MEPHISTO (makrofagifenotyyppi metabolisessa oireyhtymässä raudan ylikuormituksella) (MEPHISTO)

MEPHISTO on patofysiologinen, poikittainen tapauskontrolli, yhden keskuksen tutkimus (yliopistosairaala, Clermont-Ferrand, Ranska). Tässä tutkimuksessa ei suoriteta interventioita (lääke- tai ravitsemushoitoa), eikä osallistujia koske poissulkemisjakso. Tavoitteenamme on tutkia raudan ylikuormituksen vaikutuksia monosyyttien/makrofagien polarisaatioon ja sen yhteyksiä kardiovaskulaarisiin riskitekijöihin.

Tutkimme 60 aihetta jaettuna kolmeen 20 osallistujan ryhmään:

• DIOS-ryhmä, joka koostuu potilaista, joilla on dysmetabolinen hepatosideroosi
• ryhmä M, joka koostui potilaista, joilla oli metabolinen oireyhtymä ilman raudan ylikuormitusta
• ryhmä T koostui laihoista koehenkilöistä DIOS-ryhmän osallistujat valittiin potilaista, joilla oli äskettäin diagnosoitu DIOS, ilman sekundaarista hyperferritinemiaa ja joilla oli maksan magneettikuvauksella todettu maksan raudan ylikuormitus.

DIOS-ryhmän rekrytointi toteutettiin sisätautipalvelussa. Ryhmän M ja DIOS koehenkilöt ovat peräisin kliinisen tutkimuksen keskuksen vapaaehtoisten tiedostoista (CIC-501, Clermont-Ferrand). Ryhmän M kohteet DIOS-ryhmään yhdistetään iän, sukupuolen (+/- 5 kg/m²) ja BMI:n mukaan. Ryhmän T ja DIOS:n kohteet yhdistetään iän ja sukupuolen mukaan. Koska osallistujille ei odoteta suoraa hyötyä, he saavat 50 euron kertakorvauksen.

Jokainen osallistuja käy läpi vain 1 tunnin konsultaation, johon sisältyy kliininen tutkimus ja verinäyte.

Keskitymme metabolisen oireyhtymän kliinisiin parametreihin (vyötärön koko, BMI, verenpaine) ja syrjäytystekijöiden etsimiseen (infektio, neoplasia, tulehduskipulääkkeet). Koska ne voivat vaikuttaa tulehdukseen ja hapetusstressiin, nämä tekijät, kuten tupakointi, suljettiin pois.

Verinäytettä käytetään suorittamaan:

• klassinen laboratoriokoe (verenkuva, retikulosyytit, ASAT, ALAT, LDH, lipidiprofiili, glykemia, insulinemia, TSH, , D-vitamiini, ferritiini, transferriini saturaatio, CRP),
• tietyt annokset (IL-6, TNFalpha, hepcidiini) ELISA:lla,
• monosyyttifenotyyppi (CD14, CD16, CD 163, MR) FACS:lla (fluoresenssiaktivoitu solulajittelu),
• geeniekspression mittaaminen monosyyteistä ja makrofageista reaaliaikaisella PCR:llä viljelyn jälkeen.

Pääanalyysimme keskittyy monosyyttien ex vivo -polarisaatioon vaihtoehtoisiksi makrofageiksi (M2) ja fenotyyppiseen karakterisointiin. Ennen ja jälkeen monosyyttien viljelyn (M2-makrofagin indusoimiseksi) tai ilman IL-4:ää (paikallisen makrofagin indusoimiseksi) mittaamme fenotyyppisten polarisaatiomarkkerien (MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), tulehdusmarkkerien ilmentymisen. (TNFα, MCP-1, IL-6), oksidatiiviset stressimarkkerit (HO-1) ja raudan aineenvaihdunnan markkerit (ferroportiini, ferritiini, hepsidiini). Käytämme kvantitatiivista PCR-mikrofluidikorttia (TLDA, Taqman Low-Density Array) monosyyttien ja tyypin M2 makrofagien geeniekspression mittaamiseen. Tämä tekniikka mahdollistaa 24 geenin ilmentymisen seulonnan. Vaaditaan eri vaiheita: RNA:n uuttaminen (RNeasy-pakkaus, Qiagen), käänteistranskriptio (RT-PCR-pakkaus, HighCap cDNA RT -pakkaus, Applied Biosystems), monistus (TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems) ja lopuksi geenien tutkimus. ekspressio (MFC TaqMan Array for GeneEx, Format 24, Applied Biosystems). Päätuloksemme on polarisaatiokyky M2-makrofageissa, mikä ilmenee MR:n, CD200R:n, F13A1:n, CD163:n, AMAC1:n ja TGFb:n ilmentymisestä. Arvioimme raudan ylikuormituksen vaikutusta kliinisen tutkimuksen tietoihin, standardibiologian ja monosyyttigeenin ilmentymisen tulokset ovat toissijainen tulos.