Sérum sST2/miR-223 comme biomarqueur double de l'activité de la maladie et de l'efficacité clinique de l'immunothérapie sublinguale dans la rhinite allergique induite par les acariens

La suppression soluble de la tumorigénicité 2 (sST2), un récepteur leurre de l'interleukine-33 (IL-33), impliquée dans l'inflammation allergique. Objectifs : Cette étude a exploré le sST2 sérique comme biomarqueur de l'activité de la maladie et pour prédire la réponse clinique à l'immunothérapie sublinguale (SLIT) chez les patients atteints de rhinite allergique (RA) induite par les acariens de la poussière domestique (HDM).

1ère étape : Une étude cas-témoins menée sur 3 mois au Département de microbiologie médicale et d'immunologie, Faculté de médecine, Université de Zagazig, en collaboration avec l'Unité d'allergologie des Hôpitaux universitaires de Zagazig de février à mai 2025. 2ème étape : Une étude interventionnelle (quasi expérimentale) pour (patients MSAR) : menée sur 6 mois.

Population de l'étude, critères d'inclusion et d'exclusion : Les participants éligibles avaient 14 ans ou plus avec un diagnostic de RA induite par HDM selon les directives de l'Impact de la Rhinite Allergique sur l'Asthme (ARIA). Les patients devaient présenter des symptômes persistants modérés à sévères depuis au moins deux ans et être prêts à initier et maintenir la SLIT pendant six mois. Les critères d'exclusion comprenaient la présence de maladies auto-immunes ou inflammatoires chroniques, un asthme sévère ou une autre maladie pulmonaire, un traitement par corticostéroïdes systémiques ou immunosuppresseurs dans les quatre semaines précédant l'inclusion, la grossesse ou l'allaitement, et le refus de donner un consentement éclairé. Des individus sains, appariés par âge et sexe, sans antécédents de maladie allergique et avec des résultats négatifs au test cutané (SPT) ont été recrutés comme témoins.

Taille de l'échantillon :

La taille de l'échantillon a été calculée en utilisant Open Epi Info selon les niveaux moyens de sST2 suivants parmi les cas de RA par rapport aux témoins : 19,8 ± 7,5 versus 14,3 ± 6,9 (réf.) avec une puissance de l'étude de 80%, un IC à 95%, un ratio cas:témoin de 1:1. La taille minimale requise de l'échantillon était de 27 participants par groupe. Cependant, nous avons pu recruter 54 participants dans chaque groupe, tous inclus dans l'analyse finale. Les participants ont été sélectionnés selon une technique d'échantillonnage aléatoire simple basée sur les critères d'inclusion prédéfinis.

• Procédures cliniques et de laboratoire
• Évaluation initiale : Tous les participants ont subi une évaluation clinique détaillée, incluant les données démographiques, la durée de la maladie, l'indice de masse corporelle (IMC) et les antécédents de traitement.
• Score des symptômes : La sévérité des symptômes a été évaluée en utilisant le TNSS, qui comprend quatre paramètres - rhinorrhée, congestion nasale, démangeaisons nasales et éternuements - chacun noté sur une échelle de 0 à 4, pour un score maximum de 16. Une échelle visuelle analogique (EVA) de 10 cm a également été utilisée pour quantifier la charge globale des symptômes.
• Test cutané (SPT) : Le SPT a été réalisé en utilisant des extraits d'allergènes standardisés, incluant Dermatophagoides pteronyssinus et D. farinae. L'histamine et la solution saline ont servi respectivement de témoins positif et négatif. Un diamètre de papule ≥3 mm par rapport au témoin négatif a été considéré comme positif.
• Marqueur immunologique et mesure du sST2 : Des échantillons de sang veineux ont été prélevés chez tous les participants au départ pour déterminer les éosinophiles sériques, les niveaux totaux d'immunoglobuline E (IgE) et les IgE spécifiques aux acariens HDM-IgE (kU/l) mesurés par test immuno-enzymatique (ELISA) selon le protocole du fabricant (Chemus Bioscience, USA).

Les concentrations de sST2 ont été quantifiées en utilisant un kit ELISA commercial (Elabscience, Cat No. E-EL-H6082). Pour les patients suivant la SLIT, des échantillons de sérum supplémentaires ont été collectés après six mois de thérapie. Toutes les mesures ont été effectuées en double. Le personnel de laboratoire effectuant les dosages était en aveugle quant aux informations cliniques et au moment du prélèvement.

- Détection du niveau d'expression de la microARN-223 par réaction en chaîne par polymérase quantitative (qRT-PCR) : L'ARN micro a été extrait par des kits commerciaux miRNeasy Serum/Plasma Kits (Qiagen, Allemagne), selon les instructions du fabricant. Après extraction, l'ARN micro a été transcrit de manière inverse par des kits de transcription inverse (miScript II RT Kit, Qiagen, Allemagne) selon les instructions du fabricant. Ensuite, il a été incubé dans un bloc chauffant sec (Rocker Sahara 320 dry bath heat block, Rocker Scientific, Taiwan), initialement à 37 °C pendant 60 min, suivi d'une deuxième incubation à 95 °C pendant 5 min pour inactiver la miScript RT. Après cela, le mélange réactionnel a été stocké à -80 °C. La détermination quantitative du miR-223 mature a été réalisée par des essais d'amorces miScript spécifiques à la cible en utilisant des kits commerciaux (miScript SYBR Green real-time PCR Kit, Qiagen, Allemagne), selon les instructions du fabricant. Le gène humain RNU6B (RNU6-2) a été utilisé comme gène de ménage. Après l'étape d'activation initiale de la HotStar Taq ADN polymérase pendant 15 min à 95 °C, les réactions de PCR en temps réel ont été exécutées pendant 40 cycles, chacun comprenant une dénaturation de 15 s à 95 °C, une hybridation de 30 s à 55 °C, et une extension de 30 s à 70 °C. Le logiciel de la plateforme Stratagene Mx3005P (Agilent Technologies, USA) a été utilisé pour déterminer la valeur du cycle seuil (Ct). La formule de la méthode delta-delta Ct a été utilisée pour estimer les changements en fold de l'expression du miR-223.

- Étape d'intervention pour (patients MSAR) Protocole d'Immunothérapie Sublinguale (SLIT) : Les patients ont reçu une SLIT quotidienne standardisée contenant des extraits d'HDM pendant une période de six mois. L'administration a débuté sous supervision clinique, et les patients ont été surveillés mensuellement pour l'adhésion et les effets indésirables. La réponse thérapeutique a été évaluée après six mois sur la base d'un critère composite : une réduction d'au moins 30 % du score combiné symptômes-médicaments, une amélioration des scores TNSS et EVA, et une diminution des niveaux sériques de sST2. Les patients répondant à ces critères ont été classés comme répondeurs ; ceux ne répondant pas au seuil ont été considérés comme non-répondeurs.