ARNm des métalloprotéinases de la matrice des expectorations (MMP) et montélukast

Les mesures suivantes seront effectuées lors du dépistage :

• Consentement éclairé
• Examen clinique
• Spirométrie
• Crachat induit

Ce qui suit sera effectué après 8 semaines de traitement à l'étude :

• Examen clinique
• Spirométrie
• Crachat induit
• Carte journal

Spirométrie :

Ceci sera effectué avec un spiromètre Microlab (Micro Medical Ltd, Rochester, Kent, UK). La procédure sera conforme aux spécifications de l'American Thoracic Society(13).

Données de la carte journal :

Les patients enregistreront quotidiennement leurs symptômes le matin en fonction de la "toux", de l'"essoufflement" et de la "respiration sifflante" sur une échelle de 4 points avec 0 = aucun symptôme et 3 = symptômes maximaux. Un score total de symptômes sera calculé sur 12. Les patients mesureront également leur débit expiratoire de pointe quotidiennement le matin et enregistreront la plus élevée des trois mesures. Ils enregistreront qu'ils ont pris leurs médicaments à l'étude.

Induction et examen des expectorations :

Les expectorations seront obtenues avec une solution saline hypertonique selon la méthode décrite par Pizzichini et al(14) en inhalant des concentrations croissantes de solution saline (3, 4 et 5 %) chacune pendant 7 minutes, à travers un embout buccal. Après chaque période d'inhalation, FEV1 sera mesuré pour la sécurité. Les sujets seront invités à tousser les expectorations dans un récipient stérile. La numération cellulaire totale des leucocytes sera obtenue dans un hémocytomètre Neubauer modifié. La viabilité cellulaire sera déterminée par la méthode d'exclusion au bleu trypan. Quatre cents cellules non squameuses seront comptées sur des lames colorées à la Wright et les résultats seront exprimés en pourcentage et en nombre absolu du nombre total de cellules non squameuses. La mesure de MMP-9, 12 TIMP-1 et TGFb sera effectuée dans le surnageant d'expectoration.

Profil de l'ARNm des MMP et des TIMP :

L'ARN total sera extrait du contenu cellulaire du bouchon d'expectoration induit à l'aide d'une combinaison d'extraction Trizol et de colonnes de centrifugation Qiagen RNeasy d'une manière similaire à celle décrite précédemment12. La RT-PCR quantitative, utilisant des amorces et des sondes précédemment développées, sera utilisée pour déterminer les quantités relatives d'ARNm des MMP et des TIMP comme décrit12. Nous restons le seul centre au monde à profiler systématiquement l'ensemble de la famille des gènes MMP et TIMP dans des échantillons humains. Cela donne une vue d'ensemble de l'implication de ces enzymes et inhibiteurs dans le processus de la maladie et met également en lumière de nouveaux biomarqueurs potentiels. La possibilité d'élargir le profilage des gènes sans avoir besoin d'une collecte supplémentaire d'expectorations ajoute également de la valeur à la recherche. Cela pourrait inclure d'autres familles de protéinases jouant un rôle dans la dégradation de la MEC ou dans l'inflammation.