Biomarcatori nella Parodontite Apicale

La dimensione del campione è stata calcolata utilizzando G*Power v3.1 (Università Heinrich Heine, Düsseldorf). Sulla base di un livello di significatività di 0,05 e una potenza di 0,90, è stato determinato che 18 campioni per gruppo erano sufficienti. Tenendo conto di potenziali abbandoni, è prevista l'inclusione di un totale di 66 pazienti.

Criteri di inclusione:

Pazienti di sesso maschile di età compresa tra 18 e 35 anni. Parodontite apicale cronica negli incisivi mascellari o mandibolari, canini o premolari monoradicolati/monocanalari. Storia di trattamento canalare eseguito almeno 4 anni fa. Presenza di una lesione periapicale (<1 cm) con un punteggio PAI di Orstavik di 3 o 4. La conformità etica sarà garantita attraverso il consenso informato; i pazienti saranno informati sullo studio e coloro che desiderano partecipare firmeranno un modulo di consenso informato volontario. I dati demografici dei pazienti (nome, età, sesso), le informazioni di contatto, il numero del dente e i sintomi/reperti clinici saranno registrati nei moduli di report dei casi (CRF).

Criteri di esclusione:

Pazienti che richiedono profilassi antibiotica, quelli con diabete o malattie ematologiche, o quelli che hanno utilizzato antibiotici/farmaci antinfiammatori nell'ultimo mese. Pazienti in gravidanza, denti con placca/tartaro pesante, arrossamento/sanguinamento gengivale, gengivite grave, parodontite generalizzata o profondità di tasca parodontale >3 mm. Denti con tragitti fistolosi, riassorbimento interno/esterno, gonfiore o dolore alla palpazione saranno anch'essi esclusi. Protocollo di trattamento L'anestesia locale [1,8 mL di articaina HCl al 4% con adrenalina 1:100.000 (Ultracain DS Forte)] sarà somministrata. I denti saranno isolati utilizzando una diga di gomma (OpalDam, Ultradent). L'asepsi sarà mantenuta utilizzando H₂O₂ al 30% e NaOCl al 2,5% (Werax). Dopo la preparazione della cavità di accesso, il terzo coronale della guttaperca sarà rimosso utilizzando le frese Gates Glidden n. 3 e n. 4. Tutte le procedure saranno eseguite sotto alto ingrandimento utilizzando un microscopio operatorio dentale (Carl Zeiss Meditec AG). La lunghezza di lavoro (WL) sarà determinata con un localizzatore apicale elettronico (Morita Root ZX Mini). La strumentazione canalare sarà completata utilizzando le lime Reciproc R25 e R50 (VDW) alla WL. Se residui di guttaperca sono visibili radiograficamente, sarà eseguita una preparazione aggiuntiva con lime manuali K di grandi dimensioni. I canali saranno irrigati con 2 mL di NaOCl al 2,5% dopo ogni cambio di lima utilizzando un ago laterale 30-gauge (NaviTip). La ricapitolazione sarà eseguita per mantenere la pervietà apicale. Per inattivare il NaOCl, sarà utilizzato tiosolfato di sodio allo 0,5%, seguito da 5 mL di soluzione fisiologica. Lo strato di smear sarà rimosso con 5 mL di EDTA al 17% e un risciacquo finale con 5 mL di soluzione fisiologica. I pazienti saranno assegnati casualmente a tre gruppi di irrigazione finale (n=22 per gruppo) utilizzando un randomizzatore online (www.randomizer.org). Irrigazione con siringa convenzionale (CSI): 10 mL di NaOCl al 2,5% applicati per 1 minuto utilizzando un ago 30G posizionato a 1 mm dalla WL. Attivazione dell'irrigazione ultrasonica (UI): 10 mL di NaOCl al 2,5% applicati utilizzando un dispositivo ultrasonico (EMS miniPiezon) e una punta di lima K (n. 25) al 50% di potenza con movimenti su e giù per 1 minuto. SWEEPS (Shock Wave Enhanced Emission Photoacoustic Streaming): laser Er:YAG (LightWalker AT, Fotona) a 2940 nm, durata dell'impulso 50 µs, manipolo H14, modalità SWEEPS (0,3 W, 15 Hz, 20 mJ). Una punta in fibra da 600 µm (PIPS 600/9) sarà tenuta ferma nella cavità di accesso mentre 10 mL di NaOCl al 2,5% sono attivati in quattro cicli di 15 secondi. Dopo la prima sessione, sarà applicata la medicazione con idrossido di calcio e la cavità di accesso sarà sigillata con nastro di teflon sterile e cemento fosfato di zinco. Una settimana dopo, nella seconda sessione, l'isolamento e l'asepsi saranno ripetuti e saranno raccolti secondi campioni di essudato periapicale (PAE) prima di completare il trattamento canalare e la restaurazione permanente in resina composita.

Procedura di campionamento periapicale: Dopo l'irrigazione finale, i canali saranno asciugati con coni di carta sterili. Il campionamento sarà eseguito utilizzando coni di carta sterili n. 20 posizionati 2 mm oltre il forame apicale per 60 secondi. I 4 mm apicali del cono di carta saranno tagliati con forbici sterili e posti in una provetta Eppendorf sterile. Questo processo sarà ripetuto tre volte. Analisi ELISA I campioni conservati a -80°C saranno scongelati e 300 µL di Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS, pH 7,2) saranno aggiunti a ciascuna provetta. I campioni saranno vortexati a 25 Hz per 1 minuto. L'omogeneizzazione tissutale sarà eseguita utilizzando un omogenizzatore ultrasonico (Sonics Vibra-cell) per 1 minuto, seguito da centrifugazione a 5000 rpm per 5 minuti a +4°C. I livelli di TNF-α, IL-1β e MMP-9 saranno misurati utilizzando kit ELISA a 450 nm di assorbanza.

Analisi statistica I dati saranno analizzati utilizzando IBM SPSS Statistics v20. L'analisi di regressione lineare identificherà i fattori (gruppo di trattamento, sesso, numero del dente, età) che influenzano la variazione percentuale dei biomarcatori. Se i dati non sono distribuiti normalmente, il test di Wilcoxon sarà utilizzato per i confronti pre- vs post-trattamento e il test di Kruskal-Wallis per i confronti tra gruppi. La distribuzione dell'età sarà analizzata tramite Kruskal-Wallis e la distribuzione del sesso/del dente tramite il test del Chi-quadrato. La significatività è fissata a (p < 0,05).