Serum sST2/miR-223 als een dubbele biomarker voor ziekteactiviteit en klinische effectiviteit van SLIT bij huisstofmijt-geïnduceerde allergische rhinitis

Soluble suppression of tumorigenicity 2 (sST2), een decoyreceptor van interleukine-33 (IL-33), betrokken bij allergische ontsteking. Doelstellingen: Deze studie onderzocht serum sST2 als biomarker voor ziekteactiviteit en voor het voorspellen van de klinische respons op sublinguale immunotherapie (SLIT) bij patiënten met huisstofmijt (HDM)-geïnduceerde AR.

1e fase: Een case-control studie uitgevoerd gedurende 3 maanden bij de afdeling Medische Microbiologie en Immunologie, Faculteit Geneeskunde, Zagazig Universiteit, in samenwerking met de Allergie-eenheid van Zagazig Universitaire Ziekenhuizen van februari tot mei 2025. 2e fase een interventiestudie (quasi-experimenteel) voor (MSAR-patiënten): uitgevoerd gedurende 6 maanden.

Studiepopulatie, inclusie- en exclusiecriteria Geschikte deelnemers waren 14 jaar of ouder met een diagnose van HDM-geïnduceerde AR volgens de ARIA-richtlijnen. Patiënten moesten persistente matige tot ernstige symptomen hebben gedurende ten minste twee jaar en bereid zijn om SLIT te starten en vol te houden gedurende zes maanden. Exclusiecriteria omvatten de aanwezigheid van auto-immuun- of chronische ontstekingsaandoeningen, ernstig astma of andere longziekten, systemische corticosteroïde- of immunosuppressieve therapie binnen vier weken voorafgaand aan inschrijving, zwangerschap of borstvoeding, en weigering om geïnformeerde toestemming te verlenen. Gezonde, leeftijds- en geslacht-gematchende individuen zonder voorgeschiedenis van allergische ziekte en met negatieve huidpriktest (SPT)-resultaten werden gerekruteerd als controles.

Steekproefomvang:

De steekproefomvang werd berekend met open epi info volgens het volgende gemiddelde sST2-niveau onder AR-gevallen versus controle was 19,8±7,5 versus 14,3±6,9 (ref.) bij een studiepower van 80%, betrouwbaarheidsinterval 95%, geval: controle 1:1. De minimaal vereiste steekproefomvang was 27 deelnemers per groep. Echter, we konden 54 deelnemers in elke groep rekruteren, die allemaal werden opgenomen in de uiteindelijke analyse. Deelnemers werden geselecteerd met een eenvoudige willekeurige steekproeftechniek volgens de vooraf gedefinieerde inclusiecriteria.

• Klinische en laboratoriumprocedures
• Baselinebeoordeling Alle deelnemers ondergingen een gedetailleerde klinische beoordeling, inclusief demografische gegevens, ziekteduur, body mass index (BMI) en eerdere behandelingsgeschiedenis.
• Symptoomscores Symptoomernst werd geëvalueerd met de TNSS, die vier parameters omvat - rinorroe, neusverstopping, neusjeuk en niezen - elk beoordeeld op een schaal van 0 tot 4, voor een maximale score van 16. Een 10-cm visuele analoge schaal (VAS) werd ook gebruikt om de totale symptoomlast te kwantificeren.
• Huidpriktesten (SPT) SPT werd uitgevoerd met gestandaardiseerde allergeenextracten, inclusief Dermatophagoides pteronyssinus en D. farinae. Histamine en zoutoplossing dienden respectievelijk als positieve en negatieve controles. Een kwaddeldiameter van ≥3 mm vergeleken met de negatieve controle werd als positief beschouwd.
• Immunologische marker en sST2-meting Veneuze bloedmonsters werden van alle deelnemers bij baseline verzameld om serum-eosinofielen, totale immunoglobuline E (IgE)-niveaus en huisstofmijt-specifieke HDM-IgE (kU/l) te bepalen, gemeten door enzymgekoppelde immunosorbent assay (ELISA) volgens het protocol van de fabrikant (Chemus Bioscience, USA).

sST2-concentraties werden gekwantificeerd met een commerciële ELISA-kit (Elabscience, Cat No. E-EL-H6082). Voor patiënten die SLIT ondergingen, werden aanvullende serummonsters verzameld na zes maanden therapie. Alle metingen werden in duplo uitgevoerd. Laboratoriumpersoneel dat de assays uitvoerde, was geblindeerd voor de klinische informatie en bemonsteringstijd.

- Detectie van microRNA-223-expressieniveau via kwantitatieve polymerasekettingreactie (qRT-PCR): MicroRNA werd geëxtraheerd door commerciële miRNeasy Serum/Plasma Kits (Qiagen, Duitsland), volgens de instructies van de fabrikant. Na extractie werd microRNA omgekeerd getranscribeerd door reverse-transcriptiekits (miScript II RT Kit, Qiagen, Duitsland) volgens de instructies van de fabrikant. Vervolgens werd het geïncubeerd in een droogbadblok (Rocker Sahara 320 droogbad warmteblok, Rocker Scientific, Taiwan), eerst bij 37°C gedurende 60 min, gevolgd door een tweede incubatie bij 95°C gedurende 5 min om miScript RT te inactiveren. Daarna werd het reactiemengsel opgeslagen bij -80°C. Kwantitatieve bepaling van volwassen miR-223 werd uitgevoerd door target-specifieke miScript Primer Assays met behulp van commerciële kits (miScript SYBR Green real-time PCR Kit, Qiagen, Duitsland), volgens de instructies van de fabrikant. Menselijk RNU6B (RNU6-2) werd gebruikt als een huishoudgen. Na de initiële activatiestap van HotStar Taq DNA-polymerase gedurende 15 min bij 95°C, werden de real-time PCR-reacties gedurende 40 cycli uitgevoerd, elk bestaande uit denaturatie gedurende 15 s bij 95°C, annealing gedurende 30 s bij 55°C en extensie gedurende 30 s bij 70°C. De Stratagene Mx3005P-platformsoftware (Agilent Technologies, USA) werd gebruikt om de drempelcyclus (Ct)-waarde te bepalen. De delta-delta Ct-methodeformule werd gebruikt om de vouwveranderingen van miR-223-expressie te schatten.

- Interventiefase voor (MSAR-patiënten) Sublinguale Immunotherapie (SLIT)-protocol Patiënten ontvingen gestandaardiseerde dagelijkse SLIT met HDM-extracten gedurende een periode van zes maanden. Toediening begon onder klinisch toezicht, en patiënten werden maandelijks gecontroleerd op therapietrouw en bijwerkingen. De therapeutische respons werd na zes maanden geëvalueerd op basis van een samengestelde uitkomst: een vermindering van ten minste 30% in de gecombineerde symptoom- en medicatiescore, verbetering in TNSS- en VAS-scores, en een daling in serum sST2-niveaus. Patiënten die aan deze criteria voldeden, werden geclassificeerd als responders; degenen die de drempel niet bereikten, werden beschouwd als non-responders.