Biomarkkerit huippuhammasjuuritulehduksessa

Otoskoko laskettiin käyttäen G*Power v3.1 -ohjelmistoa (Heinrich Heine -yliopisto, Düsseldorf). Merkitsevyystasolla 0,05 ja testiteholla 0,90 todettiin, että 18 näytettä per ryhmä on riittävä. Mahdollisia keskeyttäjiä huomioiden suunniteltiin sisällyttävän yhteensä 66 potilasta.

Sisällyttämiskriteerit:

Miehet 18–35-vuotiaana.Krooninen huippuhammastulehdus ylä- tai alaleuan etuhampaissa, kulmahampaissa tai yksijuurisissa/yksikanavaisissa pienten poskihampaissa.Historiatieto hammasjuurihoidosta, joka on suoritettu vähintään 4 vuotta sitten.Huippualueen tulehdus (<1 cm) Orstavik PAI -pisteillä 3 tai 4.Eettinen noudattaminen varmistetaan tietoiseen suostumukseen perustuen; potilaille selostetaan tutkimus, ja osallistumaan halukkaat allekirjoittavat vapaaehtoisen tietoisen suostumuksen lomakkeen.Potilaiden demografiset tiedot (nimi, ikä, sukupuoli), yhteystiedot, hammasnumero ja kliiniset oireet/löydökset tallennetaan tapausraportointilomakkeisiin (CRF).

Poissulkemiskriteerit:

Potilaat, jotka tarvitsevat antibioottiprofylaksia, potilaat, joilla on diabetes tai veritauteja, tai potilaat, jotka ovat käyttäneet antibiootteja/tulehduskipulääkkeitä viimeisen kuukauden aikana.Raskaana olevat potilaat, hampaat, joilla on runsasta plakkia/tarttumaa, ienpunerrusta/verenvuotoa, vakavaa ientulehdusta, yleistynyttä parodontiittia tai yli 3 mm syvyisiä ientaskuja.Hampaat, joilla on sivuonteloita, sisäistä/ulkoista resorptiota, turvotusta tai kipua palpoidessa, suljetaan myös pois.Hoitoprotokolla Paikallispuudutus [1,8 ml 4 % artikaiini-HCl:ta 1:100 000 epinefriinillä (Ultracain DS Forte)] annetaan.Hampaat eristetään kumikalvolla (OpalDam, Ultradent).Asepsi ylläpidetään käyttäen 30 % H₂O₂:ta ja 2,5 % NaOCl:ta (Werax).Käytävän valmistuksen jälkeen guuttaperkan koronaalinen kolmannes poistetaan käyttäen #3 ja #4 Gates Glidden -poroja.Kaikki toimenpiteet suoritetaan suurennoksen alaisena hammaskirurgisella mikroskoopilla (Carl Zeiss Meditec AG).Työpituus (WL) määritetään elektronisella apikaalilokillaattorilla (Morita Root ZX Mini).Kanavan instrumentointi suoritetaan käyttäen Reciproc R25- ja R50-tiedostoja (VDW) työpituudella.Jos guuttaperkan jäänteitä on nähtävissä röntgenkuvissa, suoritetaan lisävalmistusta käyttäen suurikokoisia käsi-K-tiedostoja.Kanavat huuhdellaan 2 ml:lla 2,5 % NaOCl:ta jokaisen tiedostonvaihdon jälkeen käyttäen 30-gauge sivuventtiilistä neulaa (NaviTip).Rekapitulaatio suoritetaan apikaalisen patenssin ylläpitämiseksi.NaOCl:n inaktivoimiseksi käytetään 0,5 % natriumtiosulfaattia, jonka jälkeen 5 ml suolaliuosta.Smear-kerros poistetaan 5 ml:lla 17 % EDTA:ta ja lopullisella 5 ml suolahuuhdelulla.Potilaat jaetaan satunnaisesti kolmeen lopulliseen huuhdeluryhmään (n=22 per ryhmä) käyttäen verkkosatunnaisointia (www.randomizer.org).Perinteinen ruiskuhuuhdonta (CSI): 10 ml 2,5 % NaOCl:ta käytetään 1 minuutin ajan käyttäen 30G-neulaa, joka asetetaan 1 mm lyhyemmälle kuin WL.Ultrasoninen huuhdelun aktivointi (UI): 10 ml 2,5 % NaOCl:ta käytetään käyttäen ultralaitetta (EMS miniPiezon) ja K-tiedoston kärkeä (#25) 50 % teholla ylös-alas-liikkeillä 1 minuutin ajan.SWEEPS (Shock Wave Enhanced Emission Photoacoustic Streaming): Er:YAG-laser (LightWalker AT, Fotona) 2940 nm, 50 µs pulssikesto, H14-kahva, SWEEPS-tila (0,3 W, 15 Hz, 20 mJ).600 µm kuitukärki (PIPS 600/9) pidetään paikallaan käytävän sisällä, kun 10 ml 2,5 % NaOCl:ta aktivoidaan neljällä 15 sekunnin syklillä.Ensimmäisen istunnon jälkeen kalsiumhydroksidi-lääkitys annetaan, ja käytävä suljetaan steriilillä tefloniteipillä ja sinkkifosfaattisementillä.Yhden viikon kuluttua toisessa istunnossa eristys ja asepsi toistetaan, ja toiset huippualueen eksudaatinäytteet (PAE) kerätään ennen hammasjuurihoidon loppuun saattamista ja pysyvää komposiittihartsitäydennystä.

Huippualueen näytteenottomenettely: Lopullisen huuhdelun jälkeen kanavat kuivataan steriileillä paperipisteillä.Näytteenotto suoritetaan käyttäen #20 steriilejä paperipisteitä, jotka asetetaan 2 mm apikaalisen foramenin yli 60 sekunniksi.Paperipisteen apikaalinen 4 mm leikataan steriileillä saksilla ja sijoitetaan steriiliin Eppendorf-putkeen.Tätä prosessia toistetaan kolme kertaa.ELISA-analyysi -80°C:ssa säilytetyt näytteet sulatetaan ja 300 µL Dulbeccon fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (DPBS, pH 7,2) lisätään jokaiseen putkeen.Näytteet sekoitetaan vortexilla 25 Hz taajuudella 1 minuutin ajan.Kudos homogenisoidaan käyttäen ultrahomogenisaattoria (Sonics Vibra-cell) 1 minuutin ajan, jonka jälkeen sentrifugoidaan 5000 rpm 5 minuuttia +4°C:ssa.TNF-α, IL-1β ja MMP-9 tasot mitataan ELISA-kittejä käyttäen 450 nm absorbanssilla.

Tilastollinen analyysi Tietoja analysoidaan käyttäen IBM SPSS Statistics v20.Lineaarinen regressioanalyysi tunnistaa tekijät (hoitoryhmä, sukupuoli, hammasnumero, ikä), jotka vaikuttavat biomarkkerien prosentuaaliseen muutokseen.Jos tiedot eivät ole normaalisti jakautuneita, käytetään Wilcoxonin testiä ennen ja jälkeen hoidon vertailuihin, ja Kruskal-Wallisin testiä ryhmien välisiin vertailuihin.Ikäjakauma analysoidaan Kruskal-Wallisin testillä, ja sukupuoli/hammasjakauma khiin neliö -testillä.Merkitsevyysasetus on (p < 0,05).