Serum sST2/ miR-223 som en dubbel biomarkör för sjukdomsaktivitet & klinisk effekt av SLIT vid HDM-inducerad allergisk rinit

Lösligt undertryckande av tumorigenicitet 2 (sST2), en lockbete-receptor för interleukin-33 (IL-33), involverad i allergisk inflammation. Syfte: Denna studie undersökte serum sST2 som en biomarkör för sjukdomsaktivitet och för att förutsäga kliniskt svar på sublingual immunterapi (SLIT) hos patienter med husdammjäll (HDM) inducerad AR

1:a fasen: En fall-kontrollstudie som genomfördes över 3 månader vid institutionen för medicinsk mikrobiologi och immunologi, medicinska fakulteten, Zagazig University, i samarbete med allergienheten vid Zagazig University Hospitals från februari till maj 2025. 2:a fasen en interventionsstudie (kvasi-experimentell) för (MSAR-patienter): genomförd över 6 månader.

Studiepopulation, inklusions- och exklusionskriterier Berättigade deltagare var 14 år eller äldre med en diagnos av HDM-inducerad AR och dess inverkan på astma (ARIA) riktlinjer. Patienterna krävdes ha ihållande måttliga till svåra symptom i minst två år och vara villiga att påbörja och fortsätta SLIT i sex månader. Exklusionskriterier inkluderade förekomst av autoimmuna eller kroniska inflammatoriska tillstånd, svår astma eller annan lungsjukdom, systemisk kortikosteroid- eller immunosuppressiv behandling inom fyra veckor före deltagandet, graviditet eller amning och vägran att ge informerat samtycke. Friska, ålders- och könsmatchade individer utan tidigare allergisk sjukdom och med negativa hudtestresultat (SPT) rekryterades som kontroller.

Urvalsstorlek:

Urvalsstorleken beräknades med open epi info enligt följande genomsnittliga sST2-nivå bland AR-fall jämfört med kontroll var 19,8±7,5 jämfört med 14,3±6,9 (ref.) med studiens styrka 80%, ci 95%, fall: kontroll 1:1, den minsta erforderliga urvalsstorleken var 27 deltagare per grupp. Dock kunde vi rekrytera 54 deltagare i varje grupp, alla inkluderades i den slutliga analysen. Deltagarna valdes med en enkel slumpmässig urvalsteknik enligt de fördefinierade inklusionskriterierna.

• Kliniska och laboratorieprocedurer
• Baslinjebedömning Alla deltagare genomgick en detaljerad klinisk bedömning, inklusive demografiska data, sjukdomens varaktighet, kroppsmassaindex (BMI) och tidigare behandlingshistorik.
• Symtombedömning Symptomens svårighetsgrad utvärderades med TNSS, som inkluderar fyra parametrar - rinnande näsa, näsförstoppning, näskli och nysningar - var och en bedömd på en skala från 0 till 4, för en maximal poäng på 16. En 10 cm visuell analog skala (VAS) användes också för att kvantifiera den totala symptombördan.
• Hudtestning (SPT) SPT utfördes med standardiserade allergenextrakt, inklusive Dermatophagoides pteronyssinus och D. farinae. Histamin och saltlösning fungerade som positiva respektive negativa kontroller. En kvaddiameter på ≥3 mm jämfört med den negativa kontrollen ansågs positiv.
• Immunologisk markör och sST2-mätning Venös blodprov togs från alla deltagare vid baslinjen för att bestämma serum eosinofiler, totala immunglobulin E (IgE)-nivåer och husdammjällspecifikt HDM-IgE (kU/l) mätt med enzymkopplad immunadsorberande analys (ELISA) enligt tillverkarens protokoll (Chemus Bioscience, USA).

sST2-koncentrationer kvantifierades med en kommersiell ELISA-kit (Elabscience, Kat nr E-EL-H6082). För patienter som genomgick SLIT samlades ytterligare serumprover in efter sex månaders behandling. Alla mätningar utfördes i dubbel. Laboratoriepersonal som utförde analyserna var förblindade för den kliniska informationen och provtagningsögonblicket.

- Detektion av microRNA-223 Expressionsnivå via kvantitativ polymeraskedjereaktion (qRT-PCR): MicroRNA extraherades med kommersiella miRNeasy Serum/Plasma Kits (Qiagen, Tyskland), enligt tillverkarens instruktioner. Efter extrahering revers transkriberades microRNA med revers transkriptionskits (miScript II RT Kit, Qiagen, Tyskland) enligt tillverkarens instruktioner. Sedan inkuberades den i ett torrbadsblock (Rocker Sahara 320 torrbadsvärmeblock, Rocker Scientific, Taiwan), initialt vid 37°C i 60 min, följt av en andra inkubering vid 95°C i 5 min för att inaktivera miScript RT. Därefter förvarades reaktionsblandningen vid -80°C. Kvantitativ bestämning av mogen miR-223 utfördes med målspecifika miScript Primer Assays med kommersiella kit (miScript SYBR Green real-time PCR Kit, Qiagen, Tyskland), enligt tillverkarens instruktioner. Mänskligt RNU6B (RNU6-2) användes som referensgen. Efter det initiala aktiveringssteget för HotStar Taq DNA Polymerase i 15 min vid 95°C, kördes real-time PCR-reaktionerna i 40 cykler av varje av en denaturering i 15 s vid 95°C, annealing i 30 s vid 55°C och förlängning i 30 s vid 70°C. Stratagene Mx3005P-plattformsprogramvaran (Agilent Technologies, USA) användes för att bestämma tröskelcykel (Ct)-värdet. Delta-delta Ct-metodformeln användes för att uppskatta förändringarna i miR-223-uttryck.

- Interventionsfas för (MSAR-patienter) Sublingual immunterapi (SLIT) Protokoll Patienterna fick standardiserad daglig SLIT innehållande HDM-extrakt under en period av sex månader. Administreringen inleddes under klinisk övervakning och patienterna övervakades månadsvis för följsamhet och biverkningar. Det terapeutiska svaret utvärderades efter sex månader baserat på ett sammansatt utfall: en minskning med minst 30% i det kombinerade symptom- och läkemedelsbetyget, förbättring i TNSS- och VAS-poäng och en minskning i serum sST2-nivåer. Patienter som uppfyllde dessa kriterier klassificerades som svarande; de som inte uppfyllde tröskeln ansågs som icke-svarande.