비강 알레르겐 노출 시 적응 면역 반응 및 이펙터 세포 반응의 변화 - 파일럿 연구

연구의 합리적

비강 알레르겐에 대한 생체 내 임상 및 면역학적 반응의 역학에 대한 이전 연구는 특정 매개변수에 초점을 맞추었지만 서로 다른 요인(즉, 알레르겐 특이 IgE 수준, 국소 IgE 및 매개체 생성, 호염기구 민감도, 피부 민감도). 따라서 조사관은 무작위 이중 맹검 위약 통제 연구를 제안합니다. 여기서 조사관은 알레르겐 추출물을 환자에게 비강 내 투여한 다음 4개월 동안 임상적 및 면역학적 면역 반응을 면밀히 모니터링합니다. 이후 자작나무 시즌 전과 후에 추가로 4번의 방문이 이루어집니다.

조사관은 꽃가루 계절 이외의 자작나무 꽃가루 추출물 비강 도전에 대한 즉시 및 후기 면역 반응을 살펴볼 것입니다. 연구 참가자는 처음에 3일 연속 비강 알레르겐 도전을 받은 후 1년 동안 면밀히 추적 관찰됩니다. 알레르겐 노출에 대한 임상적 반응을 평가하기 위해 조사관은 피부단자검사(SPT), 총 비강 증상 점수(TNSS), 비강 내시경 검사 및 피크 흡기 비강 유량계(PNIF)를 사용할 것입니다. 혈액을 포함한 면역 반응 샘플을 평가하기 위해 비강 점막 샘플링 및 비강 분비물을 채취합니다.

연구 설계

이 단일 센터, 무작위, 위약 대조, 이중 맹검 연구에서 총 36명의 환자(사전 연구의 경우 6명)가 자발적으로 이 연구에 모집되고 자작나무로 비강 도전을 받도록 무작위 배정됩니다. 꽃가루 추출물 또는 위약. 무작위화는 Bet v 1 특정 IgE 수준에 따라 계층화되어 두 그룹에서 균등한 분포를 허용합니다. 30명의 연구 참가자는 자작나무 꽃가루 시즌 외에 연속 3일 동안 자작나무 꽃가루 추출물 또는 위약으로 비강 자극을 받게 되며 그 후 최대 4개월 동안 정기적으로 후속 조치를 받게 됩니다.

처음에 30명의 환자를 대상으로 한 연구에 앞서 6명의 자작나무 꽃가루 알레르기 피험자가

1. 비강 도발에 사용되는 알레르겐 농도는 IgE 항체의 상승을 유도하기에 충분합니다.
2. 피부 찌름 테스트의 적정이 적절한지

3. 매개체 결정을 위한 비강 분비물 채취 시기가 적절하다.

   이 6명의 환자의 결과가 비강 알레르겐 농도, 피부 테스트 적정 또는 비강 분비 시기가 적절하지 않은 것으로 밝혀지면 수정안이 윤리위원회에 제출됩니다.

   단축된 프로토콜에는 5회의 방문이 포함됩니다.

   • 완전한 스크리닝 방문
   • 완전한 방문 N1
   • 혈액 샘플링 및 비강 샘플링 없이 N2 방문
   • 혈액 샘플링 및 비강 샘플링 없이 N3 방문
   • 완전한 방문 N7

   스크리닝 방문

   절차

   • 정보에 입각한 동의서 서명(버전 2.1. 짧은 프로토콜의 초기 연구용, 주요 연구용 버전 1.8(확장을 위해 업데이트됨)
   • 심사번호 부여
   • 인구 통계 데이터
   • 알레르기의 역사
   • 포함 및 제외 기준 평가
   • SPT가 필요한 경우 여성을 위한 임신 테스트
   • 병력
   • 병용 약물
   • 전방 코경술
   • 개암, 물푸레나무, 잡초, 돼지풀, 쑥, D. pteronyssinus, D. farina, 고양이 및 개의 비듬, 알터나리아, 클라도스포리움, 히스타민 및 음성 대조군의 상업용 추출물을 포함하는 표준 SPT
   • 상업용 자작나무 꽃가루 추출물을 이용한 적정 피부 단자 테스트
   • 혈액 샘플링(최대 60ml의 헤파린 처리된 혈액 및 혈청) - 혈액 샘플의 일부는 호염기구 활성화, 총 IgE 및 관련 알레르겐에 대한 특정 IgE 분석을 위해 실험실로 직접 보내집니다. 나머지 혈액에서 RNA를 준비하여 -80°C에 보관하고 혈청을 분리하여 -20°C에 보관합니다.
   • 비강 샘플링(비강 세척, 점막 큐렛 샘플링 및 비강 분비물 샘플링)

   방문 N0

   시기에 대한 요구 사항: 방문 N0은 방문 N1 이전 2주에서 4일 사이로 예정되어 있습니다. N1 방문 전 3주 이상 선별검사를 받은 환자에 한함

   절차:

   • 채혈
   • 비강 검체 수집(세척, 점막 큐렛 샘플링 및 비강 분비물 샘플링)
   • 적정 SPT
   • PNIF
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   N1 방문

   절차:

   • In 및 Exclusion 기준 재평가(알레르겐 특이 IgE 결과)
   • 무작위 배정: 피험자에게 치료 번호가 지정됩니다.
   • 기준 혈액 샘플링
   • 베이스라인 비강 검체 수집(세척, 비강 점막 샘플링 및 비강 분비물 샘플링)
   • 기준선 TNSS 점수
   • 부작용(AE) 기록
   • 병용 약물
   • 환자에게 제공되는 PNIF 및 작동 방식에 대한 설명/시연. 환자는 일일 PNIF 값(N1에서 N5까지)을 추적하기 위해 종이 일기를 받게 됩니다. 이 유제품은 일일 TNSS 점수(N4-N5)를 기록하는 데에도 사용됩니다.
   • 임신 테스트
   • 안에. 자작 나무 꽃가루 추출물 또는 위약 투여
   • 도발 직후 증상 기록
   • 자작나무 꽃가루 추출물 투여 후 20분, 40분, 1시간, 2시간, 4시간, 20-24시간에 혈액, PNIF, 비강 샘플링(비강 세척, 점막 큐렛 샘플링 및 비강 분비물 샘플링) 및 TNSS 점수(20-24시간 시점에 수행됨) 방문시 N2).
   • 자작나무 꽃가루 추출물 투여 후 10분, 3시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간에 비강 샘플링, PNIF 및 TNSS 점수
   • 적정 SPT
   • 필요한 경우 구조 약물 투여(azelastine 비강 스프레이, desloratadin 5mg)

   N2 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 N2는 방문 N1 다음날로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 혈액, PNIF, 비강 샘플링(세척액, 점막 큐렛 샘플링 및 비강 분비물 샘플링) 및 TNSS 점수(N1에서 자작나무 꽃가루 추출물 투여 후 20-24시간 시점).
   • AE 기록
   • 병용 약물
   • 안에. 자작나무 꽃가루 추출물 또는 위약 투여 후 2시간 관찰
   • 도발 직후 증상 기록
   • 필요한 경우 구조 약물 투여(azelastine 비강 스프레이, desloratadin 5mg)
   • 참고: 초기 6명의 연구 대상자에서는 비강 및 혈액 샘플링이 수행되지 않습니다.

   N3 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   N3 방문은 N2 방문 다음날로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 도발 전 채혈
   • 도발 전 비강 검체 채취(세척, 점막 큐렛 채취 및 비강 분비물 채취)
   • 도발 전 TNSS 점수
   • 적정 SPT
   • 부작용(AE) 기록
   • 병용 약물
   • 안에. 자작 나무 꽃가루 추출물 또는 위약 투여
   • 도발 직후 증상 기록
   • 혈액, PNIF, 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 샘플링 및 비강 분비물 샘플링) 및 TNSS 점수 20분, 40분, 1시간, 2시간, 4시간, 20-24시간 및 자작나무 꽃가루 추출물 투여 후(20-24시간 시점은 N4를 방문하십시오).
   • 자작나무 꽃가루 추출물 투여 후 10분, 3시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간에 비강 샘플링, PNIF 및 TNSS 점수
   • 필요한 경우 구조 약물 투여(azelastine 비강 스프레이, desloratadin 5mg)
   • 참고: 초기 6명의 연구 대상자에서는 비강 및 혈액 샘플링이 수행되지 않습니다.

   N4 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 N4는 방문 N3 다음날로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 자작나무 꽃가루 추출물 투여 20-24시간 후 혈액, PNIF, 비강 샘플링(세척액, 점막 큐렛 샘플링 및 비강 분비물 샘플링) 및 TNSS 점수.

   N5 방문

   방문 N5는 방문 N4 후 14 ±4일로 예정되어 있습니다:

   절차:

   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • PNIF
   • 적정 SPT
   • TNSS 점수
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트
   • 방문 N1부터 N5까지의 종이 일기 모음

   N6 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 N6은 방문 N5 후 14 ±4일로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • PNIF
   • 적정 SPT
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   N7 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 N7은 방문 N6 후 14 ±4일로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • PNIF
   • 적정 SPT
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   N8 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 N8은 방문 N7 후 14 ±4일로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • PNIF
   • 적정 SPT
   • 점수
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   N9 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 N9는 방문 N8 후 14 ±4일로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • PNIF
   • 적정 SPT
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   N10 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 N9는 방문 N9 후 14 ±4일로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • PNIF
   • 적정 SPT
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   N11 방문 - 코 도발 구성 요소의 최종 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 N11은 방문 N10 후 28 ±4일로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 면역학적 매개변수 및 비강 샘플링을 위한 혈액(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • PNIF
   • 적정 SPT
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   S1 방문 (연장 - 2019년 2월 11일 MUW 윤리위원회 승인)

   시기 관련 요구 사항: S1 방문은 예상되는 자작나무 시즌 시작 4주 전(+/- 7일)으로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 종이 꽃가루와 PNIF 일기는 환자에게 설명하고 자작 나무 시즌 동안 매일 작성하도록 요청했습니다.
   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • 적정 SPT
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   S2 방문

   시기 관련 요구 사항: S2 방문은 자작나무 시즌 종료 후 4주(+/- 7일)로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • 수집 종이 일기
   • 관찰된 PNIF
   • 적정 SPT
   • 방문 시 TNSS 점수
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   S3 방문

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 S3은 방문 S2 후 4주에 예정되어 있습니다 - (+/- 7일)

   절차:

   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • 관찰된 PNIF
   • 적정 SPT
   • 방문 시 TNSS 점수
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트

   S4 방문 및 연구 종료

   타이밍 관련 요구 사항:

   방문 S4는 전체 연구 시작 후 1년(방문 N0 후 1년) +/- 7일로 예정되어 있습니다.

   절차:

   • 혈액 및 비강 샘플링(세척, 점막 큐렛 및 비강 분비물 샘플링)
   • 관찰된 PNIF
   • 적정 SPT
   • 방문 시 TNSS 점수
   • AE 기록
   • 마지막 테스트가 한 달 이상 지난 경우 여성의 임신 테스트
   • 연구 종료

   연구 절차에 대한 설명

   환자의 병력, 인구 통계학적 데이터, 병용 약물 환자는 인구 통계학적 데이터 및 병용 약물을 포함한 병력, 강도 및 기간을 포함한 알레르기 증상 및 알레르기 약물 병력에 대해 질문을 받게 됩니다.

   알레르기 병력 및 TNSS 점수

   환자는 재채기, 콧물, 코가려움증, 코막힘, 수면의 질의 발생 여부를 묻고 방문할 때마다 각 증상의 등급을 매기고 집에 기록을 남깁니다. 그들은 다음과 같은 증상 점수 방법을 사용합니다: 0 = 결석; 1 = 약함 - 존재하지만 쉽게 용인됨; 2 = 중등도 - 현재, 증상이 귀찮지만 일상 생활 활동을 방해하지 않음; 3 = 중증 - 증상이 견디기 어렵고 일상 생활 활동에 지장을 줍니다(24). 이 외에도 양식에 총 질병 부담의 시각적 아날로그 척도가 있을 것입니다.

   전방 코경술

   해부학적 변이(예: 비중격 만곡) 또는 병리학적 변화(예: 비용종). 환자가 머리를 약간 뒤로 젖힌 상태에서 검경을 사용하여 수행됩니다.

   최대 흡기 비강 유량계(PNIF)

   PNIF의 휴대성과 용이성은 환자가 집에 있는 동안 객관적인 측정을 얻을 수 있는 독특한 기회를 제공합니다. 또한 최근 비강 알레르겐 챌린지 동안 연구 도구로 검증되었습니다.

   절차:

   방문 1에서 환자는 PNIF 장치(In-check, 흡기 유량계) 사용법을 교육받고 N5까지 집에 가져갈 수 있는 장치를 받게 됩니다. PNIF는 저관성 표시기 링과 함께 분당 리터로 직접 보정된 가변 직경 튜브를 사용합니다. 흡기 조작 후 링의 위치는 달성된 최대 흐름을 나타냅니다. 이 장치는 환자가 입이나 코를 통해 숨을 들이마실 때 작동하며 이로 인해 미터를 통해 공기가 흡입되고 커서가 눈금을 따라 이동하여 흡입 속도를 나타냅니다. 달성된 유속은 보정된 눈금에 대한 커서의 위치를 ​​확인하여 확인할 수 있습니다.

   연구 수행에서의 PNIF:

   PNIF는 연구 참여자들이 집으로 가져가서 비강 기류의 매일 또는 매주 유제품(연구 단계에 따라 다름)을 유지할 수 있도록 제공됩니다. 그들은 또한 관찰된 PNIF 측정을 수행할 수 있도록 모든 연구 방문에 가져오도록 요청받을 것입니다.

   피부단자시험

   4.5.1 절차: 알레르겐 함유 용액 한 방울(20ul)을 멸균 란셋으로 각 개별 적용 지점 사이에 최소 2cm의 간격을 두고 피부를 부드럽게 찔러 팔뚝의 진피에 알레르겐을 삽입합니다. 0.9% 염화나트륨 용액을 음성으로, 히스타민을 양성 대조군으로 사용합니다. 이전에 감작된 개인의 경우 가려운 부종과 피부의 붉어짐(팽진 및 발적 반응)이 각각의 알레르겐에 노출되면 15분 이내에 발생합니다. 20분 후 알레르겐 용액을 닦아내고 팽진의 여백을 볼펜으로 그립니다. 팽진의 윤곽을 테이프에 전사하여 기록용으로 투명테이프를 피부에 붙입니다. 팽진의 표면은 디지털 면적계로 계산됩니다. 포함을 위해 직경이 최소 3mm인 팽진은 양성 반응으로 간주됩니다.

   테스트 솔루션:

   상업적으로 이용 가능한 자작나무 꽃가루 추출물과 나무 및 풀 꽃가루 패널, 잡초 및 다년생 알레르겐(Allergopharma, Vienna, Austria)이 스크리닝 방문 시 사용되며 제조업체의 지침에 따라 보관됩니다. 대조군으로 멸균 0.9% NaCl 용액(음성 대조군) 및 히스타민(양성 대조군, Allergopharma, Vienna, Austria)을 사용한다. 제조업체의 지침에 따라 보관됩니다.

   연구 수행에서의 SPT:

   스크리닝 방문:

   ENT 부서의 알레르기 클리닉에서 일상적인 진단에 사용되는 상업용 자작나무 꽃가루 추출물과 나무 및 풀 꽃가루, 잡초 및 다년생 알레르겐 패널(모두 Allergopharma, Vienna, Austria)을 사용한 표준 피부 찌름 테스트를 수행하여 다음을 평가합니다. 스크리닝 방문 시 환자의 감작 프로필.

   스크리닝 및 방문 N0, N5 - N11, S1-S4 자작나무 추출물에 대한 적정 피부 단자 테스트는 희석을 증가시키면서 수행됩니다(희석은 1:60,000(=11 희석 단계)까지 3배 증가하여 결정됩니다. 피부 반응을 이끌어내는 가장 낮은 농도. 모든 희석액에 대한 피부 검사는 4회 실시됩니다. 상업적 양성 대조군 용액(히스타민) 및 음성 대조군은 중복으로 수행됩니다.

   안전 수칙 안전 수칙으로 검사 후 30분 동안 환자를 모니터링합니다. 모든 조사는 전체 응급 장비를 사용할 수 있는 ENT 부서의 외래 진료소에서 수행됩니다.

   혈액 샘플링 및 면역학적 파라미터 측정

   혈액 샘플은 스크리닝 방문 및 모든 연구 방문에서 피부 테스트 전에 전주정맥 천자에 의해 채취될 것입니다. 방문당 최대 60ml를 헤파린 처리(예: 호염기구 민감성 분석)하거나 혈청 준비(예: 전체 및 알레르겐 특정 면역글로불린 수준 평가 또는 RBL 분석)를 위해 사용합니다. 혈청 바이알이 처리되고 혈청은 -20°C에서 보관됩니다. 스크리닝 방문 혈액 샘플의 알레르겐 특이 IgE는 환자의 알레르겐 특이 RAST 등급을 평가하기 위해 CAP-FEIA로 측정됩니다. 전체, 유리 및 알레르겐 특이적 혈청 IgE, IgG, IgA 및 IgM의 측정은 CAP-FEIA, 마이크로어레이 측정 또는 ELISA에 의해 수행됩니다. 분석 간 변동을 최소화하기 위해 수집된 모든 혈청 샘플에서 연구가 끝날 때 측정이 수행됩니다. 알레르겐, fMLP 및 항-IgE에 대한 호염기구 반응 측정은 각 방문 시 수행됩니다. 간략하게, 호염기구는 다양한 농도의 항-IgE, fMLP 또는 재조합 알레르겐에 15분 동안 노출된 다음 유세포 분석을 통해 CD 63 및 CD203c의 발현에 대해 검사됩니다. 대안적으로, 히스타민 방출은 상업적으로 입수가능한 히스타민 방출 키트에 의해 결정될 것이다.

   임신 테스트

   여성 환자의 경우 표준 소변 임신 검사로 임신을 배제합니다. 검사는 스크리닝 내원 시 1차 피부단자검사 전과 이후 월 1회 실시한다.

   비강 표본 수집

   비강 표본 수집은 모든 방문에서 수행됩니다. 방문할 때마다 비흡수 FXi/PU(SAM(Synthetic Absorptive Matrix) 포함) 또는 10cm 길이의 플라스틱 큐렛(영국 Hunt Developments의 두 장치)을 사용하여 표본을 수집합니다.

   FXi/PU를 사용한 비흡수(Hunt Developments, UK):

   시각화 하에서 장치는 비강에 삽입되고 하비갑개에 대해 측벽을 따라 배치됩니다. 환자의 집게 손가락을 사용하여 콧날개와 측면 비강 연골의 외부를 눌러 장치를 제자리에 고정합니다. 1분 후 장치가 제거되고 유체가 원심분리로 추출됩니다. 알레르겐 특이적 및 총 Ig 수준, 매개체 및 사이토카인 수준의 존재에 대한 추가 분석이 있을 때까지 상층액을 -70°C에서 동결합니다.

   점막 mRNA 샘플링 10cm 비강 큐렛이 사용됩니다. 직접적인 시각화 하에서 큐렛은 하비갑개의 중하부 부분에 대해 놓이게 됩니다. 큐렛은 2-3회 바깥쪽으로 움직이는 점막 표면에 대해 눌러질 것입니다. 이 동작을 2-3회 반복하여 샘플을 잘 수집합니다. 이 큐렛과 기술은 환자에게 큰 불편을 주지 않는 것으로 나타났으며 따라서 국소 마취가 필요하지 않다는 이점이 있습니다. 수집 후 세포는 Qiagen RLT 완충액에서 용해되고 차후 mRNA 분석을 위해 -70C에 보관됩니다.

   4.9 비강 내 도전

   자작나무 꽃가루 추출물(Allergopharma, Vienna, Austria)을 멸균된 0.9% 염화나트륨 용액에 새로 희석하고 정량 펌프를 사용하여 투여합니다. 알레르겐은 방문 N1, N2, N3에서 양쪽 콧구멍에 퍼프당 15μl를 전달하는 정량 펌프를 사용하여 투여될 것입니다. 챌린지 후 환자가 코나 눈의 증상을 호소하는 경우 아젤라스틴 비강 스프레이 또는 데슬로라타딘 5mg을 공급한다.

   무작위화 절차

   주요 연구의 방문 N1에서 환자는 두 그룹(자작나무 꽃가루 추출물 또는 위약) 중 하나로 무작위 배정됩니다. 연구 대상은 Institute for Medical Informatics, Statistics and Documentation at Medical에서 유지 관리되는 온라인 무작위화 프로그램 "randomizer"(www.meduniwien.ac.at/randomizer)를 사용하여 무작위화됩니다(도발 대 제어의 비율 2:1). 그라츠 대학, 그라츠, 오스트리아. 2:1 비율이 선택된 이유는 전체 Ig 수준이 더 높을 것으로 예상되기 때문에 도발 그룹에서 Ig 측정 및 유도된 양의 분산이 더 클 것으로 예상되기 때문입니다. 또한 이 문서의 뒷부분에 있는 샘플 크기 고려 사항을 참조하십시오.

   무작위 배정은 연구에 참여하지 않고 환자와 접촉하지 않는 사람에 의해 수행되어 연구가 이중 맹검이 되도록 합니다.

   조사 제품 및 연구 약물

   자작나무 꽃가루 추출물:

   자작나무 꽃가루 추출물(Allergopharma, Vienna, Austria)은 비강 내 투여에 사용됩니다. 자작나무 꽃가루 추출물은 동결 건조된 상태로 도착하며 멸균된 0.9% 염화나트륨에 용해됩니다. 추출물 내 Bet v 1의 함량은 Bet v 1에 특이적인 항체 프로브를 사용한 면역블롯팅에 의해 결정될 것입니다. 마지막으로 추출물은 Bet v 1의 최종 농도가 50 μg/ml가 되도록 희석됩니다. 비강 도전시 특정 IgE 수준의 변화를 이끌어내는 것으로 나타났습니다.

   제어 솔루션:

   대조군 용액은 피부 찌름 시험을 위한 음성 대조군으로서 및 비강내 도전을 위한 위약으로서 염화나트륨 0.9%를 포함할 것이다. 히스타민(Allergopharma, Vienna, Austria)은 피부 찌름 테스트를 위한 양성 대조군으로 사용됩니다. 제조업체의 지침에 따라 보관됩니다.

   병용 약물

   일반적인:

   연구 참여 시 또는 연구 기간 중 언제든지 피험자가 복용하는 모든 추가 약물은 병용 약물로 간주되며 소스 데이터 파일에 문서화됩니다. 병용 약물은 연구 기간 동안 최소한으로 유지되어야 하지만 필요하다고 생각되는 경우 연구 프로토콜을 방해하지 않는 한 주어질 수 있습니다.

   구조 약물:

   이 연구에서 아나필락시성 사건이 발생할 가능성은 거의 없지만 항상 가능한 것으로 간주해야 합니다. 따라서 SPT에서 아나필락시스 반응이 발생하거나 비강 감염이 발생하는 경우 완전한 비상 키트를 즉시 사용할 수 있습니다. 또한 환자가 비강 챌린지 후 비강 및 눈 증상을 겪고 있는 경우 증상을 개선하기 위해 아젤라스틴 점비 스프레이 및/또는 데슬로라타딘 5mg을 제공합니다.

   금지된 병용 약물:

   피험자는 연구 기간 동안 연구 절차를 방해하는 약물을 중단해야 합니다. 다음과 같은 병용 치료는 이 연구 동안 허용되지 않습니다.

   • 전신 또는 국소 코르티코스테로이드
   • 기타 면역억제제
   • 방문 3일 전 항히스타민제 또는 크로모글리케이트이나트륨
   • 전신 또는 비강내 아드레날린성 약물
   • 정신약물
   • ACE 억제제 또는 베타 차단제

   부작용

   유해 사례는 피험자의 안녕을 손상시키는 동시 질병 또는 사고를 포함하여 임상 연구 동안의 모든 사건입니다. 그것은 또한 비정상적인 실험실 값의 형태를 취할 수 있습니다. 부작용이라는 용어는 연구 치료제와의 인과관계를 의미하지 않습니다.

   이상반응을 경험한 모든 피험자는 연구 치료제 사용과 관련이 있는지 여부에 관계없이 증상이 가라앉고 모든 비정상적인 실험실 수치가 기준선으로 돌아올 때까지 또는 관찰된 변화에 대한 만족스러운 설명이 있을 때까지 또는 사망할 때까지 모니터링됩니다. , 이 경우 자격을 갖춘 병리학자의 전체 병리 보고서가 제공됩니다. 모든 결과는 사례 기록 양식의 "부작용" 페이지에 보고되어야 합니다.

   모든 부작용은 아래에 설명된 대로 보고되고 문서화됩니다. 부작용은 "심각한" 및 "심각하지 않은" 범주로 나뉩니다. 이는 부작용을 보고/문서화하는 데 사용해야 하는 절차를 결정합니다.

   심각하고 심각하지 않은 부작용의 정의

   심각한 부작용은 다음과 같습니다.

   • 치명적이거나 생명을 위협하는 모든 사건
   • 영구적으로 비활성화되는 모든 이벤트
   • 입원이 필요하거나 연장되는 모든 사건
   • 암, 선천적 기형 또는 과량투여(규정용량 이상 적용)에 의해 발생하는 모든 사건.

   이러한 범주에 속하지 않는 부작용은 심각하지 않은 것으로 정의됩니다.

   AE의 중증도 평가

   심각하거나 심각하지 않은 이상반응의 분류(위 참조)와 관계없이, 그 중증도는 의학적 기준에 따라 경증, 중등도 또는 중증으로 평가되어야 합니다.

   경증 = 일상적인 활동을 방해하지 않음, 수용 가능 중등도 = 일상적인 활동을 방해함 심함 = 일상적인 활동을 수행하는 것이 불가능함, 의사가 허용할 수 없는 것으로 간주함, 치료가 필요함, 연구 중단이 필요함 또는 잔류 효과 있음.

   심각한 유해 사례는 본질적으로 심각할 필요가 없다는 점에 유의해야 합니다. 중증도에 관계없이 모든 심각한 이상반응은 아래와 같이 보고되어야 합니다.

   부작용 보고/문서화

   유해 사례는 자발적인 보고에 의해 수집됩니다.

   심각한 부작용 보고/문서화

   연구 약물과 관련된 것으로 간주되는지 여부에 관계없이 이 연구 동안 발생하는 모든 심각한 이상 반응은 사례 기록 양식의 "이상 반응" 페이지에 문서화되어야 합니다.

   심각한 사건에 대해 얻은 모든 새로운 정보를 포함하는 후속 보고서를 작성하고 수집해야 합니다.

   조사관은 요청 시 이러한 모든 보고서의 사본을 윤리 위원회에 제출합니다. 필요한 경우 조사관이 당국에 알립니다.

   심각하지 않은 부작용의 보고/문서화

   이들은 사례 기록 양식의 "부작용" 페이지에 문서화되어야 합니다.

   통계 분석

   파일럿 연구이므로 수행된 분석은 탐색 및 가설 생성으로 간주됩니다.

   환자 특성 및 결과 변수는 메트릭 변수에 대한 최대, 최소, 중앙값, 평균 및 표준 편차를 계산하고 범주형 변수에 대한 절대 및 상대 빈도를 계산하여 설명합니다.

   IgE 수준 및 기타 결과 변수의 시간 궤적을 분석하기 위해 평균에 대한 기술 통계 및 95% 신뢰 구간이 각 시점 및 각 치료 그룹에 대해 개별적으로 계산됩니다. 환자 간의 이질적인 기준선 수준을 설명하기 위해 각 환자에 대해 관찰된 결과는 이러한 분석에 대한 각각의 기준선 값으로 표준화됩니다. 또한, 그룹 간의 평균 차이 및 95% 신뢰 구간에 따라 각 시점에 대해 계산됩니다. 그래픽 설명을 위해 각 환자의 개별 궤적이 그려집니다.

   피부 찌름 테스트에서 관찰된 데이터는 일련의 알레르겐 용량과 그에 따른 면적 측정으로 구성됩니다. 이전 연구에서 8명의 환자로부터 얻은 예비 데이터를 기반으로, Area = A*(1-exp(-λ Dose) 유형의 지수 모델이 피부 단자 테스트에서 관찰된 용량-반응 관계를 적절하게 설명하는 것으로 밝혀졌습니다. 모델은 비선형 최소 제곱 알고리즘을 사용하여 각 그룹의 각 시점에 적합합니다. 이러한 모델에서 반응률 λ, 고원 영역 A 및 50% 유효 선량이 95% 신뢰 구간과 함께 보고됩니다.

   누락된 값이 있는 경우 모든 분석은 사용 가능한 사례별로 수행됩니다.

   샘플 크기 고려 사항:

   연구의 탐색적 특성을 감안할 때 표본 크기 고려 사항은 매개변수 추정치의 정확도를 기반으로 합니다. 주요 목표는 시간 경과에 따른 IgE 수준의 분석입니다. 이전 연구의 날짜는 Bet v 1로 비강 도발 4주 후 항-Bet v 1 IgE의 상대적인 증가를 평균 인자 1.4 및 환자 간 약 0.5의 표준 편차로 나타냅니다. 대조군 항원의 경우 평균 인자는 1.04이고 표준 편차는 약 0.25입니다. 두 그룹 간의 평균값 비교를 위한 최대 통계적 정밀도는 할당 비율이 이전 데이터를 기준으로 2:1인 표준 편차의 비율에 비례하는 경우에 달성됩니다. 효과 크기 및 표준 편차에 대한 위의 가정 하에서 총 표본 크기 30(20:10)은 각 그룹에서 약 0.2의 절반 너비로 95% 신뢰 구간을 제공합니다. 그룹 간 평균 차이에 대한 95% 신뢰 구간의 예상 절반 너비는 0.28입니다. (해당 두 표본 t-검정은 5% 유의 수준에서 0.4의 평균 차이를 탐지하는 80%의 검정력을 가집니다). 피부단자시험의 분석을 위해, 예비 데이터는 표본 크기가 20명일 때 50% 유효 선량에 대한 95% 신뢰 구간의 반값이 50% 유효 선량의 약 0.25배가 될 것이라고 제안합니다. 이 파일럿 연구를 위한 충분한 정밀도입니다. 그래픽 표현은 부록을 참조하십시오.

   윤리적, 법적 측면

   연구는 현지 법적 요구 사항 및 GCP를 준수하여 수행됩니다. 현재 개정된 내용을 포함하여 헬싱키 선언(1964)의 지침에 따라 수행됩니다.

   피험자의 사전 동의

   피험자는 연구에 참여하기 전에 임상 연구의 성격, 범위 및 가능한 결과를 이해할 수 있는 형태로 설명한 후 참여에 동의해야 합니다. 피험자는 서면으로 동의해야 합니다. 조사자의 서명은 피험자의 동의를 확인합니다. 환자는 의견을 제시하지 않더라도 향후 치료에 부정적인 결과를 초래하지 않고 언제든지 동의를 철회할 수 있습니다.

   연구 승인/승인

   연구가 시작되기 전에 연구 계획서는 비엔나 의과 대학 윤리위원회와 비엔나 종합 병원(Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Vienna, Austria)에 제출됩니다.

   보험

   이 연구에 참여하는 모든 피험자는 취리히 보험 회사(Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Vienna, Tel. +43 50 1255 1255; 보험 번호: 07229622-2).

   기밀성

   모든 대상의 이름은 조사관 파일에 비밀로 유지됩니다. 피험자는 연구 중에 할당된 수에 따라 문서화 및 평가를 통해 식별됩니다. 피험자는 모든 연구 결과가 가장 엄격한 기밀로 저장되고 처리된다는 말을 듣게 됩니다.

   연구 결과의 문서화 및 사용

   연구 결과의 문서화

   연구 중에 수집된 모든 결과는 원본 데이터 파일에 수집되고 나중에 사례 보고서 양식(CRF)으로 전송됩니다. 사건 기록 양식의 모든 항목은 검정색 또는 파란색 잉크로 읽기 쉽게 작성됩니다. 사례 기록 양식의 항목을 수정하면 단어나 그림에 고리가 생기고 한 획이 그어집니다. 이전 항목과 날짜 옆에 올바른 값이 입력되고 수정 사항이 이니셜로 표시됩니다. 부정확한 항목은 수정액으로 덮거나 어떤 식으로든 지워지거나 읽을 수 없게 만들어서는 안 됩니다. 완성된 CRF는 조사관이 서명합니다. CRF는 최종 시험 직후 완료됩니다. CRF의 기반이 되는 의료 기록은 최소 15년 동안 보관됩니다.

   연구 결과의 사용

   이 연구 결과는 조사관이 과학 저널에 발표하고 과학 회의에서 발표할 예정입니다. 원고는 제출 전에 모든 공동 연구자에게 회람됩니다.