Citokinek Papillon-Lefèvre szindrómában

ANYAG ÉS MÓDSZER Anyagok A lipopoliszacharidot (LPS; Escherichia coli, R515 szerotípus) az Alexis-től (Lausen, Svájc), az adenozin-trifoszfátot (ATP) pedig a Sigmától (Deisenhofen, Németország) vásároltuk. Az α tumornekrózis faktort (TNF-α) a Knoll AG (Ludwigshafen, Németország) biztosította. Az IL-1β az Invitrogen/Biosource-tól (Karlsruhe, Németország) származott.

Betegek és egészséges donorok Öt PLS diagnózisú beteg áll parodontológiai kezelés alatt a Johann Wolfgang Goethe Egyetem, Frankfurt am Main Fogászati, Száj- és Állcsontgyógyászati ​​Központ (Carolinum) Parodontológiai Osztályán. Kiegészítő antibiotikumokkal végzett fertőzésellenes kezelésben részesültek mindannyian, rendszeres és gyakori szupportív kezelés alatt állnak. A Parodontológiai Osztály további 5 olyan PLS-beteggel áll kapcsolatban, akik fogatlanok vagy máshol parodontális kezelés alatt állnak. Minden beteg teljes szájvizsgálaton esett át, valamint a kézfej és a talp bőrének vizsgálatán. Minden felnőtt beteg vagy szülei klinikai és genetikai tanácsadásban részesültek, és aláírták a Drezdai Egyetem és a Frankfurt/Main Egyetem etikai bizottsága által jóváhagyott beleegyező nyilatkozatot. Az összes beteg klinikai adatairól és mutációiról korábban is beszámoltak. Valamennyi beteget felkérték, hogy vegyenek részt ebben a vizsgálatban. Az egészséges donorok a vizsgálat előtt két hétig tartózkodtak a gyógyszerszedéstől. Az orális fogamzásgátlók széles körben elterjedt alkalmazása miatt csak férfi próbákat választottak. A tanulmány megfelelt a Helsinki Nyilatkozat szabályainak, és a Johann Wolfgang Goethe Egyetem Frankfurt/Main Orvostudományi Karának Humán Tanulmányok Intézményi Felülvizsgáló Testülete hagyta jóvá (Pályázat # 31/05). Minden részt vevő személy tájékoztatást kapott a kockázatokról és előnyökről, valamint a vizsgálat eljárásairól, és írásos beleegyezését adta.

Teljes vértenyészet A heparinizált vért azonos térfogatú táptalajjal (RPMI 1640, kiegészítve 25 mM HEPES-sel (2-[4-(2-hidroxi-etil)piperazin-1-il]etánszulfonsavval), 100 U/ml penicillinnel, 100 µg/ml sztreptomicin) és 1 ml-es alikvot részeket lazán lezárt kerek fenekű polipropilén csövekbe (Greiner, Németország) töltöttünk. A teljes vértenyészeteket 37 oC-on és 5 % CO2-on tartottuk a jelzett ideig. Ezt követően centrifugálással sejtmentes plazma/RPMI mintákat vettünk, és -70oC-on tároltuk, amíg a citokinkoncentrációt enzimhez kötött immunszorbens esszével (ELISA) meg nem határoztuk. A kísérletek a vérvételt követő 60 percen belül kezdődtek. Így a teljes vértenyészetek a fehérvérsejtek és az eritrociták teljes skáláját tartalmazták. Az IL-1β felszabadulás meghatározását kivéve a tenyészeteket vagy stimulálatlan kontrollként tartottuk, vagy LPS-sel (10 vagy 100 ng/ml), vagy IL-1β és TNF-α kombinációjával (50 ng/ml mindegyik) stimulálták 24 órán keresztül. . Az IL-1β felszabadulás meghatározásához a sejteket stimulálatlan kontrollként tartottuk, vagy Toll-like receptor 4 ligandum LPS-sel (100 ng/ml) stimuláltuk összesen 5 órán keresztül. Az IL-1β aktivált tenyészetekből való hatékony felszabadulása érdekében az LPS-t ATP-vel (2 mM) kombináltuk, amelyet az 5 órás stimulációs periódus utolsó 2 órájában adtunk hozzá a P2X7 purinoreceptor aktiválása érdekében.

A citokin felszabadulás elemzése ELISA analízissel IL-8, IL-6, interferonnal indukálható fehérje (IP)-10, interferon (IFN) gamma (Pharmingen/BD Biosciences) és IL-1β (R&D Systems) koncentrációi A plazma/RPMI mintákat ELISA-val határoztuk meg a gyártó utasításai szerint.

Statisztika Az egyéni pácienst vagy próbatestet statisztikai egységként határoztuk meg. Az adatokat mediánként, interkvartilis tartományban mutatjuk be, és pg/ml-ben (IL-1β, IL-6, IP-10) vagy ng/ml-ben (IL-8) adjuk meg. A mediánokat a PLS-ben szenvedő betegek és az egészséges önkéntesek között nem parametrikus Mann Whitney U teszttel hasonlították össze. A statisztikai elemzést számítógépes program segítségével végeztük (Systat for Windows 10.0, Systat Inc., Evanston, IL, USA).