Biomarcadores en la Periodontitis Apical

El tamaño de la muestra se calculó utilizando G*Power v3.1 (Heinrich Heine University, Düsseldorf). Basándose en un nivel de significación de 0,05 y una potencia de 0,90, se determinó que 18 muestras por grupo eran suficientes. Teniendo en cuenta posibles abandonos, se planea incluir un total de 66 pacientes.

Criterios de inclusión:

Pacientes masculinos de 18 a 35 años. Periodontitis apical crónica en incisivos maxilares o mandibulares, caninos o premolares unirradiculares/uniconducto. Antecedentes de tratamiento de conductos realizado al menos hace 4 años. Presencia de una lesión periapical (<1 cm) con una puntuación PAI de Orstavik de 3 o 4. Se garantizará el cumplimiento ético mediante el consentimiento informado; se informará a los pacientes sobre el estudio y aquellos dispuestos a participar firmarán un formulario de consentimiento informado voluntario. Los datos demográficos del paciente (nombre, edad, género), información de contacto, número de diente y síntomas/hallazgos clínicos se registrarán en los formularios de reporte de casos (CRF).

Criterios de exclusión:

Pacientes que requieran profilaxis antibiótica, aquellos con diabetes o enfermedades hematológicas, o aquellos que hayan usado antibióticos/antiinflamatorios en el último mes. Pacientes embarazadas, dientes con placa/sarro abundante, enrojecimiento/sangrado gingival, gingivitis severa, periodontitis generalizada o profundidades de bolsa periodontal >3 mm. También se excluirán dientes con tractos sinusales, reabsorción interna/externa, hinchazón o dolor a la palpación. Protocolo de tratamiento Se administrará anestesia local [1,8 mL de clorhidrato de articaína al 4% con epinefrina 1:100.000 (Ultracain DS Forte)]. Los dientes se aislarán usando un dique de goma (OpalDam, Ultradent). Se mantendrá la asepsia usando H₂O₂ al 30% y NaOCl al 2,5% (Werax). Tras la preparación de la cavidad de acceso, el tercio coronal de la gutapercha se eliminará usando fresas Gates Glidden #3 y #4. Todos los procedimientos se realizarán bajo alta magnificación usando un microscopio dental (Carl Zeiss Meditec AG). La longitud de trabajo (LT) se determinará con un localizador apical electrónico (Morita Root ZX Mini). La instrumentación del conducto se completará usando limas Reciproc R25 y R50 (VDW) en la LT. Si restos de gutapercha son visibles radiográficamente, se realizará preparación adicional con limas K manuales de gran tamaño. Los conductos se irrigarán con 2 mL de NaOCl al 2,5% después de cada cambio de lima usando una aguja de punta lateral calibre 30 (NaviTip). Se realizará recapitulación para mantener la permeabilidad apical. Para inactivar el NaOCl, se usará tiosulfato de sodio al 0,5%, seguido de 5 mL de solución salina. La capa de smear se eliminará con 5 mL de EDTA al 17% y un enjuague final con 5 mL de solución salina. Los pacientes se asignarán aleatoriamente a tres grupos de irrigación final (n=22 por grupo) usando un aleatorizador en línea (www.randomizer.org). Irrigación con Jeringa Convencional (CSI): 10 mL de NaOCl al 2,5% aplicados durante 1 minuto usando una aguja 30G colocada 1 mm antes de la LT. Activación de Irrigación Ultrasónica (UI): 10 mL de NaOCl al 2,5% aplicados usando un dispositivo ultrasónico (EMS miniPiezon) y una punta de lima K (#25) al 50% de potencia con movimientos arriba y abajo durante 1 minuto. SWEEPS (Shock Wave Enhanced Emission Photoacoustic Streaming): láser Er:YAG (LightWalker AT, Fotona) a 2940 nm, duración de pulso 50 µs, pieza de mano H14, modo SWEEPS (0,3 W, 15 Hz, 20 mJ). Una punta de fibra de 600 µm (PIPS 600/9) se mantendrá estacionaria en la cavidad de acceso mientras se activan 10 mL de NaOCl al 2,5% en cuatro ciclos de 15 segundos. Tras la primera sesión, se aplicará medicación con hidróxido de calcio y la cavidad de acceso se sellará con cinta de teflón estéril y cemento de fosfato de zinc. Una semana después, en la segunda sesión, se repetirán el aislamiento y la asepsia, y se recolectarán segundas muestras de exudado periapical (PAE) antes de completar el tratamiento de conductos y la restauración permanente con resina compuesta.

Procedimiento de Muestreo Periapical: Después de la irrigación final, los conductos se secarán con puntas de papel estériles. El muestreo se realizará usando puntas de papel estériles #20 colocadas 2 mm más allá del foramen apical durante 60 segundos. Los 4 mm apicales de la punta de papel se cortarán con tijeras estériles y se colocarán en un tubo Eppendorf estéril. Este proceso se repetirá tres veces. Análisis ELISA Las muestras almacenadas a -80°C se descongelarán y se añadirán 300 µL de solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS, pH 7,2) a cada tubo. Las muestras se agitarán en vórtex a 25 Hz durante 1 minuto. La homogeneización del tejido se realizará usando un homogeneizador ultrasónico (Sonics Vibra-cell) durante 1 minuto, seguido de centrifugación a 5000 rpm durante 5 minutos a +4°C. Los niveles de TNF-α, IL-1β y MMP-9 se medirán usando kits ELISA a una absorbancia de 450 nm.

Análisis Estadístico Los datos se analizarán usando IBM SPSS Statistics v20. El análisis de regresión lineal identificará factores (grupo de tratamiento, género, número de diente, edad) que influyan en el cambio porcentual de biomarcadores. Si los datos no se distribuyen normalmente, se usará la prueba de Wilcoxon para comparaciones pre vs. postratamiento y la prueba de Kruskal-Wallis para comparaciones intergrupales. La distribución de edad se analizará mediante Kruskal-Wallis, y la distribución de género/diente mediante la prueba de Chi-cuadrado. La significación se establece en (p < 0,05).