잠복 결핵에 감염된 지원자에서 MVA85A의 안전성 및 면역원성.

결핵(TB)으로 매년 약 3백만 명이 사망합니다. 세계 인구의 1/3이 결핵균(M.tb)에 잠복 감염되어 있는 것으로 추정됩니다(Dye, 1999). 이러한 잠복 감염자는 면역이 억제되면 감염이 재활성화될 위험이 있습니다. 전 세계적으로 HIV와의 동시 감염은 면역 억제의 가장 흔한 원인이며 평생 위험 10%에서 연간 위험 10%로 재활성화 기회를 증가시킵니다(Corbett, 1996). 현재 이용 가능한 백신인 M. bovis BCG는 풍토병 지역에서 성인 폐 질환을 예방하는 데 대체로 비효율적이며 보다 효과적인 새로운 결핵 백신이 전 세계 주요 공중 보건 우선 순위라는 데 널리 동의하고 있습니다(Colditz, 1994). 그러나 BCG가 결핵 수막염과 나병에 대해 가치 있는 보호를 제공하기 때문에 BCG를 포함하지 않는 백신 전략을 테스트하고 배포하는 것은 비윤리적이고 비실용적일 수 있습니다. BCG를 포함하는 예방접종 전략도 매력적입니다. 왜냐하면 이 백신 후보를 테스트해야 하는 모집단이 이미 BCG로 예방접종을 받았기 때문입니다. M.tb의 높은 감염률을 감안할 때 잠복 감염자에게 투여할 수 있고 잠복 감염을 박멸할 수 있는 백신은 TB로 인한 사망률과 이환율에 막대한 영향을 미칠 것입니다.

M.tb는 세포내 유기체입니다. CD4+ Th1 유형 세포 반응은 보호에 필수적이며 동물 및 인간 연구에서 CD8+ T 세포도 보호 역할을 한다는 증거가 증가하고 있습니다(Flynn, 2001). 그러나, 일반적으로 서브유닛 백신을 사용하여 인간에서 강한 세포성 면역 반응을 유도하는 것은 어려웠다. DNA 백신, 재조합 바이러스 벡터 및 단백질/아쥬반트 조합은 모두 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 모두 유도하지만, 이러한 항원 전달 시스템 중 어느 것도 단독으로 사용될 때 높은 수준의 항원 특이적 T 세포를 유도하지 않습니다. 이종 프라임-부스트 면역화 전략에는 몇 주 간격으로 각각 동일한 항원을 암호화하는 두 가지 다른 백신을 제공하는 것이 포함됩니다. DNA 프라임-재조합 변형 백시니아 바이러스 앙카라(MVA) 부스트를 사용하면 여러 질병 모델에서 동일한 벡터로 동종 부스팅을 사용하는 것보다 더 높은 수준의 항원 특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 유도합니다(Schneider, 1998; McShane, 2001). 어린 시절 BCG의 보호 효능을 감안할 때 이상적으로 BCG는 이러한 프라임-부스트 전략에서 프라이밍 면역이 될 것입니다. 이를 위해 후보항원으로 항원 85A에 집중했다.

항원 85A는 모든 마이코박테리아 종 중에서 고도로 보존되어 있으며 모든 BCG 계통에 존재합니다. 항원 85A는 항원 85 복합체(A, B 및 C)의 일부를 형성하는 M. 투베르쿨로시스로부터의 주요 분비 항원이다. 이 복합체는 M.tb와 BCG 모두의 분비 단백질의 주요 부분을 구성합니다. 그것은 세포벽 내의 피브로넥틴 결합에 관여하고 마이콜릴트랜스퍼라제 활성을 갖는다. 항원 85A는 뮤린 및 인간 연구에서 면역우성이며 작은 동물에서 보호적이다(Huygen, 1996). 재조합 변형 백시니아 바이러스 앙카라(rMVA). 많은 바이러스가 잠재적인 재조합 백신으로 조사되었습니다. 살아있는 백시니아 바이러스로 백신접종을 통한 천연두의 성공적인 전 세계적인 박멸은 재조합 사용을 위한 후보로서 백시니아를 부각시켰습니다. MVA 및 아비폭스 벡터와 같은 폭스바이러스의 비복제 균주가 전통적인 복제 백시니아 균주보다 면역원성이 더 높을 수 있다는 인식이 최근 몇 년간 이 접근법의 매력을 높였습니다. MVA(변형 백시니아 바이러스 앙카라)는 조류 세포를 통해 570회 이상 계대된 백시니아 바이러스의 변종으로, 인간 세포주에서 복제 능력이 없고 우수한 안전성 기록을 가지고 있습니다. 천연두 박멸 프로그램의 일환으로 120,000명 이상의 백신 접종자에게 백신이 투여되었으며 고위험군에 대한 의도적인 백신 접종에도 불구하고 부작용이 없었습니다(Stickl, 1974; Mahnel, 1994). 사람의 이러한 안전성은 동물 모델에서 MVA의 무독성과 일치합니다. MVA는 포유류 세포에서 복제하는 능력을 심각하게 손상시키는 부모 게놈과 비교하여 6개의 주요 게놈 결실을 가지고 있습니다(Meher, 1991). 형질전환되지 않은 포유류 세포에서는 복제가 기록되지 않았습니다. 바이러스 복제는 세포 감염 동안 늦게 차단되지만 중요하게는 바이러스 및 재조합 단백질 합성이 이 실패 감염 중에도 손상되지 않습니다. 바이러스 게놈은 닭 배아 섬유아세포에서 일련의 대규모 계대를 통해 안정적인 것으로 입증되었습니다. 복제 결핍 재조합 MVA는 예외적으로 안전한 바이러스 벡터로 간주되었습니다. 동물 모델 연구에서 시험했을 때 재조합 MVA는 비독성이지만 바이러스성 질병 및 암에 대한 백신으로서 보호 면역원성인 것으로 나타났습니다. 심하게 면역이 억제된 짧은꼬리원숭이에 대한 최근 연구는 MVA가 면역이 약화된 인간에게 안전해야 한다는 견해를 지지했습니다(Akira, 2001; Stittelaar, 2001). 영국과 아프리카 모두에서 현재 임상 1/2상에 있는 여러 재조합 MVA의 안전성 데이터가 있습니다. 다양한 투여량의 재조합 MVA 백신의 안전성 및 효능에 대한 유용한 데이터는 완전한 적혈구 전단계 항원인 트롬보스폰딘 관련 부착에 융합된 열대열열원충 전적혈구 항원의 다수의 CTL 에피토프를 발현하는 재조합 MVA를 사용한 임상 시험 데이터에서 나옵니다. 단백질(트랩). 지금까지 옥스퍼드와 감비아에서 250명이 넘는 건강한 지원자에게 MVA ME-TRAP을 심각한 부작용 없이 투여했습니다(Adrian Hill, 개인 서신). 지원자들은 3주 간격으로 피내 백신 1회 용량당 3~15 x 107 pfu의 용량을 1~3회 받았습니다. 모든 대상체는 직경이 약 1-7cm이고 백신 접종 후 48시간에 최고조에 달하는 더 옅은 분홍색 주변 영역과 함께 전형적으로 5mm 중앙 ​​적색 영역을 갖는 일시적인 국부 발적을 갖는다. 백신 접종 후 7일이 지나면 일반적으로 중앙의 빨간색 영역만 남습니다. 이것은 다음 몇 주에 걸쳐 사라지고 일반적으로 백신 접종 후 2개월에는 분명하지 않습니다. 재조합 MVA 백신의 새로운 안전성 프로파일은 옥스퍼드에서 제조되고 현재 HIV, HBV 및 흑색종에 대한 MVA를 사용하는 임상 연구에 있는 세 가지 다른 MVA 재조합체의 임상 연구 데이터에 의해 뒷받침됩니다. 재조합 MVA 인코딩 항원 85A MVA85A는 마우스를 면역화하는 데 사용될 때 CD4+ 및 CD8+ 에피토프를 모두 유도합니다. 마우스에 BCG로 프라이밍한 다음 MVA85A를 추가로 투여하면 유도된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 수준이 BCG 또는 MVA85A 단독보다 더 높으며 이 체제는 백신 단독보다 더 보호적입니다(Goonetilleke et al, 2003). . 더 민감한 기니피그 모델에서, BCG로 백신접종한 다음 MVA85A로 백신접종한 다음 두 번째 바이러스 벡터인 계두 발현 항원 85A로 백신접종한 기니피그는 실험 종료 시 6/6 기니피그가 생존한 반면 2/6 기니는 생존했습니다. BCG 단독으로 백신접종된 돼지, 및 0/6 대조군 동물(Williams et al, 제출됨). 붉은 털원숭이에서 이 BCG 프라임-MVA85A 및 Fowlpox85A 부스트는 어떤 백신 단독보다 면역원성이 더 높습니다. MVA85A MVA85A(5 x 107pfu 용량)를 사용한 임상 연구는 심각한 부작용 없이 영국의 40명의 건강한 지원자와 감비아의 15명의 건강한 지원자를 대상으로 실시되었습니다. 우리는 Koch 반응의 가능성을 최소화하기 위해 미코박테리아 노출을 단계적으로 증가시키면서 지원자 그룹의 백신 접종을 허용하도록 1상 연구를 설계했습니다. Koch 반응은 M.tb에 대한 과장된 면역 반응이 자극될 때 결핵에 걸린 사람이나 동물에서 면역 병리학의 발달을 설명합니다. 코흐가 미코박테리아를 일종의 치료용 백신 접종으로 사용한 그의 독창적인 연구를 수행했을 때 결핵 환자에게서 설명되었습니다. 이제 치료적 백신접종의 마우스 모델에서 입증되었습니다(Taylor, 2003). 이용 가능한 동물 데이터는 이러한 반응이 M.tb에 잠재적으로 감염된 마우스에서 발생하지 않는다는 것을 시사하며, 이러한 반응은 높은 박테리아 부하와 관련이 있을 수 있으며 코흐 현상이 잠재적으로 감염된 사람일지라도 건강한 사람의 백신 접종에 문제를 제기하지 않을 수 있음을 시사합니다. 우리는 가능한 한 마이코박테리아에 순진한 건강한 지원자에서 이 연구를 시작했습니다. 그들은 PPD, ESAT 6 및 CFP10에 대해 피부 검사 음성 및 Elispot 음성이었고 이전에 BCG 접종을 받은 적이 없었습니다. 이제 우리는 이전에 BCG로 예방 접종을 받은 영국 예방 접종 지원자에 대한 연구를 완료했습니다(McShane, 제출). 이러한 지원자는 Heaf 테스트가 등급 II보다 큰 경우 제외됩니다. 이러한 연구는 감비아에서 진행 중입니다. 그런 다음 이 증가하는 마이코박테리아 스펙트럼에 대한 예방 접종을 계획하는 다음 그룹은 M.tb에 잠복 감염되어 있는 건강한 지원자입니다. 이론적 근거 이 연구는 M.tb에 잠재적으로 감염된 영국의 건강한 지원자에서 MVA85A의 안전성을 평가하기 위해 고안되었습니다. MVA85A로 5 x 107pfu의 용량을 피내 투여할 때 단일 백신접종은 마이코박테리아에 감염되지 않은 개인과 이전에 BCG로 백신을 접종한 사람 모두에게 안전합니다. 우리는 이 연구에서 동일한 백신 접종 체계를 사용할 것입니다. 대상자는 ESAT6 또는 CFP10에 대한 양성 엘리스팟 반응이 있는 경우 잠재적으로 감염된 것으로 정의됩니다. 피험자는 TB 접촉 클리닉에서 식별됩니다.