MEPHISTO(철 과부하가 있는 대사 증후군의 대식세포 표현형) (MEPHISTO)

MEPHISTO는 병리생리학적, 횡단, 환자-대조군, 단일 센터 연구(University Hospital, Clermont-Ferrand, France)입니다. 이 연구의 일부로 개입(약물 또는 영양)이 수행되지 않으며 참가자는 제외 기간이 적용되지 않습니다. 우리의 목표는 철분 과부하가 단핵구/대식세포 분극화에 미치는 영향과 심혈관 위험 요인과의 관계를 조사하는 것입니다.

20명의 참가자로 구성된 3개 그룹으로 나누어 60개 주제를 연구합니다.

• 대사이상성 간세포피화증이 있는 피험자로 구성된 그룹 DIOS
• 철분 과부하가 없는 대사증후군 대상자로 구성된 그룹 M
• 마른 피실험자로 구성된 T군 DIOS군 참가자는 최근 DIOS로 진단되었으며, 이차성 고페리틴혈증이 없고 간 MRI에서 간 철분 과부하가 확인된 환자 중에서 선정되었습니다.

그룹 디오스의 모집은 내과업무에서 진행되었습니다. 그룹 M 및 DIOS의 피험자는 임상 조사 센터(CIC-501, Clermont-Ferrand)의 지원자 파일에서 가져옵니다. 그룹 M에서 그룹 DIOS의 대상자는 연령, 성별(+/- 5kg/m²) 및 BMI로 일치됩니다. 그룹 T에서 그룹 DIOS의 피험자는 연령과 성별로 일치합니다. 참가자들에게 직접적인 혜택이 기대되지 않기 때문에 그들은 50유로의 일시불 보상을 받습니다.

각 참가자는 임상 검사 및 혈액 샘플을 포함하여 1시간의 상담만 받습니다.

우리는 대사 증후군의 임상적 매개변수(허리 크기, BMI, 혈압)와 배제 요인(감염, 신생물, 항염증제)을 찾는 데 중점을 둡니다. 염증 및 산화 스트레스에 대한 잠재적인 영향으로 인해 이러한 요인은 흡연과 마찬가지로 제외되었습니다.

혈액 샘플은 다음을 수행하는 데 사용됩니다.

• 고전적인 실험실 테스트(혈구 수, 망상적혈구, ASAT, ALAT, LDH, 지질 프로필, 혈당, 인슐린혈증, TSH, , 비타민 D, 페리틴, 트랜스페린 포화도, CRP),
• ELISA에 의한 특정 투여량(IL-6, TNFalpha, hepcidine),
• FACS(Fluorescence Activated Cell Sorting)에 의한 단핵구 표현형(CD14, CD16, CD 163, MR),
• 실시간 PCR로 배양한 후 단핵구와 대식세포의 유전자 발현 측정.

우리의 주요 분석은 단핵구의 대체 대식세포(M2)로의 체외 분극화 및 표현형 특성화에 중점을 둡니다. (M2 대식세포를 유도하기 위해) 또는 IL-4 없이 (상주 대식세포를 유도하기 위해) 단핵구를 배양하기 전과 후에, 우리는 극성화의 표현형 마커(MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), 염증 마커의 발현을 측정할 것입니다. (TNFα, MCP-1, IL-6), 산화 스트레스 마커(HO-1) 및 철 대사 마커(페로포틴, 페리틴, 헵시딘). 정량적 PCR 미세유체 카드(TLDA, Taqman Low-Density Array)를 사용하여 단핵구 및 유형 M2 대식세포의 유전자 발현을 측정합니다. 이 기술은 24개의 유전자에 대한 발현 스크리닝을 허용합니다. 다양한 단계가 필요합니다: RNA 추출(RNeasy 키트, Qiagen), 역전사(RT-PCR 키트, HighCap cDNA RT 키트, Applied Biosystems), 증폭(TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems), 마지막으로 유전자 연구 식(GeneEx용 MFC TaqMan 어레이, 형식 24, Applied Biosystems). 우리의 주요 결과는 MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb의 발현으로 입증되는 M2 대식세포의 분극화 능력입니다. 임상 검사 데이터에 대한 철 과부하의 영향을 평가하는 표준 생물학 및 단핵구 유전자 발현 결과는 우리의 2차 결과입니다.