El sST2 sérico y el miR-223 como biomarcador dual de la actividad de la enfermedad y la eficacia clínica de la inmunoterapia sublingual en la rinitis alérgica inducida por ácaros del polvo doméstico

La supresión soluble de tumorigenicidad 2 (sST2), un receptor señuelo de la interleucina-33 (IL-33), está implicada en la inflamación alérgica.
Objetivos: Este estudio exploró el sST2 sérico como biomarcador de la actividad de la enfermedad y para predecir la respuesta clínica a la inmunoterapia sublingual (SLIT) en pacientes con rinitis alérgica (RA) inducida por ácaros del polvo doméstico (HDM).

1ª etapa: Un estudio de casos y controles realizado durante 3 meses en el Departamento de Microbiología Médica e Inmunología, Facultad de Medicina, Universidad de Zagazig, en colaboración con la Unidad de Alergia de los Hospitales Universitarios de Zagazig de febrero a mayo de 2025.
2ª etapa: Un estudio de intervención (cuasi-experimental) para pacientes con RA inducida por HDM, realizado durante 6 meses.

Población del estudio, criterios de inclusión y exclusión: Los participantes elegibles tenían 14 años o más con un diagnóstico de RA inducida por HDM según las guías ARIA (Rinitis Alérgica y su Impacto en el Asma).
Se requirió que los pacientes tuvieran síntomas moderados a severos persistentes durante al menos dos años y estuvieran dispuestos a iniciar y mantener SLIT durante seis meses.
Los criterios de exclusión incluyeron la presencia de enfermedades autoinmunes o inflamatorias crónicas, asma severa u otra enfermedad pulmonar, tratamiento con corticosteroides sistémicos o inmunosupresores dentro de las cuatro semanas previas al reclutamiento, embarazo o lactancia, y negativa a dar consentimiento informado.
Se reclutaron como controles individuos sanos, emparejados por edad y sexo, sin antecedentes de enfermedad alérgica y con resultados negativos en la prueba cutánea de punción (PCP).

Tamaño de la muestra:

El tamaño de la muestra se calculó utilizando OpenEpi Info según el siguiente nivel medio de sST2 entre los casos de RA frente a los controles: 19,8 ± 7,5 frente a 14,3 ± 6,9 (ref.) con una potencia del estudio del 80%, IC del 95%, relación caso:control 1:1. El tamaño de muestra mínimo requerido fue de 27 participantes por grupo.
Sin embargo, pudimos reclutar a 54 participantes en cada grupo, todos los cuales fueron incluidos en el análisis final.
Los participantes fueron seleccionados mediante una técnica de muestreo aleatorio simple según los criterios de inclusión predefinidos.

• Procedimientos Clínicos y de Laboratorio
• Evaluación Inicial: Todos los participantes se sometieron a una evaluación clínica detallada, que incluyó datos demográficos, duración de la enfermedad, índice de masa corporal (IMC) e historial de tratamientos previos.
• Puntuación de Síntomas: La gravedad de los síntomas se evaluó utilizando la Escala Total de Síntomas Nasales (TNSS), que incluye cuatro parámetros: rinorrea, congestión nasal, picor nasal y estornudos, cada uno puntuado en una escala de 0 a 4, para una puntuación máxima de 16.
  También se utilizó una Escala Visual Analógica (EVA) de 10 cm para cuantificar la carga general de síntomas.
• Prueba Cutánea de Punción (PCP): La PCP se realizó utilizando extractos alergénicos estandarizados, incluyendo Dermatophagoides pteronyssinus y D. farinae.
  La histamina y la solución salina sirvieron como controles positivo y negativo, respectivamente.
  Se consideró positivo un diámetro de pápula ≥3 mm en comparación con el control negativo.
• Medición del marcador inmunológico y sST2: Se recogieron muestras de sangre venosa de todos los participantes al inicio para determinar eosinófilos séricos, niveles totales de inmunoglobulina E (IgE) e IgE específica para ácaros del polvo doméstico (HDM-IgE, kU/l) medidos mediante ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) según el protocolo del fabricante (Chemus Bioscience, EE.UU.).

Las concentraciones de sST2 se cuantificaron utilizando un kit ELISA comercial (Elabscience, Cat. No. E-EL-H6082).
Para los pacientes sometidos a SLIT, se recogieron muestras de suero adicionales después de seis meses de terapia.
Todas las mediciones se realizaron por duplicado.
El personal de laboratorio que realizó los ensayos estaba cegado a la información clínica y al momento del muestreo.

- Detección del nivel de expresión de microARN-223 mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qRT-PCR): El microARN se extrajo mediante kits comerciales miRNeasy Serum/Plasma Kits (Qiagen, Alemania), según las instrucciones del fabricante.
Después de la extracción, el microARN se transcribió inversamente mediante kits de transcripción inversa (miScript II RT Kit, Qiagen, Alemania) según las instrucciones del fabricante.
Luego, se incubó en un bloque de baño seco (Rocker Sahara 320 dry bath heat block, Rocker Scientific, Taiwán), inicialmente a 37°C durante 60 min, seguido de una segunda incubación a 95°C durante 5 min para inactivar la miScript RT.
Después, la mezcla de reacción se almacenó a -80°C. La determinación cuantitativa del miR-223 maduro se realizó mediante ensayos de cebadores miScript específicos para el objetivo utilizando kits comerciales (miScript SYBR Green real-time PCR Kit, Qiagen, Alemania), según las instrucciones del fabricante.
Se utilizó RNU6B humano (RNU6-2) como gen de referencia.
Después del paso de activación inicial de la HotStar Taq DNA Polymerase durante 15 min a 95°C, las reacciones de PCR en tiempo real se ejecutaron durante 40 ciclos, cada uno consistente en una desnaturalización durante 15 s a 95°C, hibridación durante 30 s a 55°C y extensión durante 30 s a 70°C.
Se utilizó el software de la plataforma Stratagene Mx3005P (Agilent Technologies, EE.UU.) para determinar el valor del ciclo umbral (Ct).
Se utilizó la fórmula del método delta-delta Ct para estimar los cambios en la expresión de miR-223.

- Etapa de intervención para pacientes con RA inducida por HDM: Protocolo de Inmunoterapia Sublingual (SLIT): Los pacientes recibieron SLIT diaria estandarizada que contenía extractos de HDM durante un período de seis meses.
La administración comenzó bajo supervisión clínica, y los pacientes fueron monitorizados mensualmente para evaluar la adherencia y los efectos adversos.
La respuesta terapéutica se evaluó después de seis meses basándose en un resultado compuesto: una reducción de al menos el 30% en la puntuación combinada de síntomas y medicación, mejora en las puntuaciones TNSS y EVA, y una disminución en los niveles séricos de sST2.
Los pacientes que cumplían estos criterios se clasificaron como respondedores; aquellos que no alcanzaban el umbral se consideraron no respondedores.