MEPHISTO (Makrophagen-Phänotyp bei metabolischem Syndrom mit Eisenüberladung) (MEPHISTO)

MEPHISTO ist eine pathophysiologische, transversale Fall-Kontroll-Single-Center-Studie (Universitätsklinikum Clermont-Ferrand, Frankreich). Im Rahmen dieser Studie wird keine Intervention (Arzneimittel oder Ernährung) durchgeführt und die Teilnehmer unterliegen keiner Ausschlussfrist. Unser Ziel ist es, die Auswirkungen einer Eisenüberladung auf die Monozyten/Makrophagen-Polarisation und ihre Beziehungen zu den kardiovaskulären Risikofaktoren zu untersuchen.

Wir studieren 60 Themen, die in 3 Gruppen von 20 Teilnehmern aufgeteilt sind:

• Gruppe DIOS bestehend aus Patienten mit dysmetabolischer Hepatosiderose
• Gruppe M bestehend aus Probanden mit metabolischem Syndrom ohne Eisenüberladung
• Gruppe T bestehend aus schlanken Probanden Die Teilnehmer der DIOS-Gruppe wurden unter Patienten ausgewählt, bei denen kürzlich DIOS diagnostiziert wurde, ohne jegliche sekundäre Hyperferritinämie und mit hepatischer Eisenüberladung, nachgewiesen durch Leber-MRT.

Die Rekrutierung der Gruppe DIOS erfolgte im internistischen Dienst. Die Probanden der Gruppe M und DIOS stammen aus der Akte der Freiwilligen des Zentrums für klinische Untersuchung (CIC-501, Clermont-Ferrand). Probanden der Gruppe M zur Gruppe DIOS werden nach Alter, Geschlecht (+/- 5 kg/m²) und BMI abgeglichen. Probanden der Gruppe T bis Gruppe DIOS werden nach Alter und Geschlecht abgeglichen. Da für die Teilnehmer kein direkter Nutzen zu erwarten ist, erhalten sie eine pauschale Entschädigung in Höhe von 50 Euro.

Jeder Teilnehmer durchläuft nur eine 1-stündige Beratung inklusive klinischer Untersuchung und Blutabnahme.

Wir konzentrieren uns auf klinische Parameter des metabolischen Syndroms (Taillenumfang, BMI, Blutdruck) und auf die Suche nach Ausschlussfaktoren (Infektion, Neoplasien, entzündungshemmende Medikamente). Aufgrund ihres potenziellen Einflusses auf Entzündungen und oxidativen Stress wurden diese Faktoren ebenso wie das Rauchen ausgeschlossen.

Die Blutprobe wird verwendet, um Folgendes durchzuführen:

• klassischer Labortest (Blutbild, Retikulozyten, ASAT, ALAT, LDH, Lipidprofil, Glykämie, Insulinämie, TSH, Vitamin D, Ferritin, Transferrinsättigung, CRP),
• spezifische Dosierungen (IL-6, TNFalpha, Hepcidin) durch ELISA,
• Monozyten-Phänotyp (CD14, CD16, CD 163, MR) durch FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting),
• Messung der Genexpression von Monozyten und Makrophagen nach Kultivierung mittels real-time PCR.

Unsere Hauptanalyse konzentriert sich auf die Ex-vivo-Polarisierung von Monozyten in alternative Makrophagen (M2) und die phänotypische Charakterisierung. Vor und nach der Kultivierung von Monozyten mit (um M2-Makrophagen zu induzieren) oder ohne IL-4 (um residente Makrophagen zu induzieren) messen wir die Expression phänotypischer Polarisationsmarker (MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), Entzündungsmarker (TNFα, MCP-1, IL-6), Marker für oxidativen Stress (HO-1) und Marker des Eisenstoffwechsels (Ferroportin, Ferritin, Hepcidin). Wir verwenden eine quantitative PCR-Mikrofluidikkarte (TLDA, Taqman Low-Density Array), um die Genexpression von Monozyten und Typ-M2-Makrophagen zu messen. Diese Technik ermöglicht das Screening der Expression von 24 Genen. Es sind verschiedene Phasen erforderlich: RNA-Extraktion (RNeasy-Kit, Qiagen), die reverse Transkription (RT-PCR-Kit, HighCap-cDNA-RT-Kit, Applied Biosystems), Amplifikation (TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems) und schließlich die Untersuchung des Gens Expression (MFC TaqMan Array for GeneEx, Format 24, Applied Biosystems). Unser Hauptergebnis ist die Polarisierungsfähigkeit in M2-Makrophagen, nachgewiesen durch die Expression von MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb. Die Bewertung des Einflusses der Eisenüberladung auf Daten aus der klinischen Untersuchung, die Ergebnisse der Standardbiologie und der Monozyten-Genexpression ist unser sekundäres Ergebnis.