Biomarcadores em Periodontite Apical

O tamanho da amostra foi calculado utilizando o G*Power v3.1 (Universidade Heinrich Heine, Düsseldorf). Com base num nível de significância de 0,05 e um poder de 0,90, determinou-se que 18 amostras por grupo eram suficientes. Considerando potenciais abandonos, está planeada a inclusão de um total de 66 pacientes.

Critérios de Inclusão:

Pacientes do sexo masculino com idades entre os 18 e os 35 anos. Periodontite apical crónica em incisivos, caninos ou pré-molares unirradiculares/unicanalizados maxilares ou mandibulares. Historial de tratamento endodôntico realizado há pelo menos 4 anos. Presença de uma lesão periapical (<1 cm) com pontuação PAI de Orstavik de 3 ou 4. O cumprimento ético será assegurado através de consentimento informado; os pacientes serão informados sobre o estudo e aqueles dispostos a participar assinarão um formulário de consentimento informado voluntário. Os dados demográficos dos pacientes (nome, idade, género), informações de contacto, número do dente e sintomas/achados clínicos serão registados em formulários de relato de caso (CRF).

Critérios de Exclusão:

Pacientes que necessitem de profilaxia antibiótica, aqueles com diabetes ou doenças hematológicas, ou que tenham utilizado antibióticos/anti-inflamatórios no último mês. Pacientes grávidas, dentes com placa/tártaro abundante, vermelhidão/sangramento gengival, gengivite grave, periodontite generalizada ou profundidade de bolsa periodontal >3 mm. Serão também excluídos dentes com fístulas, reabsorção interna/externa, tumefação ou dor à palpação. Protocolo de Tratamento Será administrada anestesia local [1,8 mL de cloridrato de articaína a 4% com epinefrina 1:100.000 (Ultracain DS Forte)]. Os dentes serão isolados com dique de borracha (OpalDam, Ultradent). A assepsia será mantida com H₂O₂ a 30% e NaOCl a 2,5% (Werax). Após preparação da cavidade de acesso, o terço coronário da guta-percha será removido com brocas Gates Glidden #3 e #4. Todos os procedimentos serão realizados sob alta ampliação utilizando um microscópio operatório dentário (Carl Zeiss Meditec AG). O comprimento de trabalho (CT) será determinado com um localizador apical eletrónico (Morita Root ZX Mini). A instrumentação do canal será concluída com limas Reciproc R25 e R50 (VDW) no CT. Se restos de guta-percha forem visíveis radiograficamente, será realizada preparação adicional com limas K manuais de grande tamanho. Os canais serão irrigados com 2 mL de NaOCl a 2,5% após cada troca de lima, utilizando uma agulha de extremidade lateral de calibre 30 (NaviTip). Será realizada recapitulação para manter a permeabilidade apical. Para inativar o NaOCl, será utilizado tiosulfato de sódio a 0,5%, seguido de 5 mL de solução salina. A camada de smear será removida com 5 mL de EDTA a 17% e uma lavagem final com 5 mL de solução salina. Os pacientes serão aleatoriamente distribuídos por três grupos de irrigação final (n=22 por grupo) utilizando um randomizador online (www.randomizer.org). Irrigação Convencional com Seringa (ICS): 10 mL de NaOCl a 2,5% aplicados durante 1 minuto, utilizando uma agulha 30G colocada 1 mm aquém do CT. Ativação por Irrigação Ultrassónica (AIU): 10 mL de NaOCl a 2,5% aplicados utilizando um dispositivo ultrassónico (EMS miniPiezon) e uma ponta de lima K (#25) a 50% de potência com movimentos de vaivém durante 1 minuto. SWEEPS (Shock Wave Enhanced Emission Photoacoustic Streaming): Laser Er:YAG (LightWalker AT, Fotona) a 2940 nm, duração de pulso de 50 µs, peça de mão H14, modo SWEEPS (0,3 W, 15 Hz, 20 mJ). Uma ponta de fibra de 600 µm (PIPS 600/9) será mantida estacionária na cavidade de acesso enquanto 10 mL de NaOCl a 2,5% são ativados em quatro ciclos de 15 segundos. Após a primeira sessão, será aplicada medicação com hidróxido de cálcio e a cavidade de acesso será selada com fita de Teflon estéril e cimento de fosfato de zinco. Uma semana depois, na segunda sessão, o isolamento e a assepsia serão repetidos, e segundas amostras de exsudado periapical (EPA) serão colhidas antes de completar o tratamento endodôntico e a restauração definitiva em resina composta.

Procedimento de Colheita Periapical: Após a irrigação final, os canais serão secos com cones de papel estéreis. A colheita será realizada com cones de papel estéreis #20 colocados 2 mm além do forame apical durante 60 segundos. Os 4 mm apicais do cone de papel serão cortados com tesoura estéril e colocados num tubo Eppendorf estéril. Este processo será repetido três vezes. Análise por ELISA As amostras armazenadas a -80°C serão descongeladas e adicionados 300 µL de Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS, pH 7,2) a cada tubo. As amostras serão agitadas num vortex a 25 Hz durante 1 minuto. A homogeneização do tecido será realizada com um homogeneizador ultrassónico (Sonics Vibra-cell) durante 1 minuto, seguida de centrifugação a 5000 rpm durante 5 minutos a +4°C. Os níveis de TNF-α, IL-1β e MMP-9 serão medidos utilizando kits de ELISA a 450 nm de absorbância.

Análise Estatística Os dados serão analisados com o IBM SPSS Statistics v20. A análise de regressão linear identificará fatores (grupo de tratamento, género, número do dente, idade) que influenciem a variação percentual dos biomarcadores. Se os dados não apresentarem distribuição normal, o teste de Wilcoxon será utilizado para comparações pré vs. pós-tratamento e o teste de Kruskal-Wallis para comparações intergrupos. A distribuição etária será analisada via Kruskal-Wallis e a distribuição por género/dente via teste do Qui-quadrado. A significância está definida em (p < 0,05).