MEPHISTO（铁过载代谢综合征中的巨噬细胞表型） (MEPHISTO)

MEPHISTO 是一项病理生理学、横向、病例对照、单中心研究（大学医院，法国克莱蒙费朗）。 作为本研究的一部分，不进行任何干预（药物或营养），并且参与者不受任何排除期的限制。 我们的目标是研究铁过载对单核细胞/巨噬细胞极化的影响及其与心血管危险因素的关系。

我们研究 60 名受试者，分为 3 组，每组 20 名参与者：

• DIOS 组由代谢异常性肝素沉着症受试者组成
• M组由没有铁过载的代谢综合征受试者组成
• 由瘦受试者组成的 T 组 DIOS 组参与者选自最近被诊断为 DIOS 的患者，没有任何继发性高铁蛋白血症和肝脏 MRI 证实的肝脏铁过载。

DIOS 组的招募在内科服务中进行。 M 组和 DIOS 的受试者来自临床研究中心 (CIC-501, Clermont-Ferrand) 的志愿者档案。 M 组与 DIOS 组的受试者在年龄、性别（+/- 5 kg/m²）和 BMI 方面相匹配。 T 组与 DIOS 组的受试者按年龄和性别匹配。 由于预计参与者不会直接受益，他们将获得 50 欧元的一次性补偿。

每个参与者仅接受 1 小时的咨询，包括临床检查和血液样本。

我们专注于代谢综合征的临床参数（腰围、BMI、血压）和寻找排除因素（感染、肿瘤、抗炎药物）。 由于它们对炎症和氧化应激的潜在影响，这些因素与吸烟一样被排除在外。

血液样本将用于执行：

• 经典实验室测试（血细胞计数、网织红细胞、ASAT、ALAT、LDH、脂质谱、血糖、胰岛素血症、TSH、维生素 D、铁蛋白、转铁蛋白饱和度、CRP），
• 通过 ELISA 的特定剂量（IL-6、TNFalpha、hepcidine），
• 通过 FACS（荧光激活细胞分选）的单核细胞表型（CD14、CD16、CD 163、MR），
• 通过实时 PCR 测量培养后单核细胞和巨噬细胞的基因表达。

我们的主要分析集中在单核细胞离体极化为替代巨噬细胞 (M2) 和表型表征。 在使用（诱导 M2 巨噬细胞）或不使用 IL-4（诱导常驻巨噬细胞）培养单核细胞前后，我们将测量极化表型标记（MR、CD200R、F13A1、CD163、AMAC1、TGFb）、炎症标记的表达（TNFα、MCP-1、IL-6）、氧化应激标志物（HO-1）和铁代谢标志物（铁转运蛋白、铁蛋白、铁调素）。 我们使用定量 PCR 微流控卡（TLDA，Taqman Low-Density Array）来测量单核细胞和 M2 型巨噬细胞的基因表达。 该技术允许筛选 24 个基因的表达。 需要不同的阶段：RNA 提取（RNeasy 试剂盒，Qiagen）、逆转录（RT-PCR 试剂盒、HighCap cDNA RT 试剂盒、Applied Biosystems）、扩增（TaqMan Fast Advanced Master Mix，Applied Biosystems），最后是基因研究表达（用于 GeneEx 的 MFC TaqMan 阵列，格式 24，Applied Biosystems）。 我们的主要结果是通过 MR、CD200R、F13A1、CD163、AMAC1、TGFb 的表达证明 M2 巨噬细胞的极化能力。 评估铁过载对临床检查数据的影响，标准生物学和单核细胞基因表达的结果是我们的次要结果。