치근단치주염의 생체표지자

표본 크기는 G*Power v3.1(하인리히 하이네 대학교, 뒤셀도르프)를 사용하여 계산되었습니다. 유의 수준 0.05와 검정력 0.90을 기준으로, 그룹당 18개의 샘플이 충분하다고 결정되었습니다. 잠재적 탈락자를 고려하여 총 66명의 환자를 포함할 계획입니다.

포함 기준:

18-35세 남성 환자. 상악 또는 하악 전치, 견치, 또는 단일근/단일관 구치부 치아의 만성 치근단 병변. 최소 4년 전에 시행된 근관 치료 병력. Orstavik PAI 점수가 3 또는 4인 치근단 병변(<1 cm)의 존재. 윤리적 준수는 사전 동의를 통해 보장될 것입니다; 환자들은 연구에 대해 설명을 듣고, 참여를 원하는 환자들은 자발적 사전 동의서에 서명할 것입니다. 환자 인구통계학적 정보(이름, 나이, 성별), 연락처 정보, 치아 번호 및 임상 증상/소견은 사례 보고서 양식(CRF)에 기록될 것입니다.

제외 기준:

항생제 예방 요법이 필요한 환자, 당뇨병 또는 혈액학적 질환을 가진 환자, 또는 지난 한 달 동안 항생제/항염증제를 사용한 환자. 임신한 환자, 심한 플라크/치석이 있는 치아, 잇몸 발적/출혈, 심한 치은염, 일반화된 치주염, 또는 치주낭 깊이 >3 mm인 경우. 누공이 있는 치아, 내부/외부 흡수, 부종, 또는 압통이 있는 치아 또한 제외될 것입니다. 치료 프로토콜 국소 마취 [1.8 mL 4% 아르티카인 HCl 및 1:100,000 에피네프린(Ultracain DS Forte)]가 투여될 것입니다. 치아는 러버 댐(OpalDam, Ultradent)을 사용하여 격리될 것입니다. 무균 상태는 30% H₂O₂ 및 2.5% NaOCl(Werax)을 사용하여 유지될 것입니다. 접근 공동 준비 후, 구타퍼차의 관상부 1/3은 #3 및 #4 Gates Glidden 드릴을 사용하여 제거될 것입니다. 모든 시술은 치과용 수술 현미경(Carl Zeiss Meditec AG)을 사용한 고배율 하에서 수행될 것입니다. 작업 길이(WL)는 전자적 첨단 위치 결정기(Morita Root ZX Mini)로 결정될 것입니다. 근관 기구 조작은 WL에서 Reciproc R25 및 R50 파일(VDW)을 사용하여 완료될 것입니다. 구타퍼차 잔여물이 방사선학적으로 보이는 경우, 대형 핸드 K-파일로 추가 준비가 수행될 것입니다. 근관은 각 파일 교체 후 30게이지 측면 배출 바늘(NaviTip)을 사용하여 2.5% NaOCl 2 mL로 세척될 것입니다. 첨단 개방성을 유지하기 위해 재관통이 수행될 것입니다. NaOCl을 비활성화하기 위해 0.5% 티오황산나트륨이 사용된 후, 생리식염수 5 mL가 사용될 것입니다. 스미어 레이어는 17% EDTA 5 mL 및 최종 생리식염수 5 mL 세척으로 제거될 것입니다. 환자는 온라인 무작위 배정기(www.randomizer.org)를 사용하여 세 개의 최종 세척 그룹(그룹당 n=22)에 무작위로 배정될 것입니다. 전통적 주사기 세척(CSI): 30G 바늘을 WL보다 1 mm 짧게 위치시켜 2.5% NaOCl 10 mL를 1분간 적용. 초음파 세척 활성화(UI): 초음파 장치(EMS miniPiezon) 및 K-파일 팁(#25)을 50% 출력으로 상하 운동하며 1분간 2.5% NaOCl 10 mL 적용. SWEEPS(충격파 강화 방출 광음향 스트리밍): Er:YAG 레이저(LightWalker AT, Fotona) 2940 nm, 50 μs 펄스 지속 시간, H14 핸드피스, SWEEPS 모드(0.3 W, 15 Hz, 20 mJ). 600 μm 광섬유 팁(PIPS 600/9)을 접근 공동에 고정한 상태에서 2.5% NaOCl 10 mL를 네 번의 15초 주기로 활성화. 첫 번째 세션 후, 수산화칼슘 약제를 적용하고, 접근 공동은 무균 테플론 테이프와 인산아연 시멘트로 밀봉될 것입니다. 일주일 후, 두 번째 세션에서 격리 및 무균 상태가 반복되고, 근관 치료 및 영구 복합 레진 수복을 완료하기 전에 두 번째 치근단 삼출액(PAE) 샘플이 채취될 것입니다.

치근단 샘플링 절차: 최종 세척 후, 근관은 무균 종이 포인트로 건조될 것입니다. 샘플링은 치근공을 2 mm 넘어서 위치시킨 #20 무균 종이 포인트를 60초간 사용하여 수행될 것입니다. 종이 포인트의 첨단 4 mm는 무균 가위로 절단되어 무균 Eppendorf 튜브에 넣어질 것입니다. 이 과정은 세 번 반복될 것입니다. ELISA 분석 -80°C에 저장된 샘플은 해동되고, 각 튜브에 Dulbecco's 인산 완충 생리식염수(DPBS, pH 7.2) 300 μL가 첨가될 것입니다. 샘플은 25 Hz에서 1분간 vortex 처리될 것입니다. 조직 균질화는 초음파 균질기(Sonics Vibra-cell)를 사용하여 1분간 수행된 후, +4°C에서 5000 rpm으로 5분간 원심분리될 것입니다. TNF-α, IL-1β 및 MMP-9 수준은 450 nm 흡광도에서 ELISA 키트를 사용하여 측정될 것입니다.

통계 분석 데이터는 IBM SPSS Statistics v20를 사용하여 분석될 것입니다. 선형 회귀 분석은 생체표지자 변화 백분율에 영향을 미치는 요인(치료 그룹, 성별, 치아 번호, 나이)을 확인할 것입니다. 데이터가 정규 분포를 따르지 않는 경우, 치료 전 대 치료 후 비교에는 Wilcoxon 검정이, 그룹 간 비교에는 Kruskal-Wallis 검정이 사용될 것입니다. 나이 분포는 Kruskal-Wallis를 통해, 성별/치아 분포는 카이제곱 검정을 통해 분석될 것입니다. 유의성은 (p < 0.05)로 설정됩니다.