MEPHISTO (Macrophage Fenotype In Metabolic Syndrome With Iron Overload) (MEPHISTO)

MEPHISTO er en patofysiologisk, tverrgående, case-control, enkeltsenterstudie (universitetssykehus, Clermont-Ferrand, Frankrike). Ingen intervensjon (medikamentell eller ernæringsmessig) er utført som en del av denne studien, og deltakerne er ikke underlagt noen eksklusjonsperiode. Vårt mål er å undersøke effekten av jernoverbelastning på monocytt/makrofager polarisering og dens sammenheng med kardiovaskulære risikofaktorer.

Vi studerer 60 emner fordelt på 3 grupper på 20 deltakere:

• gruppe DIOS sammensatt av personer med dysmetabolsk hepatosiderose
• gruppe M sammensatt av personer med metabolsk syndrom uten jernoverskudd
• gruppe T sammensatt av magre forsøkspersoner DIOS-gruppedeltakere ble valgt blant pasienter som nylig ble diagnostisert som DIOS, uten sekundær hyperferritinemi og med hepatisk jernoverbelastning påvist ved lever-MR.

Rekruttering av gruppe DIOS ble gjennomført i indremedisinsk tjeneste. Emner fra gruppe M og DIOS kommer fra filen med frivillige fra senteret for klinisk undersøkelse (CIC-501, Clermont-Ferrand). Emne fra gruppe M til gruppe DIOS matches etter alder, kjønn (+/- 5 kg/m²) og BMI. Emner fra gruppe T til gruppe DIOS matches etter alder og kjønn. Siden det ikke forventes noen direkte fordel for deltakerne, får de en engangskompensasjon på 50 euro.

Hver deltaker gjennomgår kun en 1 times konsultasjon inkludert en klinisk undersøkelse og blodprøve.

Vi fokuserer på kliniske parametere for det metabolske syndromet (midjestørrelse, BMI, blodtrykk) og på å søke eksklusjonsfaktorer (infeksjon, neoplasi, antiinflammatoriske legemidler). På grunn av deres potensielle innflytelse på betennelse og oksidant stress, ble disse faktorene, på samme måte som røyking, ekskludert.

Blodprøve vil bli brukt til å utføre:

• klassisk laboratorietest (blodtelling, retikulocytter, ASAT, ALAT, LDH, lipidprofil, glykemi, insulinemi, TSH, vitamin D, ferritin, transferrinmetning, CRP),
• spesifikke doser (IL-6, TNFalpha, hepcidin) ved ELISA,
• monocyttfenotype (CD14, CD16, CD 163, MR) av FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting),
• måling av genuttrykket fra monocytter og makrofager etter dyrking ved sanntids PCR.

Vår hovedanalyse fokuserer på ex vivo polarisering av monocytter til alternative makrofager (M2) og fenotypisk karakterisering. Før og etter dyrking av monocytter med (for å indusere M2 makrofag) eller uten IL-4 (for å indusere resident makrofag), vil vi måle uttrykket av fenotypiske markører for polarisering (MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), inflammatoriske markører (TNFα, MCP-1, IL-6), oksidativt stressmarkører (HO-1), og markører for jernmetabolisme (ferroportin, ferritin, hepcidin). Vi bruker kvantitativt PCR mikrofluidkort (TLDA, Taqman Low-Density Array) for å måle genuttrykk av monocytter og type M2 makrofager. Denne teknikken tillater screening av uttrykk for 24 gener. Det kreves ulike faser: RNA-ekstraksjon (RNeasy-sett, Qiagen), revers transkripsjon (RT-PCR-sett, HighCap cDNA RT-sett, Applied Biosystems), amplifikasjon (TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems), og til slutt studiet av gen uttrykk (MFC TaqMan Array for GeneEx, Format 24, Applied Biosystems). Vårt hovedresultat er kapasitet til polarisering i M2 makrofager bevist ved uttrykk av MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb. Ved å evaluere påvirkningen av jernoverskudd på data fra den kliniske undersøkelsen, er resultatene av standard biologi og monocytt-genekspresjon vårt sekundære resultat.