Биомаркеры при апикальном периодонтите

Размер выборки был рассчитан с использованием G*Power v3.1 (Университет Генриха Гейне, Дюссельдорф). На основе уровня значимости 0,05 и мощности 0,90 было определено, что 18 образцов на группу достаточно. С учётом потенциального выбывания участников планируется включить в общей сложности 66 пациентов.

Критерии включения:

Пациенты мужского пола в возрасте 18–35 лет. Хронический апикальный периодонтит в резцах, клыках или однокорневых/одноканальных премолярах верхней или нижней челюсти. Анамнез эндодонтического лечения, проведённого не менее 4 лет назад. Наличие периапикального поражения (<1 см) с оценкой PAI по Орставику 3 или 4. Этическое соответствие будет обеспечено через информированное согласие; пациенты будут проинформированы об исследовании, и желающие принять участие подпишут добровольную форму информированного согласия. Демографические данные пациентов (имя, возраст, пол), контактная информация, номер зуба и клинические симптомы/находки будут записаны в картах наблюдения (CRF).

Критерии исключения:

Пациенты, требующие антибиотикопрофилактики, пациенты с диабетом или гематологическими заболеваниями, а также те, кто использовал антибиотики/противовоспалительные препараты в течение последнего месяца. Беременные пациентки, зубы с обильным налётом/зубным камнем, покраснением/кровоточивостью дёсен, тяжёлым гингивитом, генерализованным пародонтитом или глубиной пародонтальных карманов >3 мм. Также будут исключены зубы с синусными трактами, внутренней/внешней резорбцией, отёком или болезненностью при пальпации. Протокол лечения Местная анестезия [1,8 мл 4% артикаина HCl с 1:100 000 эпинефрином (Ultracain DS Forte)] будет проведена. Зубы будут изолированы с помощью коффердама (OpalDam, Ultradent). Асептика будет поддерживаться с использованием 30% H₂O₂ и 2,5% NaOCl (Werax). После препарирования полости доступа коронковая треть гуттаперчи будет удалена с использованием Gates Glidden боров №3 и №4. Все процедуры будут выполняться под высоким увеличением с использованием дентального операционного микроскопа (Carl Zeiss Meditec AG). Рабочая длина (WL) будет определена с помощью электронного апекслокатора (Morita Root ZX Mini). Инструментация каналов будет завершена с использованием файлов Reciproc R25 и R50 (VDW) на рабочей длине. Если остатки гуттаперчи будут видны рентгенологически, будет проведена дополнительная подготовка крупными ручными К-файлами. Каналы будут промываться 2 мл 2,5% NaOCl после каждой смены файла с использованием иглы 30G с боковой перфорацией (NaviTip). Будет выполнена рекапитуляция для поддержания апикальной проходимости. Для инактивации NaOCl будет использован 0,5% тиосульфат натрия, затем 5 мл физиологического раствора. Смазанный слой будет удалён с помощью 5 мл 17% ЭДТА и окончательного промывания 5 мл физиологического раствора. Пациенты будут случайным образом распределены в три группы финального промывания (n=22 на группу) с использованием онлайн-рандомизатора (www.randomizer.org). Традиционное шприцевое промывание (CSI): 10 мл 2,5% NaOCl применяется в течение 1 минуты с использованием иглы 30G, размещённой на 1 мм короче рабочей длины. Ультразвуковая активация промывания (UI): 10 мл 2,5% NaOCl применяется с использованием ультразвукового устройства (EMS miniPiezon) и наконечника К-файла (#25) на 50% мощности с движениями вверх-вниз в течение 1 минуты. SWEEPS (Shock Wave Enhanced Emission Photoacoustic Streaming): лазер Er:YAG (LightWalker AT, Fotona) на 2940 нм, длительность импульса 50 мкс, наконечник H14, режим SWEEPS (0,3 Вт, 15 Гц, 20 мДж). Наконечник волокна 600 мкм (PIPS 600/9) будет удерживаться неподвижно в полости доступа, пока 10 мл 2,5% NaOCl активируется в четырёх 15-секундных циклах. После первого сеанса будет наложено лекарство на основе гидроксида кальция, и полость доступа будет закрыта стерильной тефлоновой лентой и цинк-фосфатным цементом. Через неделю, на втором сеансе, изоляция и асептика будут повторены, и вторые образцы периапикального экссудата (PAE) будут собраны перед завершением эндодонтического лечения и постоянной реставрации композитной смолой.

Процедура периапикального забора образцов: После финального промывания каналы будут высушены стерильными бумажными штифтами. Забор будет выполнен с использованием стерильных бумажных штифтов №20, размещённых на 2 мм за апикальным отверстием на 60 секунд. Апикальные 4 мм бумажного штифта будут отрезаны стерильными ножницами и помещены в стерильную пробирку Eppendorf. Этот процесс будет повторён три раза. ИФА-анализ Образцы, хранящиеся при -80°C, будут разморожены, и в каждую пробирку будет добавлено 300 мкл фосфатно-солевого буфера Дульбекко (DPBS, pH 7,2). Образцы будут встряхиваться на вортексе при 25 Гц в течение 1 минуты. Гомогенизация тканей будет выполнена с использованием ультразвукового гомогенизатора (Sonics Vibra-cell) в течение 1 минуты, затем центрифугирование при 5000 об/мин в течение 5 минут при +4°C. Уровни TNF-α, IL-1β и MMP-9 будут измерены с использованием наборов для ИФА при поглощении 450 нм.

Статистический анализ Данные будут проанализированы с использованием IBM SPSS Statistics v20. Линейный регрессионный анализ определит факторы (группа лечения, пол, номер зуба, возраст), влияющие на процентное изменение биомаркеров. Если данные не распределены нормально, для сравнений до и после лечения будет использован тест Уилкоксона, а для межгрупповых сравнений — тест Краскела-Уоллиса. Распределение возраста будет проанализировано с помощью теста Краскела-Уоллиса, а распределение пола/зуба — с помощью критерия хи-квадрат. Уровень значимости установлен на (p < 0,05).