Sputum Matrix Metalloproteinases (MMP) mRNA 및 Montelukast

스크리닝 시 다음 측정이 수행됩니다.

• 동의
• 임상 검사
• 폐활량계
• 유도 가래

다음은 연구 약물 투여 8주 후 수행됩니다.

• 임상 검사
• 폐활량계
• 유도 가래
• 다이어리 카드

폐활량계:

이는 Microlab 폐활량계(Micro Medical Ltd, Rochester, Kent, UK)로 수행됩니다. 절차는 American Thoracic Society 사양(13)에 따릅니다.

다이어리 카드 데이터:

환자는 "기침", "호흡곤란" 및 "쌕쌕거림"에 따라 매일 아침에 자신의 증상을 0=증상 없음 및 3=최대 증상인 4점 척도로 기록합니다. 총 증상 점수는 12점 만점에서 계산됩니다. 환자는 또한 매일 아침에 최대 호기량을 측정하고 세 가지 측정 중 가장 높은 값을 기록합니다. 그들은 연구 약물을 복용했음을 기록할 것입니다.

객담 유도 및 검사:

Pizzichini et al(14)이 기술한 방법에 따라 고장성 식염수로 가래를 흡입하여 마우스피스를 통해 각각 7분 동안 식염수 농도(3, 4 및 5%)의 농도를 높입니다. 각 흡입 기간 후 안전을 위해 FEV1을 측정합니다. 피험자는 멸균 용기에 가래를 기침하도록 요청받을 것입니다. 백혈구의 총 세포 수는 수정된 Neubauer 혈구계산기에서 얻을 수 있습니다. 세포 생존력은 트라이판 블루 배제 방법에 의해 결정될 것이다. 400개의 비편평 세포가 Wright 염색 슬라이드에서 계산되고 결과는 총 비편평 세포 수의 백분율 및 절대 수로 표시됩니다. MMP-9, 12 TIMP-1 및 TGFb의 측정은 가래 상층액에서 수행됩니다.

MMP 및 TIMP의 mRNA 프로필:

총 RNA는 이전에 설명한 것과 유사한 방식으로 Trizol 추출과 Qiagen RNeasy 스핀 컬럼의 조합을 사용하여 유도된 객담 플러그의 세포 내용물에서 추출됩니다12. 이전에 개발된 프라이머 및 프로브를 사용하는 정량적 RT-PCR은 설명된 대로 MMP 및 TIMP의 mRNA의 상대적인 양을 결정하는 데 사용됩니다12. 우리는 인간 샘플에서 전체 MMP 및 TIMP 유전자 패밀리를 일상적으로 프로파일링하는 세계 유일의 센터입니다. 이것은 질병 과정에서 이러한 효소와 억제제의 관여에 대한 포괄적인 관점을 제공하고 잠재적인 새로운 바이오마커에 대한 정보를 제공합니다. 추가 가래 수집 없이 유전자 프로파일링을 확장할 수 있는 가능성도 연구에 가치를 더합니다. 여기에는 ECM 분해 또는 염증에서 역할을 하는 다른 프로테이나제 계열이 포함될 수 있습니다.