빠삐용-르페브르 증후군의 사이토카인

재료 및 방법 재료 Lipopolysaccharide (LPS; Escherichia coli, serotype R515)는 Alexis (Lausen, Switzerland)에서 구입하였고 adenosine triphosphate (ATP)는 Sigma (Deisenhofen, Germany)에서 구입하였다. 종양 괴사 인자 α(TNF-α)는 Knoll AG(Ludwigshafen, Germany)에서 친절하게 제공했습니다. IL-1β는 Invitrogen/Biosource(Karlsruhe, Germany)에서 구입했습니다.

환자 및 건강한 기증자 PLS 진단을 받은 5명의 환자가 Johann Wolfgang Goethe-University Frankfurt am Main의 치주과, 치과, 구강 및 악안면 의학 센터(Carolinum)에서 치주 치료를 받고 있습니다. 보조 항생제를 사용한 항감염 요법이 그들 모두에게 제공되었으며 그들은 정기적이고 빈번한 지지 요법을 받고 있습니다. 치주과에서는 무치악이거나 다른 곳에서 치주 치료 중인 PLS 환자 5명을 추가로 접촉했습니다. 모든 환자는 완전한 구강 검사뿐만 아니라 손바닥과 발바닥의 피부 검사를 받았습니다. 각 성인 환자 또는 부모는 임상 및 유전 상담을 받고 Dresden 및 Frankfurt/Main 대학의 윤리 위원회에서 승인한 동의서에 서명했습니다. 모든 환자의 임상 데이터 및 돌연변이는 이전에 보고되었습니다. 이 모든 환자들은 이 연구에 참여하도록 초대되었습니다. 건강한 기증자는 연구 전 2주 동안 약물 복용을 삼가했습니다. 경구 피임약의 광범위한 사용으로 인해 남성 프로밴드만 선택되었습니다. 이 연구는 헬싱키 선언의 규칙을 준수했으며 Johann Wolfgang Goethe-University Frankfurt/Main(신청 번호 31/05) 의학부의 인간 연구를 위한 기관 검토 위원회의 승인을 받았습니다. 모든 참여 개인은 연구 절차뿐만 아니라 위험과 이점에 대해 통보받았고 서면 동의를 받았습니다.

전혈 배양 헤파린 처리된 혈액을 동량의 배양 배지(25 mM HEPES(2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid), 100 U/ml penicillin, 100 ㎍/ml 스트렙토마이신) 및 1ml 분취량을 느슨하게 밀봉된 둥근 바닥 폴리프로필렌 튜브(Greiner, 독일)로 옮겼다. 전혈 배양은 지정된 시간 동안 37 oC 및 5 % CO2에서 보관되었습니다. 그 후, 무세포 혈장/RPMI 샘플을 원심분리에 의해 얻었고 ELISA(효소 연결 면역흡착 에세이)에 의해 사이토카인 농도를 평가할 때까지 -70oC에서 보관했습니다. 실험은 채혈 후 60분 이내에 시작되었습니다. 따라서 전혈 배양은 적혈구뿐만 아니라 백혈구의 전체 범위로 구성되었습니다. IL-1β 방출 결정을 제외하고, 배양물은 비자극 대조군으로 유지되거나 LPS(10 또는 100ng/ml)로 자극되거나 IL-1β와 TNF-α(각각 50ng/ml)의 조합으로 24시간 동안 자극되었습니다. . IL-1β 방출의 결정을 위해, 세포를 비자극 대조군으로 유지하거나 모두 5시간 동안 Toll-유사 수용체 4 리간드 LPS(100 ng/ml)로 자극하였다. 활성화된 배양물로부터 IL-1β의 효율적인 방출을 위해, LPS는 퓨리노수용체 P2X7의 활성화를 달성하기 위해 5시간 자극 기간의 마지막 2시간 동안 첨가된 ATP(2mM)와 조합되었다.

ELISA 분석에 의한 사이토카인 방출 분석 혈장/RPMI 샘플은 제조업체의 지침에 따라 ELISA에 의해 측정되었습니다.

통계 개별 환자 또는 프로밴드를 통계 단위로 정의했습니다. 데이터는 사분위수 범위의 중앙값으로 표시되며 pg/ml(IL-1β, IL-6, IP-10) 또는 ng/ml(IL-8)로 표시됩니다. 비모수 Mann Whitney U 테스트를 사용하여 PLS 환자와 건강한 지원자 간의 중앙값을 비교했습니다. 통계 분석은 컴퓨터 프로그램(Systat for Windows version 10.0, Systat Inc., Evanston, IL, USA)을 이용하여 수행하였다.