MEPHISTO (fenotype macrofagen bij metabool syndroom met ijzerstapeling) (MEPHISTO)

MEPHISTO is een pathofysiologische, transversale, case-control, single-center studie (universitair ziekenhuis, Clermont-Ferrand, Frankrijk). Er wordt geen interventie (medicijn of voeding) uitgevoerd als onderdeel van deze studie en de deelnemers zijn niet onderworpen aan een uitsluitingsperiode. Ons doel is om de effecten van ijzerstapeling op monocyten/macrofagen polarisatie en de relatie met cardiovasculaire risicofactoren te onderzoeken.

We bestuderen 60 proefpersonen verdeeld over 3 groepen van 20 deelnemers:

• groep DIOS samengesteld uit proefpersonen met dysmetabolische hepatosiderosis
• groep M samengesteld uit proefpersonen met metabool syndroom zonder ijzerstapeling
• groep T bestaande uit magere proefpersonen De deelnemers aan de DIOS-groep werden geselecteerd uit patiënten die onlangs de diagnose DIOS hadden gekregen, zonder enige secundaire hyperferritinemie en met ijzerstapeling in de lever bewezen door lever-MRI.

De rekrutering van groep DIOS gebeurde in de dienst interne geneeskunde. Onderwerpen van groep M en DIOS komen uit het bestand van vrijwilligers van het centrum voor klinisch onderzoek (CIC-501, Clermont-Ferrand). Onderwerpen van groep M tot groep DIOS worden gematcht op leeftijd, geslacht (+/- 5 kg/m²) en BMI. Onderwerpen van groep T tot groep DIOS worden gematcht op leeftijd en geslacht. Aangezien er voor de deelnemers geen direct voordeel wordt verwacht, ontvangen zij een forfaitaire vergoeding van 50 euro.

Elke deelnemer ondergaat slechts een consult van 1 uur inclusief een klinisch onderzoek en bloedafname.

We richten ons op klinische parameters van het metabool syndroom (tailleomvang, BMI, bloeddruk) en op het zoeken naar uitsluitingsfactoren (infectie, neoplasie, ontstekingsremmers). Vanwege hun potentiële invloed op ontstekingen en oxidatieve stress, werden deze factoren, evenals roken, uitgesloten.

Bloedmonster zal worden gebruikt om uit te voeren:

• klassieke laboratoriumtest (bloedtelling, reticulocyten, ASAT, ALAT, LDH, lipidenprofiel, glycemie, insulinemie, TSH, vitamine D, ferritine, transferrineverzadiging, CRP),
• specifieke doseringen (IL-6, TNFalpha, hepcidine) door ELISA,
• monocyten fenotype (CD14, CD16, CD 163, MR) door FACS (Fluorescentie geactiveerde celsortering),
• meting van de genexpressie van monocyten en macrofagen na kweken door real-time PCR.

Onze belangrijkste analyse richt zich op ex vivo polarisatie van monocyten in alternatieve macrofagen (M2) en fenotypische karakterisering. Voor en na het kweken van monocyten met (om M2-macrofaag te induceren) of zonder IL-4 (om residente macrofaag te induceren), zullen we de expressie meten van fenotypische markers van polarisatie (MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), inflammatoire markers (TNFα, MCP-1, IL-6), markers voor oxidatieve stress (HO-1) en markers van het ijzermetabolisme (ferroportine, ferritine, hepcidine). We gebruiken kwantitatieve PCR-microfluïdische kaart (TLDA, Taqman Low-Density Array) om genexpressie van monocyten en type M2-macrofagen te meten. Deze techniek maakt screening van expressie voor 24 genen mogelijk. Er zijn verschillende fasen nodig: RNA-extractie (RNeasy-kit, Qiagen), de omgekeerde transcriptie (RT-PCR-kit, HighCap cDNA RT-kit, Applied Biosystems), amplificatie (TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems), en ten slotte de studie van genen expressie (MFC TaqMan Array voor GeneEx, formaat 24, Applied Biosystems). Ons belangrijkste resultaat is het vermogen tot polarisatie in M2-macrofagen, wat blijkt uit expressie van MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb. Het evalueren van de invloed van ijzerstapeling op gegevens van het klinisch onderzoek, de resultaten van standaardbiologie en genexpressie van monocyten is onze secundaire uitkomst.