血清 sST2/miR-223 作为屋尘螨诱导变应性鼻炎疾病活动度及舌下免疫治疗临床疗效的双重生物标志物

可溶性肿瘤抑制性2（sST2）是白细胞介素-33（IL-33）的一种诱饵受体，参与过敏性炎症。 目的：本研究探讨了血清sST2作为疾病活动性生物标志物以及预测屋尘螨（HDM）诱发变应性鼻炎（AR）患者对舌下免疫疗法（SLIT）临床反应的潜力。

第一阶段：一项病例对照研究，为期3个月，于2025年2月至5月在扎加齐格大学医学院医学微生物学与免疫学系与扎加齐格大学医院过敏科合作进行。 第二阶段：一项为期6个月的干预性研究（准实验性），针对中重度AR（MSAR）患者。

研究人群、纳入与排除标准 符合资格的参与者年龄为14岁及以上，根据变应性鼻炎及其对哮喘的影响（ARIA）指南诊断为HDM诱发的AR。 患者需有持续至少两年的中重度症状，并愿意开始并维持为期六个月的SLIT治疗。 排除标准包括存在自身免疫性或慢性炎症性疾病、严重哮喘或其他肺部疾病、入组前四周内接受过全身性皮质类固醇或免疫抑制治疗、妊娠或哺乳期，以及拒绝提供知情同意。 招募健康、年龄和性别匹配、无过敏性疾病史且皮肤点刺试验（SPT）结果阴性的个体作为对照组。

样本量：

样本量计算使用Open Epi Info软件，基于以下参数：AR病例与对照组的平均sST2水平分别为19.8±7.5与14.3±6.9 （参考文献），研究功效80%，置信区间95%，病例：对照组比例为1:1。计算得出每组最少需要27名参与者。 然而，我们成功招募了每组54名参与者，所有参与者均纳入最终分析。 参与者根据预定的纳入标准，采用简单随机抽样技术进行选择。

• 临床与实验室程序
• 基线评估 所有参与者均接受详细的临床评估，包括人口统计学数据、病程、身体质量指数（BMI）以及既往治疗史。
• 症状评分 症状严重程度使用总鼻部症状评分（TNSS）进行评估，该评分包括四个参数：流涕、鼻塞、鼻痒和打喷嚏，每项按0到4分评分，最高总分为16分。 同时使用10厘米视觉模拟量表（VAS）量化总体症状负担。
• 皮肤点刺试验（SPT） SPT使用标准化过敏原提取物进行，包括屋尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus）和粉尘螨（D. farinae）。 组胺和生理盐水分别作为阳性和阴性对照。 风团直径与阴性对照相比≥3毫米视为阳性。
• 免疫学标志物与sST2测量 在基线时采集所有参与者的静脉血样本，以测定血清嗜酸性粒细胞、总免疫球蛋白E（IgE）水平，以及通过酶联免疫吸附试验（ELISA）根据制造商（美国Chemus Bioscience）的说明书测量屋尘螨特异性HDM-IgE（kU/l）。

sST2浓度使用商业ELISA试剂盒（Elabscience，货号E-EL-H6082）进行定量。 对于接受SLIT治疗的患者，在治疗六个月后额外采集血清样本。 所有测量均重复进行。 进行检测的实验室人员对临床信息和采样时间设盲。

- 通过定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测microRNA-223表达水平：根据制造商说明书，使用商业miRNeasy血清/血浆试剂盒（德国Qiagen）提取microRNA。 提取后，根据制造商说明书，使用逆转录试剂盒（miScript II RT Kit，德国Qiagen）对microRNA进行逆转录。 然后，将其在干浴模块（Rocker Sahara 320干浴加热模块，台湾Rocker Scientific）中孵育，先在37°C孵育60分钟，随后在95°C孵育5分钟以灭活miScript RT。 之后，将反应混合物储存在-80°C。成熟miR-223的定量测定通过使用商业试剂盒（miScript SYBR Green实时PCR试剂盒，德国Qiagen）的靶标特异性miScript引物分析完成，操作依据制造商说明书。 以人RNU6B（RNU6-2）作为内参基因。 在HotStar Taq DNA聚合酶初始激活步骤（95°C，15分钟）后，实时PCR反应运行40个循环，每个循环包括：95°C变性15秒，55°C退火30秒，70°C延伸30秒。 使用Stratagene Mx3005P平台软件（美国Agilent Technologies）确定阈值循环（Ct）值。 利用ΔΔCt方法公式估算miR-223表达的倍数变化。

- 干预阶段（针对MSAR患者） 舌下免疫疗法（SLIT）方案 患者接受为期六个月的标准化每日SLIT，含有HDM提取物。 给药在临床监督下开始，患者每月接受监测以评估依从性和不良反应。 六个月后根据复合结局评估治疗反应：综合症状和用药评分降低至少30%，TNSS和VAS评分改善，以及血清sST2水平下降。 符合这些标准的患者被归类为应答者；未达到阈值的患者被视为无应答者。