDM抽出物を含む標準化された日々のSLITを受けた。 投与は臨床監督下で開始され、患者は毎月、遵守状況および有害事象についてモニタリングされた。 治療反応は、6ヶ月後に複合アウトカム（症状と薬剤スコアの合計が少なくとも30%減少、TNSSおよびVASスコアの改善、血清sST2レベルの低下）に基づいて評価された。 これらの基準を満たす患者は応答者と分類され、閾値を満たさない患者は非応答者と見なされた。