MEPHISTO (Macrophage Fenotype In Metabolic Syndrome With Iron Overload) (MEPHISTO)

MEPHISTO är en patofysiologisk, tvärgående, fallkontrollerande, singelcenterstudie (universitetssjukhus, Clermont-Ferrand, Frankrike). Ingen intervention (läkemedel eller näringsmässigt) utförs som en del av denna studie och deltagarna är inte föremål för någon uteslutningsperiod. Vårt mål är att undersöka effekterna av järnöverbelastning på monocyt/makrofager polarisering och dess samband med kardiovaskulära riskfaktorer.

Vi studerar 60 ämnen uppdelade i 3 grupper om 20 deltagare:

• grupp DIOS består av patienter med dysmetabolisk hepatosideros
• grupp M består av försökspersoner med metabolt syndrom utan järnöverskott
• grupp T bestående av magra försökspersoner DIOS-gruppdeltagare valdes ut bland patienter som nyligen diagnostiserats som DIOS, utan någon sekundär hyperferritinemi och med leveröverskott av järn som bevisats av lever-MR.

Rekrytering av grupp DIOS genomfördes inom internmedicin. Föremålspersonerna i grupp M och DIOS kommer från arkivet med frivilliga från centrum för klinisk undersökning (CIC-501, Clermont-Ferrand). Ämne från grupp M till grupp DIOS matchas efter ålder, kön (+/- 5 kg/m²) och BMI. Ämnen från grupp T till grupp DIOS matchas efter ålder och kön. Eftersom ingen direkt nytta förväntas för deltagarna får de en engångsersättning på 50 euro.

Varje deltagare genomgår endast en 1 timmes konsultation inklusive en klinisk undersökning och blodprov.

Vi fokuserar på kliniska parametrar för det metabola syndromet (midjestorlek, BMI, blodtryck) och på att söka uteslutningsfaktorer (infektion, neoplasi, antiinflammatoriska läkemedel). På grund av deras potentiella inverkan på inflammation och oxidant stress uteslöts dessa faktorer, liksom rökning.

Blodprov kommer att användas för att utföra:

• klassiskt laboratorietest (blodantal, retikulocyter, ASAT, ALAT, LDH, lipidprofil, glykemi, insulinemi, TSH, vitamin D, ferritin, transferrinmättnad, CRP),
• specifika doser (IL-6, TNFalfa, hepcidin) med ELISA,
• monocytfenotyp (CD14, CD16, CD 163, MR) av FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting),
• mätning av genuttrycket från monocyter och makrofager efter odling med realtids-PCR.

Vår huvudanalys fokuserar på ex vivo polarisering av monocyter till alternativa makrofager (M2) och fenotypisk karakterisering. Före och efter odling av monocyter med (för att inducera M2 makrofag) eller utan IL-4 (för att inducera resident makrofag), kommer vi att mäta uttrycket av fenotypiska markörer för polarisation (MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), inflammatoriska markörer (TNFα, MCP-1, IL-6), oxidativ stressmarkörer (HO-1) och markörer för järnmetabolism (ferroportin, ferritin, hepcidin). Vi använder kvantitativt PCR-mikrofluidkort (TLDA, Taqman Low-Density Array) för att mäta genuttryck av monocyter och typ M2-makrofager. Denna teknik möjliggör screening av uttryck för 24 gener. Olika faser krävs: RNA-extraktion (RNeasy kit, Qiagen), omvänd transkription (RT-PCR-kit, HighCap cDNA RT-kit, Applied Biosystems), amplifiering (TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems) och slutligen studien av gen expression (MFC TaqMan Array for GeneEx, Format 24, Applied Biosystems). Vårt huvudsakliga resultat är polariseringskapaciteten i M2-makrofager bevisad genom uttryck av MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb. Att utvärdera påverkan av järnöverskott på data från den kliniska undersökningen, resultaten av standardbiologi och monocytgenuttryck är vårt sekundära resultat.