MEPHISTO (Macrophage Phenotype In Metabolic Syndrome With Iron Overload) (MEPHISTO)

MEPHISTO er en patofysiologisk, tværgående, case-control, single-center undersøgelse (universitetshospital, Clermont-Ferrand, Frankrig). Ingen intervention (medicinsk eller ernæringsmæssig) udføres som en del af denne undersøgelse, og deltagerne er ikke underlagt nogen udelukkelsesperiode. Vores mål er at undersøge virkningerne af jernoverbelastning på monocyt/makrofager polarisering og dens relationer med de kardiovaskulære risikofaktorer.

Vi studerer 60 emner opdelt i 3 grupper på 20 deltagere:

• gruppe DIOS sammensat af forsøgspersoner med dysmetabolisk hepatosiderose
• gruppe M sammensat af forsøgspersoner med metabolisk syndrom uden jernoverbelastning
• gruppe T sammensat af magre forsøgspersoner DIOS gruppedeltagere blev udvalgt blandt patienter, der for nylig blev diagnosticeret som DIOS, uden nogen sekundær hyperferritinæmi og med hepatisk jernoverbelastning påvist ved lever-MR.

Rekruttering af gruppe DIOS foregik i internmedicinsk tjeneste. Emner fra gruppe M og DIOS kommer fra filen af ​​frivillige fra centeret for klinisk undersøgelse (CIC-501, Clermont-Ferrand). Emne i gruppe M til gruppe DIOS matches efter alder, køn (+/- 5 kg/m²) og BMI. Emner fra gruppe T til gruppe DIOS matches efter alder og køn. Da der ikke forventes nogen direkte fordel for deltagerne, modtager de en engangskompensation på 50 euro.

Hver deltager gennemgår kun en 1 times konsultation inklusive en klinisk undersøgelse og blodprøve.

Vi fokuserer på kliniske parametre for det metaboliske syndrom (taljestørrelse, BMI, blodtryk) og på at søge eksklusionsfaktorer (infektion, neoplasi, antiinflammatoriske lægemidler). På grund af deres potentielle indflydelse på inflammation og oxidant stress, blev disse faktorer, ligesom rygning, udelukket.

Blodprøven vil blive brugt til at udføre:

• klassisk laboratorietest (blodtal, retikulocytter, ASAT, ALAT, LDH, lipidprofil, glykæmi, insulinæmi, TSH, D-vitamin, ferritin, transferrinmætning, CRP),
• specifikke doser (IL-6, TNFalpha, hepcidin) ved ELISA,
• monocytfænotype (CD14, CD16, CD 163, MR) ved FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting),
• måling af genekspressionen fra monocytter og makrofager efter dyrkning ved real-time PCR.

Vores hovedanalyse fokuserer på ex vivo polarisering af monocytter til alternative makrofager (M2) og fænotypisk karakterisering. Før og efter dyrkning af monocytter med (for at inducere M2 makrofag) eller uden IL-4 (for at inducere resident makrofag), vil vi måle ekspressionen af ​​fænotypiske markører for polarisering (MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), inflammatoriske markører (TNFα, MCP-1, IL-6), oxidative stress-markører (HO-1) og markører for jernmetabolisme (ferroportin, ferritin, hepcidin). Vi bruger kvantitativt PCR mikrofluidkort (TLDA, Taqman Low-Density Array) til at måle genekspression af monocytter og type M2 makrofager. Denne teknik tillader screening af ekspression for 24 gener. Forskellige faser er påkrævet: RNA-ekstraktion (RNeasy-kit, Qiagen), omvendt transkription (RT-PCR-kit, HighCap cDNA RT-kit, Applied Biosystems), amplifikation (TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems) og endelig studiet af gen ekspression (MFC TaqMan Array for GeneEx, Format 24, Applied Biosystems). Vores vigtigste resultat er kapacitet til polarisering i M2 makrofager påvist ved ekspression af MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb. Ved at evaluere indflydelsen af ​​jernoverbelastning på data fra den kliniske undersøgelse er resultaterne af standardbiologi og monocyt-genekspression vores sekundære resultat.