Serum sST2/miR-223 som en dobbelt biomarkør for sykdomsaktivitet og klinisk effekt av SLIT ved husstøvmiddel-indusert allergisk rinit

Solubert undertrykkelse av tumorigentitet 2 (sST2), en lokkereceptor for interleukin-33 (IL-33), involvert i allergisk betennelse. Mål: Denne studien utforsket serum sST2 som en biomarkør for sykdomsaktivitet og for å forutsi klinisk respons på sublingval immunterapi (SLIT) hos pasienter med husstøvmidd (HDM) indusert AR.

1. stadium: En kasus-kontrollstudie gjennomført over 3 måneder ved Institutt for medisinsk mikrobiologi og immunologi, Det medisinske fakultet, Zagazig University, i samarbeid med Allergienheten ved Zagazig University Hospitals fra februar til mai 2025. 2. stadium: En intervensjonsstudie (kvasi-eksperimentell) for (MSAR-pasienter): gjennomført over 6 måneder.

Studiepopulasjon, inklusjons- og eksklusjonskriterier: Kvalifiserte deltakere var 14 år eller eldre med en diagnose på HDM-indusert AR i henhold til ARIA-retningslinjene (Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma). Pasientene måtte ha vedvarende moderate til alvorlige symptomer i minst to år og være villige til å starte og opprettholde SLIT i seks måneder. Eksklusjonskriterier inkluderte tilstedeværelse av autoimmune eller kroniske inflammatoriske tilstander, alvorlig astma eller annen lungesykdom, systemisk kortikosteroid eller immunsuppressiv behandling innen fire uker før påmelding, svangerskap eller amming, og nektelse om å gi informert samtykke. Friske, alders- og kjønnsmatchede individer uten historikk på allergisk sykdom og med negative hudprikktestresultater (SPT) ble rekruttert som kontroller.

Utvalgsstørrelse:

Utvalgsstørrelsen ble beregnet ved bruk av OpenEpi Info i henhold til følgende: gjennomsnittlig sST2-nivå blant AR-tilfeller versus kontroll var 19,8 ± 7,5 versus 14,3 ± 6,9 (ref.) med studiens styrke på 80 %, konfidensintervall på 95 %, tilfelle:kontroll 1:1. Den minste nødvendige utvalgsstørrelsen var 27 deltakere per gruppe. Vi klarte imidlertid å rekruttere 54 deltakere i hver gruppe, og alle ble inkludert i den endelige analysen. Deltakerne ble valgt ved hjelp av en enkel tilfeldig utvalgsteknikk i henhold til de forhåndsdefinerte inklusjonskriteriene.

• Kliniske og laboratorieprosedyrer
• Baselinevurdering: Alle deltakere gjennomgikk en detaljert klinisk vurdering, inkludert demografiske data, sykdomsvarighet, kroppsmasseindeks (BMI) og tidligere behandlingshistorikk.
• Symptomscoring: Symptomalvorlighet ble vurdert ved bruk av TNSS, som inkluderer fire parametere – rennende nese, nesetetthet, kløe i nesen og nysing – hver vurdert på en skala fra 0 til 4, for en maksimal score på 16. En 10 cm visuell analog skala (VAS) ble også brukt til å kvantifisere den totale symptombelastningen.
• Hudprikktesting (SPT): SPT ble utført ved bruk av standardiserte allergenekstrakter, inkludert Dermatophagoides pteronyssinus og D. farinae. Histamin og salin fungerte som henholdsvis positiv og negativ kontroll. En hevelsesdiameter på ≥3 mm sammenlignet med negativ kontroll ble ansett som positiv.
• Immunologisk markør og sST2-måling: Venøse blodprøver ble samlet fra alle deltakere ved baseline for å bestemme serum eosinofiler, totale immunoglobulin E (IgE)-nivåer, og husstøvmidd-spesifikk HDM-IgE (kU/l) målt ved enzymkoblet immunosorbent assay (ELISA) i henhold til produsentens protokoll (Chemus Bioscience, USA).

sST2-konsentrasjoner ble kvantifisert ved bruk av et kommersielt ELISA-kit (Elabscience, Kat. nr. E-EL-H6082). For pasienter som gjennomgikk SLIT, ble ytterligere serumprøver samlet etter seks måneders terapi. Alle målinger ble utført i duplikat. Laboratoriepersonell som utførte analysene var blindet for klinisk informasjon og prøvetakingstidspunkt.

- Deteksjon av microRNA-223-uttrykksnivå via kvantitativ polymerasekjedereaksjon (qRT-PCR): MicroRNA ble ekstrahert ved bruk av kommersielle miRNeasy Serum/Plasma-kits (Qiagen, Tyskland), i henhold til produsentens instruksjoner. Etter ekstraksjon ble microRNA revers transkribert ved bruk av revers transkripsjonskits (miScript II RT Kit, Qiagen, Tyskland) i henhold til produsentens instruksjoner. Deretter ble det inkubert i et tørrbadblokk (Rocker Sahara 320 tørrbad varmeblokk, Rocker Scientific, Taiwan), først ved 37°C i 60 min, etterfulgt av en andre inkubering ved 95°C i 5 min for å inaktivere miScript RT. Etter det ble reaksjonsblandingen lagret ved -80°C. Kvantitativ bestemmelse av moden miR-223 ble utført ved bruk av målspesifikke miScript Primer Assays med kommersielle kits (miScript SYBR Green real-time PCR Kit, Qiagen, Tyskland), i henhold til produsentens instruksjoner. Humant RNU6B (RNU6-2) ble brukt som et huskepingen. Etter den innledende aktiveringsprosessen for HotStar Taq DNA Polymerase i 15 min ved 95°C, ble real-time PCR-reaksjonene kjørt i 40 sykluser av hver: denaturering i 15 s ved 95°C, annealing i 30 s ved 55°C, og forlengelse i 30 s ved 70°C. Stratagene Mx3005P-plattformprogramvaren (Agilent Technologies, USA) ble brukt for å beregne terskelverdi-syklusen (Ct). Delta-delta Ct-metodeformelen ble brukt for å estimere fold-endringene i miR-223-uttrykk.

- Intervensjonsstadium for (MSAR-pasienter) Sublingval Immunoterapi (SLIT)-protokoll: Pasienter mottok standardisert daglig SLIT som inneholdt HDM-ekstrakter i en periode på seks måneder. Administrering startet under klinisk tilsyn, og pasienter ble overvåket månedlig for medfølgelse og bivirkninger. Den terapeutiske responsen ble vurdert etter seks måneder basert på et sammensatt utfall: en reduksjon på minst 30 % i den kombinerte symptom- og medikamentscoren, forbedring i TNSS- og VAS-scorer, og en reduksjon i serum sST2-nivåer. Pasienter som oppfylte disse kriteriene ble klassifisert som respondenter; de som ikke oppfylte terskelen ble ansett som ikke-respondenter.