Biomarkers in Apicale Parodontitis

De steekproefomvang werd berekend met G*Power v3.1 (Heinrich Heine University, Düsseldorf). Op basis van een significantieniveau van 0,05 en een power van 0,90 werd vastgesteld dat 18 monsters per groep voldoende waren. Rekening houdend met mogelijke uitvallers, zijn in totaal 66 patiënten gepland voor inclusie.

Inclusiecriteria:

Mannelijke patiënten van 18-35 jaar.Chronische apicale parodontitis in boven- of onderkaakincisieven, hoektanden, of eenwortelige/eenkanaals premolaren.Eerdere wortelkanaalbehandeling uitgevoerd minstens 4 jaar geleden.Aanwezigheid van een periapicale laesie (<1 cm) met een Orstavik PAI-score van 3 of 4.Ethische naleving wordt gewaarborgd via geïnformeerde toestemming; patiënten worden geïnformeerd over de studie, en degenen die bereid zijn deel te nemen ondertekenen een vrijwillige geïnformeerde toestemmingsverklaring. Demografische gegevens van patiënten (naam, leeftijd, geslacht), contactgegevens, tandnummer en klinische symptomen/bevindingen worden vastgelegd in case report forms (CRF).

Exclusiecriteria:

Patiënten die antibioticaprofylaxe nodig hebben, patiënten met diabetes of hematologische ziekten, of patiënten die de afgelopen maand antibiotica/ontstekingsremmende medicijnen hebben gebruikt. Zwangere patiënten, tanden met veel plaque/tandsteen, roodheid/bloeding van het tandvlees, ernstige gingivitis, gegeneraliseerde parodontitis of parodontale pocketdieptes >3 mm. Tanden met fistels, interne/externe resorptie, zwelling of pijn bij palpatie worden ook uitgesloten. Behandelprotocol Lokale anesthesie [1,8 ml 4% articaïne HCl met 1:100.000 epinefrine (Ultracain DS Forte)] wordt toegediend. Tanden worden geïsoleerd met een rubberdam (OpalDam, Ultradent). Asepsis wordt gehandhaafd met 30% H₂O₂ en 2,5% NaOCl (Werax). Na het prepareren van de toegangsholte wordt het coronaire derde deel van de guttapercha verwijderd met Gates Glidden boren #3 en #4. Alle procedures worden uitgevoerd onder hoge vergroting met een tandheelkundige operatiemicroscoop (Carl Zeiss Meditec AG).Werkingslengte (WL) wordt bepaald met een elektronische apexlocator (Morita Root ZX Mini). Kanaalinstrumentatie wordt voltooid met Reciproc R25 en R50 vijlen (VDW) op WL. Als guttapercha-resten radiografisch zichtbaar zijn, wordt aanvullende preparatie uitgevoerd met grote hand-K-vijlen. Kanalen worden geïrrigeerd met 2 ml 2,5% NaOCl na elke vijlwisseling met een 30-gauge zij-uitlaatnaald (NaviTip). Recapitulatie wordt uitgevoerd om apicale doorgankelijkheid te behouden.Om NaOCl te inactiveren wordt 0,5% natriumthiosulfaat gebruikt, gevolgd door 5 ml fysiologisch zout. De smear layer wordt verwijderd met 5 ml 17% EDTA en een laatste spoeling van 5 ml fysiologisch zout. Patiënten worden willekeurig toegewezen aan drie eindirrigatiegroepen (n=22 per groep) met een online randomizer (www.randomizer.org). Conventionele spuitirrigatie (CSI): 10 ml 2,5% NaOCl toegepast gedurende 1 minuut met een 30G-naald geplaatst 1 mm voorbij WL. Ultrasone irrigatie-activatie (UI): 10 ml 2,5% NaOCl toegepast met een ultrasoon apparaat (EMS miniPiezon) en een K-vijlpunt (#25) op 50% vermogen met op-en-neer bewegingen gedurende 1 minuut. SWEEPS (Shock Wave Enhanced Emission Photoacoustic Streaming): Er:YAG-laser (LightWalker AT, Fotona) op 2940 nm, 50 μs pulsduur, H14 handstuk, SWEEPS-modus (0,3 W, 15 Hz, 20 mJ). Een 600 μm fiberpunt (PIPS 600/9) wordt stationair gehouden in de toegangsholte terwijl 10 ml 2,5% NaOCl wordt geactiveerd in vier cycli van 15 seconden.Na de eerste sessie wordt calciumhydroxide-medicatie aangebracht, en de toegangsholte wordt afgesloten met steriel teflontape en zinkfosfaatcement. Een week later, bij de tweede sessie, worden isolatie en asepsis herhaald, en worden tweede periapicale exsudaat (PAE) monsters verzameld voordat de wortelkanaalbehandeling en permanente composietharsrestauratie worden voltooid.

Periapicale bemonsteringsprocedure: Na eindirrigatie worden kanalen gedroogd met steriele papierpunten. Bemonstering wordt uitgevoerd met #20 steriele papierpunten geplaatst 2 mm voorbij het apicale foramen gedurende 60 seconden. Het apicale 4 mm van de papierpunt wordt afgesneden met steriele schaar en in een steriele Eppendorf-buis geplaatst. Dit proces wordt drie keer herhaald.ELISA-analyse Monsters opgeslagen bij -80°C worden ontdooid en aan elke buis wordt 300 μL Dulbecco's Fosfaat Gebufferde Zoutoplossing (DPBS, pH 7,2) toegevoegd. Monsters worden gevortexd op 25 Hz gedurende 1 minuut. Weefselhomogenisatie wordt uitgevoerd met een ultrasone homogenisator (Sonics Vibra-cell) gedurende 1 minuut, gevolgd door centrifugatie bij 5000 rpm gedurende 5 minuten bij +4°C. TNF-α, IL-1β en MMP-9 niveaus worden gemeten met ELISA-kits bij 450 nm absorptie.

Statistische analyse Gegevens worden geanalyseerd met IBM SPSS Statistics v20. Lineaire regressieanalyse identificeert factoren (behandelingsgroep, geslacht, tandnummer, leeftijd) die de procentuele verandering in biomarkers beïnvloeden. Als gegevens niet normaal verdeeld zijn, wordt de Wilcoxon-test gebruikt voor pre- vs. post-behandeling vergelijkingen, en de Kruskal-Wallis-test voor intergroepvergelijkingen. Leeftijdsverdeling wordt geanalyseerd via Kruskal-Wallis, en geslacht/tandverdeling via de Chi-kwadraattoets. Significantie is vastgesteld op (p < 0,05).