혈청 sST2/ miR-223을 HDM 유발 알레르기 비염에서 질병 활동도 및 SLIT 임상 효능의 이중 바이오마커로

알레르기 염증에 관여하는 인터루킨-33(IL-33)의 디코이 수용체인 용해성 종양형성 억제 2(sST2)는 알레르기 염증에 관여합니다. 목적: 본 연구는 집먼지진드기(HDM) 유발 알레르기 비염(AR) 환자에서 질병 활동성의 바이오마커 및 설하 면역요법(SLIT)에 대한 임상적 반응 예측을 위한 혈청 sST2를 탐구했습니다.

1단계: 2025년 2월부터 5월까지 Zagazig 대학병원 알레르기 유닛과 협력하여 Zagazig 대학 의과대학 의학미생물학 및 면역학과에서 3개월 동안 수행된 사례-대조군 연구입니다. 2단계: (MSAR 환자 대상) 6개월 동안 수행된 중재 연구(준실험).

연구 대상, 포함 및 배제 기준: 적격 참가자는 HDM 유발 AR 및 천식에 미치는 영향(ARIA) 지침으로 진단된 14세 이상이었습니다. 환자는 최소 2년 동안 지속적인 중등도에서 중증 증상을 보이며 6개월 동안 SLIT를 시작하고 유지할 의사가 있어야 했습니다. 배제 기준에는 자가면역 또는 만성 염증성 질환, 중증 천식 또는 기타 폐질환, 등록 4주 전 전신 코르티코스테로이드 또는 면역억제 치료, 임신 또는 수유, 사전 동의서 제공 거부가 포함되었습니다. 알레르기 질환 병력이 없고 피부 단자 검사(SPT) 결과가 음성인 건강한 연령 및 성별 일치 개인을 대조군으로 모집했습니다.

표본 크기:

표본 크기는 AR 환자 대 대조군 간 평균 sST2 수준이 19.8±7.5 대 14.3±6.9인 점을 고려하여 open epi info를 사용하여 계산되었습니다. (참고문헌) 연구 검정력 80%, 신뢰구간 95%, 환자:대조군 1:1 기준, 그룹당 최소 필요 표본 크기는 27명이었습니다. 그러나 각 그룹에서 54명의 참가자를 모집할 수 있었으며, 이들 모두 최종 분석에 포함되었습니다. 참가자는 사전 정의된 포함 기준에 따라 단순 무작위 표집 기법을 사용하여 선정되었습니다.

• 임상 및 실험실 절차
• 기초 평가: 모든 참가자는 인구통계학적 데이터, 질병 기간, 체질량 지수(BMI) 및 이전 치료력을 포함한 상세한 임상 평가를 받았습니다.
• 증상 점수화: 증상 중증도는 4가지 매개변수(콧물, 코막힘, 코 가려움, 재채기)를 각각 0~4점 척도로 평가하여 최대 16점을 부여하는 TNSS를 사용하여 평가했습니다. 전반적인 증상 부담을 정량화하기 위해 10cm 시각 아날로그 척도(VAS)도 사용되었습니다.
• 피부 단자 검사(SPT): 표준화된 알레르겐 추출물(집먼지진드기(Dermatophagoides pteronyssinus 및 D. farinae))을 사용하여 SPT를 수행했습니다. 히스타민과 생리식염수가 각각 양성 및 음성 대조군으로 사용되었습니다. 음성 대조군 대비 팽진 직경 ≥3mm를 양성으로 간주했습니다.
• 면역학적 지표 및 sST2 측정: 기초 시점에서 모든 참가자로부터 정맥혈 샘플을 채취하여 제조사 프로토콜(Chemus Bioscience, USA)에 따라 효소면역측정법(ELISA)으로 측정한 혈청 호산구, 총 면역글로불린 E(IgE) 수준 및 집먼지진드기 특이적 HDM-IgE(kU/l)를 확인했습니다.

sST2 농도는 상용 ELISA 키트(Elabscience, Cat No. E-EL-H6082)를 사용하여 정량화했습니다. SLIT를 받는 환자의 경우 치료 6개월 후 추가 혈청 샘플을 채취했습니다. 모든 측정은 이중으로 수행되었습니다. 검사를 수행한 실험실 인원은 임상 정보 및 샘플링 시간에 대해 맹검 상태였습니다.

- 정량적 중합효소 연쇄반응(qRT-PCR)을 통한 microRNA-223 발현 수준 검출: 제조사 지침에 따라 상용 miRNeasy Serum/Plasma Kits(Qiagen, Germany)로 MicroRNA를 추출했습니다. 추출 후, microRNA는 제조사 지침에 따라 역전사 키트(miScript II RT Kit, Qiagen, Germany)로 역전사되었습니다. 그런 다음 건조욕 블록(Rocker Sahara 320 dry bath heat block, Rocker Scientific, Taiwan)에서 먼저 37°C에서 60분 동안, 이어서 miScript RT를 비활성화하기 위해 95°C에서 5분 동안 두 번째 배양했습니다. 이후 반응 혼합물을 -80°C에 보관했습니다.성숙 miR-223의 정량적 측정은 제조사 지침에 따라 상용 키트(miScript SYBR Green 실시간 PCR 키트, Qiagen, Germany)를 사용한 표적 특이적 miScript Primer Assays로 수행되었습니다. 인간 RNU6B(RNU6-2)를 하우스키핑 유전자로 사용했습니다. HotStar Taq DNA 중합효소의 초기 활성화 단계(95°C에서 15분) 후, 실시간 PCR 반응을 95°C에서 15초 변성, 55°C에서 30초 어닐링, 70°C에서 30초 신장의 40사이클로 수행했습니다. Stratagene Mx3005P 플랫폼 소프트웨어(Agilent Technologies, USA)를 사용하여 역치 주기(Ct) 값을 확인했습니다. 델타-델타 Ct 방법 공식을 사용하여 miR-223 발현의 배수 변화를 추정했습니다.

- (MSAR 환자 대상) 중재 단계: 설하 면역요법(SLIT) 프로토콜: 환자는 6개월 동안 HDM 추출물을 함유한 표준화된 일일 SLIT를 받았습니다. 투여는 임상 감독 하에 시작되었으며, 환자는 순응도 및 부작용에 대해 월별 모니터링되었습니다. 치료 반응은 6개월 후 복합 결과(증상 및 약물 점수의 최소 30% 감소, TNSS 및 VAS 점수 개선, 혈청 sST2 수준 감소)를 기반으로 평가되었습니다. 이 기준을 충족하는 환자는 반응군으로 분류되었으며, 기준을 충족하지 못한 환자는 비반응군으로 간주되었습니다.