MEPHISTO (Fenotipo Macrófago En Síndrome Metabólico Con Sobrecarga De Hierro) (MEPHISTO)

MEPHISTO es un estudio fisiopatológico, transversal, de casos y controles, de un solo centro (hospital universitario, Clermont-Ferrand, Francia). No se realiza ninguna intervención (medicamentosa o nutricional) como parte de este estudio y los participantes no están sujetos a ningún período de exclusión. Nuestro objetivo es investigar los efectos de la sobrecarga de hierro sobre la polarización monocitos/macrófagos y sus relaciones con los factores de riesgo cardiovascular.

Estudiamos 60 sujetos divididos en 3 grupos de 20 participantes:

• grupo DIOS compuesto por sujetos con hepatosiderosis dismetabólica
• grupo M compuesto por sujetos con síndrome metabólico sin sobrecarga de hierro
• grupo T compuesto por sujetos delgados Los participantes del grupo DIOS fueron seleccionados entre pacientes con diagnóstico reciente de DIOS, sin hiperferritinemia secundaria y con sobrecarga hepática de hierro demostrada por resonancia magnética del hígado.

El reclutamiento del grupo DIOS se realizó en el servicio de medicina interna. Los sujetos del grupo M y DIOS provienen del archivo de voluntarios del centro de investigación clínica (CIC-501, Clermont-Ferrand). Los sujetos del grupo M al grupo DIOS se emparejan por edad, género (+/- 5 kg/m²) e IMC. Los sujetos del grupo T al grupo DIOS se emparejan por edad y género. Como no se espera ningún beneficio directo para los participantes, reciben una compensación a tanto alzado de 50 euros.

Cada participante se somete a una consulta de solo 1 hora que incluye un examen clínico y una muestra de sangre.

Nos enfocamos en parámetros clínicos del síndrome metabólico (tamaño de la cintura, IMC, presión arterial) y en la búsqueda de factores de exclusión (infección, neoplasia, antiinflamatorios). Debido a su potencial influencia sobre la inflamación y el estrés oxidativo, estos factores, al igual que el tabaquismo, fueron excluidos.

La muestra de sangre se utilizará para realizar:

• prueba de laboratorio clásica (hemograma, reticulocitos, ASAT, ALAT, LDH, perfil lipídico, glucemia, insulinemia, TSH, vitamina D, ferritina, saturación de transferrina, PCR),
• dosificaciones específicas (IL-6, TNFalfa, hepcidina) por ELISA,
• fenotipo de monocitos (CD14, CD16, CD 163, MR) por FACS (Clasificación de células activadas por fluorescencia),
• medición de la expresión génica de monocitos y macrófagos después del cultivo por PCR en tiempo real.

Nuestro análisis principal se centra en la polarización ex vivo de monocitos en macrófagos alternativos (M2) y caracterización fenotípica. Antes y después de cultivar monocitos con (para inducir macrófago M2) o sin IL-4 (para inducir macrófago residente), mediremos la expresión de marcadores fenotípicos de polarización (MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), marcadores inflamatorios (TNFα, MCP-1, IL-6), marcadores de estrés oxidativo (HO-1) y marcadores del metabolismo del hierro (ferroportina, ferritina, hepcidina). Utilizamos una tarjeta microfluídica de PCR cuantitativa (TLDA, Taqman Low-Density Array) para medir la expresión génica de monocitos y macrófagos tipo M2. Esta técnica permite el cribado de la expresión de 24 genes. Se requieren diferentes fases: extracción de ARN (kit RNeasy, Qiagen), transcripción inversa (kit RT-PCR, kit HighCap cDNA RT, Applied Biosystems), amplificación (TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems), y finalmente el estudio de genes. expresión (MFC TaqMan Array para GeneEx, Formato 24, Applied Biosystems). Nuestro resultado principal es la capacidad de polarización en macrófagos M2 evidenciada por la expresión de MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb. Nuestro resultado secundario es evaluar la influencia de la sobrecarga de hierro en los datos del examen clínico, los resultados de la biología estándar y la expresión génica de monocitos.