根尖性歯周炎におけるバイオマーカー

サンプルサイズはG*Power v3.1（ハインリッヒ・ハイネ大学デュッセルドルフ校）を用いて計算されました。 有意水準0.05、検出力0.90に基づき、各群18サンプルで十分であると判断されました。 潜在的な脱落を考慮し、合計66名の患者を組み入れることが計画されています。

組み入れ基準：

18～35歳の男性患者。上顎または下顎の切歯、犬歯、または単根・単根管の小臼歯における慢性根尖性歯周炎。少なくとも4年前に実施された根管治療の既往。根尖病変（＜1 cm）の存在で、Orstavik PAIスコアが3または4。倫理的遵守はインフォームド・コンセントにより確保され、患者は研究について説明を受け、参加を希望する患者は自発的なインフォームド・コンセント書に署名します。 患者の人口統計（氏名、年齢、性別）、連絡先情報、歯番号、臨床症状・所見は症例報告書（CRF）に記録されます。

除外基準：

抗生物質予防投与を必要とする患者、糖尿病または血液疾患を有する患者、または過去1か月以内に抗生物質・抗炎症薬を使用した患者。 妊娠中の患者、重度のプラーク・歯石、歯肉発赤・出血、重度の歯肉炎、広汎性歯周炎、または歯周ポケット深さ＞3 mmを有する歯。 瘻孔、内部・外部吸収、腫脹、または触診痛を有する歯も除外されます。

治療プロトコル 局所麻酔［1.8 mL 4% アルティカイン塩酸塩に1:100,000 エピネフリン（ウルトラカインDSフォルテ）］を投与します。 歯はラバーダム（OpalDam, Ultradent）を用いて隔離します。 無菌操作は30% H₂O₂および2.5% NaOCl（Werax）を用いて維持されます。 窩洞形成後、グッタペルカの歯冠側1/3を#3および#4ゲイツグリッデンドリルで除去します。 全ての処置は歯科用手術顕微鏡（Carl Zeiss Meditec AG）による高倍率下で行われます。作業長（WL）は電子根管長測定器（Morita Root ZX Mini）で決定されます。 根管形成はReciproc R25およびR50ファイル（VDW）をWLで使用して完了します。 グッタペルカ残渣がX線写真で確認される場合、大型のハンドKファイルを用いて追加の形成を行います。 根管は各ファイル交換後に30ゲージサイドベント針（NaviTip）を用いて2.5% NaOCl 2 mLで洗浄します。 根尖開放性を維持するため再形成を行います。NaOClを不活性化するため0.5% チオ硫酸ナトリウムを使用し、その後5 mLの生理食塩水で洗浄します。 スミア層は17% EDTA 5 mLおよび最終的な5 mL生理食塩水洗浄で除去します。 患者はオンラインランダマイザー（www.randomizer.org）を用いて3つの最終洗浄群（各群n=22）に無作為に割り付けられます。

従来型シリンジ洗浄（CSI）：2.5% NaOCl 10 mLを30G針でWLより1 mm手前に配置し、1分間適用します。 超音波洗浄活性化（UI）：2.5% NaOCl 10 mLを超音波デバイス（EMS miniPiezon）およびKファイルチップ（#25）を用いて50%出力で上下運動を加えながら1分間適用します。 SWEEPS（衝撃波増強放出光音響ストリーミング）：Er:YAGレーザー（LightWalker AT, Fotona）2940 nm、50 μsパルス幅、H14ハンドピース、SWEEPSモード（0.3 W、15 Hz、20 mJ）。 600 μmファイバーチップ（PIPS 600/9）を窩洞内に静止保持し、2.5% NaOCl 10 mLを4回の15秒サイクルで活性化します。

第1セッション後、水酸化カルシウム製剤を適用し、窩洞を無菌テフロンテープおよびリン酸亜鉛セメントで封鎖します。 1週間後の第2セッションで、隔離と無菌操作を繰り返し、根管治療と永久コンポジットレジン修復を完了する前に第2回根尖滲出液（PAE）サンプルを採取します。

根尖サンプリング手順：最終洗浄後、根管は無菌ペーポイントで乾燥させます。 サンプリングは#20無菌ペーポイントを根尖孔を2 mm越えて60秒間留置して行います。 ペーポイントの根尖側4 mmを無菌ハサミで切断し、無菌エッペンドルフチューブに入れます。 このプロセスを3回繰り返します。

ELISA分析 -80℃で保存されたサンプルを解凍し、各チューブにダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（DPBS、pH 7.2）300 μLを添加します。 サンプルを25 Hzで1分間ボルテックスします。 組織均質化は超音波ホモジナイザー（Sonics Vibra-cell）で1分間行い、その後+4℃で5000 rpm、5分間遠心分離します。 TNF-α、IL-1β、およびMMP-9レベルをELISAキットを用いて450 nm吸光度で測定します。

統計分析 データはIBM SPSS Statistics v20を用いて分析されます。 線形回帰分析により、バイオマーカー変化率に影響を与える要因（治療群、性別、歯番号、年齢）を特定します。 データが正規分布しない場合、治療前後比較にはウィルコクソン検定を、群間比較にはクラスカル・ウォリス検定を使用します。 年齢分布はクラスカル・ウォリス検定で、性別・歯分布はカイ二乗検定で分析されます。 有意水準は（p ＜ 0.05）と設定されます。