根尖周炎中的生物标志物

样本量使用G*Power v3.1软件（海因里希·海涅大学，杜塞尔多夫）计算。 基于0.05的显著性水平和0.90的检验效能，确定每组18个样本足够。 考虑到潜在脱落情况，计划共纳入66名患者。

纳入标准：

18-35岁男性患者。上颌或下颌切牙、尖牙或单根/单根管前磨牙患有慢性根尖周炎。至少4年前接受过根管治疗史。存在根尖周病变（<1厘米）且Orstavik PAI评分为3或4分。通过知情同意确保伦理合规；患者将获知研究详情，自愿参与者将签署知情同意书。 患者人口统计学资料（姓名、年龄、性别）、联系方式、牙位编号及临床症状/发现将记录于病例报告表（CRF）。

排除标准：

需抗生素预防的患者、患有糖尿病或血液系统疾病者、或过去一个月内使用过抗生素/抗炎药物者。 妊娠患者、牙面有大量菌斑/牙石者、牙龈红肿/出血者、重度牙龈炎者、广泛性牙周炎者或牙周袋深度>3毫米者。 存在窦道、内/外吸收、肿胀或叩痛的牙齿也将被排除。 治疗流程：局部麻醉[使用1.8毫升含1:100,000肾上腺素的4%盐酸阿替卡因（必兰麻加强型）]。 使用橡皮障（OpalDam, Ultradent）隔离牙齿。 使用30% H₂O₂和2.5% NaOCl（Werax）维持无菌操作。 开髓后，使用#3和#4 Gates Glidden钻去除牙胶尖冠部三分之一。 所有操作将在牙科手术显微镜（卡尔·蔡司医疗技术公司）高倍放大下完成。使用电子根尖定位仪（森田Root ZX Mini）确定工作长度（WL）。 使用Reciproc R25和R50锉（VDW）在WL完成根管预备。 若X线片显示残留牙胶，将使用大号手用K锉进行补充预备。 每次更换器械后，使用30号侧方开口冲洗针（NaviTip）以2毫升2.5% NaOCl冲洗根管。 进行回锉操作以保持根尖通畅。为灭活NaOCl，将使用0.5%硫代硫酸钠，随后用5毫升生理盐水冲洗。 使用5毫升17% EDTA去除玷污层，最后以5毫升生理盐水终末冲洗。 患者将通过在线随机化工具（www.randomizer.org）随机分配至三个终末冲洗组（每组n=22）。 传统注射器冲洗组（CSI）：使用30G针头在WL短1毫米处，以10毫升2.5% NaOCl冲洗1分钟。 超声冲洗活化组（UI）：使用超声设备（EMS miniPiezon）和K锉尖（#25号）以50%功率上下运动1分钟，活化10毫升2.5% NaOCl。 SWEEPS组（冲击波增强发射光声流）：使用Er:YAG激光（LightWalker AT, Fotona），波长2940纳米，脉冲持续时间50微秒，H14手机，SWEEPS模式（0.3瓦，15赫兹，20毫焦）。 将600微米光纤头（PIPS 600/9）固定于髓腔，在四个15秒周期内活化10毫升2.5% NaOCl。首次治疗后，将封入氢氧化钙药物，并用无菌特氟龙胶带和磷酸锌水门汀封闭髓腔。 一周后第二次治疗时，重复隔离和无菌操作，在完成根管治疗和永久复合树脂修复前采集第二次根尖周渗出液（PAE）样本。

根尖周采样流程：终末冲洗后，用无菌纸尖干燥根管。 使用#20无菌纸尖置于根尖孔外2毫米处采样60秒。 用无菌剪刀剪下纸尖顶端4毫米部分，置于无菌Eppendorf管中。 此过程重复三次。ELISA分析：-80°C保存的样本解冻后，每管加入300微升杜氏磷酸盐缓冲盐水（DPBS, pH 7.2）。 样本以25赫兹涡旋振荡1分钟。 使用超声均质器（Sonics Vibra-cell）均质组织1分钟，随后在+4°C下以5000转/分离心5分钟。 使用ELISA试剂盒在450纳米吸光度下测量TNF-α、IL-1β和MMP-9水平。

统计分析：数据使用IBM SPSS Statistics v20分析。 线性回归分析将识别影响生物标志物百分比变化的因素（治疗组、性别、牙位、年龄）。 若数据非正态分布，将使用Wilcoxon检验进行治疗前后比较，使用Kruskal-Wallis检验进行组间比较。 年龄分布通过Kruskal-Wallis分析，性别/牙位分布通过卡方检验分析。 显著性水平设定为（p < 0.05）。