MEPHISTO (макрофагальный фенотип при метаболическом синдроме с перегрузкой железом) (MEPHISTO)

MEPHISTO — патофизиологическое, поперечное, одноцентровое исследование типа «случай-контроль» (университетская клиника, Клермон-Ферран, Франция). В рамках этого исследования не проводится никаких вмешательств (медикаментозных или пищевых), и на участников не распространяется какой-либо период исключения. Наша цель — исследовать влияние перегрузки железом на поляризацию моноцитов/макрофагов и ее связь с сердечно-сосудистыми факторами риска.

Мы изучаем 60 предметов, разделенных на 3 группы по 20 участников:

• группа DIOS, состоящая из лиц с дисметаболическим гепатосидерозом
• группа М состоит из лиц с метаболическим синдромом без перегрузки железом
• группа Т, состоящая из худощавых субъектов. Участники группы DIOS были отобраны среди пациентов, недавно диагностированных как DIOS, без какой-либо вторичной гиперферритинемии и с перегрузкой печени железом, подтвержденной МРТ печени.

Набор группы ДИОС проводился в службе внутренних болезней. Субъекты группы М и DIOS происходят из досье добровольцев из центра клинических исследований (CIC-501, Клермон-Ферран). Субъекты группы М к группе DIOS соответствуют возрасту, полу (+/- 5 кг/м²) и ИМТ. Субъекты группы Т к группе DIOS сопоставимы по возрасту и полу. Поскольку для участников не ожидается никакой прямой выгоды, они получают единовременную компенсацию в размере 50 евро.

Каждый участник проходит всего 1 час консультации, включая клиническое обследование и забор крови.

Мы фокусируемся на клинических параметрах метаболического синдрома (размер талии, ИМТ, артериальное давление) и на поиске факторов исключения (инфекция, неоплазия, противовоспалительные препараты). Из-за их потенциального влияния на воспаление и оксидантный стресс эти факторы, как и курение, были исключены.

Образец крови будет использоваться для выполнения:

• классический лабораторный анализ (гематологическая картина, ретикулоциты, АсАТ, АлАТ, ЛДГ, липидограмма, гликемия, инсулинемия, ТТГ, витамин Д, ферритин, насыщение трансферрина, СРБ),
• конкретные дозы (IL-6, TNF-альфа, гепсидин) с помощью ELISA,
• фенотип моноцитов (CD14, CD16, CD 163, MR) с помощью FACS (сортировка клеток, активируемая флуоресценцией),
• измерение экспрессии генов моноцитов и макрофагов после культивирования методом ПЦР в реальном времени.

Наш основной анализ сосредоточен на поляризации моноцитов ex vivo на альтернативные макрофаги (M2) и фенотипической характеристике. До и после культивирования моноцитов с (для индукции макрофагов М2) или без IL-4 (для индукции резидентных макрофагов) мы будем измерять экспрессию фенотипических маркеров поляризации (MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), маркеров воспаления (TNFα, MCP-1, IL-6), маркеры окислительного стресса (HO-1) и маркеры метаболизма железа (ферропортин, ферритин, гепсидин). Мы используем количественную микрожидкостную карту ПЦР (TLDA, Taqman Low-Density Array) для измерения экспрессии генов моноцитов и макрофагов типа M2. Этот метод позволяет проводить скрининг экспрессии 24 генов. Требуются различные этапы: экстракция РНК (набор RNeasy, Qiagen), обратная транскрипция (набор для ОТ-ПЦР, набор для ОТ кДНК HighCap, Applied Biosystems), амплификация (TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems) и, наконец, исследование гена. экспрессия (MFC TaqMan Array для GeneEx, Format 24, Applied Biosystems). Нашим основным результатом является способность к поляризации в макрофагах М2, о чем свидетельствует экспрессия MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb. Оценка влияния перегрузки железом на данные клинического обследования, результаты стандартной биологии и экспрессию генов моноцитов является нашим вторичным результатом.