MEPHISTO (phénotype macrophage dans le syndrome métabolique avec surcharge en fer) (MEPHISTO)

MEPHISTO est une étude physiopathologique, transversale, cas-témoins, monocentrique (CHU, Clermont-Ferrand, France). Aucune intervention (médicamenteuse ou nutritionnelle) n'est menée dans le cadre de cette étude et les participants ne sont soumis à aucune période d'exclusion. Notre objectif est d'étudier les effets de la surcharge en fer sur la polarisation monocyte/macrophage et ses relations avec les facteurs de risque cardiovasculaire.

Nous étudions 60 sujets répartis en 3 groupes de 20 participants :

• groupe DIOS composé de sujets atteints d'hépatosidérose dysmétabolique
• groupe M composé de sujets avec syndrome métabolique sans surcharge en fer
• groupe T composé de sujets maigres Les participants du groupe DIOS ont été sélectionnés parmi des patients récemment diagnostiqués comme DIOS, sans aucune hyperferritinémie secondaire et avec une surcharge hépatique en fer prouvée par l'IRM du foie.

Le recrutement du groupe DIOS a été effectué dans le service de médecine interne. Les sujets du groupe M et DIOS sont issus du fichier des volontaires du centre d'investigation clinique (CIC-501, Clermont-Ferrand). Les sujets du groupe M au groupe DIOS sont appariés selon l'âge, le sexe (+/- 5 kg/m²) et l'IMC. Les sujets du groupe T au groupe DIOS sont appariés selon l'âge et le sexe. Aucun avantage direct n'étant attendu pour les participants, ils reçoivent une indemnité forfaitaire de 50 euros.

Chaque participant ne subit qu'une consultation d'une heure comprenant un examen clinique et une prise de sang.

Nous nous concentrons sur les paramètres cliniques du syndrome métabolique (tour de taille, IMC, tension artérielle) et sur la recherche de facteurs d'exclusion (infection, néoplasie, anti-inflammatoires). En raison de leur influence potentielle sur l'inflammation et le stress oxydant, ces facteurs, tout comme le tabagisme, ont été exclus.

Un échantillon de sang sera utilisé pour effectuer :

• bilan biologique classique (numération formule sanguine, réticulocytes, ASAT, ALAT, LDH, bilan lipidique, glycémie, insulinémie, TSH, , vitamine D, ferritine, saturation de la transferrine, CRP),
• dosages spécifiques (IL-6, TNFalpha, hepcidine) par ELISA,
• phénotype des monocytes (CD14, CD16, CD 163, MR) par FACS (Fluorescence Activated Cell Sorting),
• mesure de l'expression génique des monocytes et des macrophages après culture par PCR en temps réel.

Notre analyse principale porte sur la polarisation ex vivo des monocytes en macrophages alternatifs (M2) et la caractérisation phénotypique. Avant et après culture de monocytes avec (pour induire le macrophage M2) ou sans IL-4 (pour induire le macrophage résident), nous mesurerons l'expression de marqueurs phénotypiques de polarisation (MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb), marqueurs inflammatoires (TNFα, MCP-1, IL-6), des marqueurs du stress oxydatif (HO-1) et des marqueurs du métabolisme du fer (ferroportine, ferritine, hepcidine). Nous utilisons une carte microfluidique PCR quantitative (TLDA, Taqman Low-Density Array) pour mesurer l'expression génique des monocytes et des macrophages de type M2. Cette technique permet le criblage de l'expression de 24 gènes. Différentes phases sont nécessaires : l'extraction de l'ARN (kit RNeasy, Qiagen), la transcription inverse (kit RT-PCR, kit HighCap cDNA RT, Applied Biosystems), l'amplification (TaqMan Fast Advanced Master Mix, Applied Biosystems), et enfin l'étude du gène (MFC TaqMan Array pour GeneEx, Format 24, Applied Biosystems). Notre résultat principal est la capacité de polarisation dans les macrophages M2 mise en évidence par l'expression de MR, CD200R, F13A1, CD163, AMAC1, TGFb. L'évaluation de l'influence de la surcharge en fer sur les données de l'examen clinique, les résultats de la biologie standard et l'expression des gènes monocytes est notre résultat secondaire.