Változások az adaptív immunválaszokban és az effektorsejt-válaszokban az orr allergénexpozíciója esetén – kísérleti tanulmány

A tanulmány indoklása

A nazális allergénre adott in vivo klinikai és immunológiai válaszok dinamikájáról szóló korábbi tanulmányok bizonyos paraméterekre összpontosítottak, de nem foglalkoztak a különböző tényezők közötti kölcsönhatás kinetikájával (pl. allergén-specifikus IgE szintek, helyi IgE és mediátor termelés, bazofil érzékenység, bőrérzékenység). A kutatók ezért egy randomizált, kettős-vak, placebo-kontrollos vizsgálatot javasolnak, amelyben A kutatók intranazálisan allergénkivonattal provokálják a betegeket, majd 4 hónapon keresztül szorosan figyelemmel kísérik a klinikai és immunológiai immunválaszokat. Ezt követően további 4 látogatásra kerül sor a nyírszezon előtt és után.

A kutatók megvizsgálják az azonnali és késői fázisú immunválaszokat a nyírfa pollenkivonat orrfertőzésére a pollenszezonon kívül. A vizsgálatban részt vevők kezdetben 3 egymást követő napon át esnek át orr-allergén-terhelésen, majd 1 évig szorosan nyomon követik őket. Az allergénexpozícióra adott klinikai válasz értékeléséhez a vizsgálók a bőrszúrási tesztet (SPT), a teljes orrtünet pontszámot (TNSS), az orr endoszkópiát és a Peak Inspiratory Nasal Flow Meter (PNIF) alkalmazzák. Az immunológiai válaszok értékeléséhez vérmintákat, orrnyálkahártya-mintákat és orrváladékot vesznek.

Dizájnt tanulni

Ebben az egyközpontú, randomizált, placebo-kontrollos, kettős-vak vizsgálatban összesen 36 (egy elővizsgálat esetében 6) beteget vonnak be önkéntes alapon ebbe a vizsgálatba, és véletlenszerű besorolást kapnak, hogy bármelyik nyírfával orrfertőzést kapjanak. pollenkivonat vagy placebo. A véletlenszerű besorolást a Bet v1 specifikus IgE-szintek szerint rétegezzük, hogy mindkét csoportban egyenlő eloszlást lehessen biztosítani. A vizsgálat 30 résztvevője a nyírfapollenszezonon kívül kap nazális provokációt nyírfapollenkivonattal vagy placebóval három egymást követő napon, majd ezt követően akár négy hónapig rendszeresen nyomon követik őket.

Kezdetben, a 30 beteg bevonásával végzett vizsgálat előtt 6 nyírfa pollenallergiás alanynak kell alávetni egy rövid protokollt annak biztosítása érdekében, hogy

1. A nazális provokációhoz használt allergén koncentráció elegendő az IgE antitestek növekedéséhez
2. Hogy a bőrszúrási teszt titrálásai megfelelőek-e

3. Az orrváladék felvételének időzítése a mediátorok meghatározásához megfelelő.

   Ha a 6 beteg eredményei azt mutatják, hogy az orr allergén koncentrációja, a bőrteszt titrálása vagy az orrváladék időzítése nem megfelelő, módosítást nyújtanak be az etikai bizottságnak.

   A rövidített protokoll 5 látogatást tartalmaz:

   • teljes szűrővizsgálat
   • teljes látogatás N1
   • vérvétel és orrvétel nélkül látogassa meg az N2-t
   • vérvétel és orrvétel nélkül látogassa meg az N3-at
   • teljes látogatás N7

   Szűrőlátogatás

   Eljárás

   • A tájékoztatáson alapuló beleegyező nyilatkozat aláírása (2.1. a kezdeti vizsgálathoz rövid protokollal, 1.8-as verzió (frissítve a kiterjesztéshez) a fő vizsgálathoz)
   • A vetítési szám kiosztása
   • Demográfiai adat
   • Az allergia története
   • Be- és kizárási kritériumok értékelése
   • Terhességi teszt nők számára, ha SPT-re van szükség
   • Kórtörténet
   • Egyidejű gyógyszeres kezelés
   • Elülső rhinoszkópia
   • Szabványos SPT kereskedelmi kivonattal: mogyoró, kőris, fűkeverék, parlagfű, bögrefű, D. pteronyssinus, D. farina, macska- és kutyaszőr, alternaria, cladosporium, hisztamin és negatív kontroll
   • Titrált bőrszúrási teszt kereskedelmi nyírfa pollen kivonattal
   • Vérmintavétel (max. 60 ml heparinizált vér és szérum) – A vérminta egy része közvetlenül a laboratóriumba kerül a bazofil aktiváció, az össz-IgE és a releváns allergének specifikus IgE-jének elemzésére. A vér többi részéből RNS-t készítenek és -80 °C-on tárolják, a szérumot pedig elválasztják és -20 °C-on tárolják.
   • orrmintavétel (orrmosás, nyálkahártya küretta mintavétel és orrváladék mintavétel)

   Látogassa meg az N0-t

   Követelmények az időzítéssel kapcsolatban: Az N0 látogatást az N1 látogatás előtt 2 hét és 4 nap között tervezik. Ez csak azokra a betegekre vonatkozik, akiket több mint 3 héttel az N1 látogatás előtt szűrtek

   Eljárás:

   • Vérvétel
   • Az orrminta gyűjtése (mosás, nyálkahártya küretta mintavétel és orrváladék mintavétel)
   • Titrált SPT
   • PNIF
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogassa meg az N1-et

   Eljárás:

   • Be- és kizárási kritériumok újraértékelése (allergén-specifikus IgE eredmények)
   • Randomizálás: Az alanyok kezelési számot kapnak
   • Kiindulási vérvétel
   • Kiindulási orrminta gyűjtés (mosás, orrnyálkahártya mintavétel és orrváladék mintavétel)
   • Kiindulási TNSS pontszám
   • Káros esemény (AE) rögzítése
   • Egyidejű gyógyszeres kezelés
   • PNIF-et kapnak a betegek, és magyarázatot/bemutatást adnak a működéséről. A betegek papíralapú naplót kapnak a napi PNIF értékek nyomon követésére (N1-től N5-ig). Ez a tejüzem a napi TNSS-pontszámok (N4-N5) rögzítésére is szolgál.
   • Terhességi teszt
   • ban ben. nyírfa pollen kivonat vagy placebo beadása
   • A tünetek azonnali dokumentálása a provokáció után
   • Vér-, PNIF-, orr-mintavétel (orrmosás, nyálkahártya-küret- és orrváladék-mintavétel) és TNSS-pontszám, 20 perc, 40 perc, 1 óra, 2 óra, 4 óra, 20-24 órával a nyírfapollen-kivonat beadása után (20-24 órás időpontban történik) az N2 látogatáson).
   • Orrmintavétel, PNIF és TNSS pontszám 10 perccel, 3 órával, 5 órával, 6 órával, 7 órával, 8 órával a nyírfa pollenkivonat beadása után
   • Titrált SPT
   • szükség esetén mentőgyógyszer adása (azelasztin orrspray, dezloratadin 5mg)

   Látogassa meg az N2-t

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az N2 látogatást az N1 látogatást követő napon tervezik

   Eljárás:

   • Vér-, PNIF-, orr-mintavétel (mosás, nyálkahártya-küret-mintavétel és orrváladék-mintavétel) és TNSS-pontszám (20-24 órás időpont a nyírfa pollenkivonat beadása után N1-ben).
   • AE felvétel
   • Egyidejű gyógyszeres kezelés
   • ban ben. nyírfa pollen kivonat vagy placebo beadása, majd 2 órás megfigyelési időszak
   • A tünetek azonnali dokumentálása a provokáció után
   • szükség esetén mentőgyógyszer adása (azelasztin orrspray, dezloratadin 5mg)
   • Megjegyzés: a kezdeti 6 vizsgálati alanynál nem végeznek orr- és vérmintavételt

   Látogassa meg az N3-at

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az N3 látogatást az N2 látogatást követő napon tervezik

   Eljárás:

   • Vérvétel provokáció előtt
   • Orrminta vétel provokáció előtt (mosás, nyálkahártya küretta mintavétel és orrváladék mintavétel)
   • TNSS pontszám provokáció előtt
   • Titrált SPT
   • Káros esemény (AE) rögzítése
   • Egyidejű gyógyszeres kezelés
   • ban ben. nyírfa pollen kivonat vagy placebo beadása
   • A tünetek azonnali dokumentálása a provokáció után
   • Vér-, PNIF-, orr-mintavétel (mosás, nyálkahártya-küret- és orrváladék-mintavétel) és TNSS-pontszám 20 perc, 40 perc, 1 óra, 2 óra, 4 óra, 20-24 óra, valamint nyírfa pollenkivonat beadása után (20-24 óra időpontban: látogasson el az N4-be).
   • Orrmintavétel, PNIF és TNSS pontszám 10 perccel, 3 órával, 5 órával, 6 órával, 7 órával, 8 órával a nyírfa pollenkivonat beadása után
   • Szükség esetén mentő gyógyszer beadása (azelasztin orrspray, dezloratadin 5 mg)
   • Megjegyzés: a kezdeti 6 vizsgálati alanynál nem végeznek orr- és vérmintavételt

   Látogassa meg az N4-et

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az N4-es látogatást az N3-as látogatást követő napon tervezik

   Eljárás:

   • Vér-, PNIF-, orr-mintavétel (öblítés, nyálkahártya-küret-mintavétel és orrváladék-mintavétel) és TNSS-pontszám a nyírfapollen-kivonat beadása után 20-24 órával.

   Látogassa meg az N5-öt

   Az N5 látogatást 14 ± 4 nappal az N4 látogatás után tervezik:

   Eljárás:

   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • PNIF
   • Titrált SPT
   • TNSS pontszám
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt
   • Papírnapló gyűjteménye Visit N1-től N5-ig

   Látogassa meg az N6-ot

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az N6 látogatást 14 ± 4 nappal az N5 látogatás után tervezik

   Eljárás:

   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • PNIF
   • Titrált SPT
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogassa meg az N7-et

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az N7 látogatást 14 ± 4 nappal az N6 látogatás után tervezik

   Eljárás:

   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • PNIF
   • Titrált SPT
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogassa meg az N8-at

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az N8-as látogatást az N7-es látogatás után 14 ±4 nappal tervezik

   Eljárás:

   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • PNIF
   • Titrált SPT
   • pontszám
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogassa meg az N9-et

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az N9 ​​látogatást 14 ± 4 nappal az N8 látogatás után tervezik

   Eljárás:

   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • PNIF
   • Titrált SPT
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogassa meg az N10-et

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az N9 ​​látogatást 14 ± 4 nappal az N9 látogatás után tervezik

   Eljárás:

   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • PNIF
   • Titrált SPT
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogatás N11 – Az orr-provokációs komponens utolsó látogatása

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az N11 látogatást az N10 látogatás után 28 ± 4 nappal tervezik

   Eljárás:

   • Vér immunológiai paraméterekhez és orrmintavételhez (mosás, nyálkahártya küret és orrváladék mintavétel)
   • PNIF
   • Titrált SPT
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogatás az S1-ben (hosszabbítás – az MUW Etikai Bizottsága jóváhagyta 2019. február 11-én)

   Időzítéssel kapcsolatos követelmények: Az S1 látogatást 4 héttel a nyírszezon előre jelzett kezdete előtt (+/- 7 nap) tervezzük.

   Eljárás:

   • Papír pollen és PNIF napló elmagyarázta a betegeknek, és kérték, hogy töltsék ki naponta a nyírfa szezonban
   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • Titrált SPT
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogassa meg az S2-t

   Időzítéssel kapcsolatos követelmények: Az S2 látogatást a nyírfa szezon vége után 4 héttel tervezik (+/- 7 nap)

   Eljárás:

   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • Gyűjteményi papírnapló
   • Megfigyelt PNIF
   • Titrált SPT
   • TNSS pontszám a látogatáskor
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogassa meg az S3 oldalt

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az S3 látogatást az S2 látogatás után 4 héttel tervezik - (+/- 7 nap)

   Eljárás:

   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • Megfigyelt PNIF
   • Titrált SPT
   • TNSS pontszám a látogatáskor
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt

   Látogassa meg az S4-et és a Tanulmány vége

   Az időzítéssel kapcsolatos követelmények:

   Az S4 látogatást 1 évvel a teljes vizsgálat megkezdése után (1 évvel a 0. látogatás után) +/- 7 nappal tervezik

   Eljárás:

   • Vér- és orrmintavétel (mosás, nyálkahártya-küret és orrváladék mintavétel)
   • Megfigyelt PNIF
   • Titrált SPT
   • TNSS pontszám a látogatáskor
   • AE felvétel
   • Terhességi teszt nőknek, ha az utolsó teszt több mint egy hónapja volt
   • Tanulmány vége

   A tanulmányi eljárások leírása

   A betegek kórtörténete, demográfiai adatok, egyidejűleg alkalmazott gyógyszeres kezelés A betegektől meg kell adni a kórtörténetüket, beleértve a demográfiai adatokat és az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket, az allergiás tüneteiket, beleértve az intenzitást és az időtartamot, valamint az allergiás gyógyszeres kezelés előzményeit.

   Allergia és TNSS pontszám a kórtörténetben

   A betegeket felkérik a tüsszögés, orrfolyás, orrviszketés, orrdugulás és alvásminőség előfordulására, és minden egyes látogatás alkalmával osztályozzanak minden tünetet, és vezessenek nyilvántartást otthon. A következő tünetpontozási módszert alkalmazzák: 0 = nincs jelen; 1 = enyhe – jelen van, de könnyen tolerálható; 2 = mérsékelt - jelen van, a tünet zavaró, de nem zavarja a mindennapi életet; 3 = súlyos – a tünet nehezen tolerálható, és zavarja a mindennapi életet (24). Ezen kívül lesz egy vizuális analóg skála a teljes betegségterhelésről az űrlapon.

   Elülső rhinoszkópia

   A szűrővizsgálat során egyszer elülső rhinoscopiát végeznek, hogy kizárják az anatómiai eltéréseket (pl. septális eltérés) vagy kóros elváltozások (pl. orrpolipok). Ezt egy tükör segítségével hajtják végre, miközben a páciens kissé hátrafelé ül.

   Csúcs belégzési orráramlásmérő (PNIF)

   A PNIF hordozhatósága és egyszerűsége egyedülálló lehetőséget biztosít objektív mérések készítésére, miközben a betegek otthon vannak. A közelmúltban tanulmányi eszközként is validálták az orr-allergén kihívás során.

   Eljárás:

   Az 1. vizit alkalmával a betegeket betanítják a PNIF készülék (In-check, Inspiratory Flow meter) használatára, és N5-ig hazavihetnek egyet. A PNIF változó átmérőjű csövet használ, amelyet közvetlenül liter/percben kalibrálnak, valamint egy alacsony tehetetlenségi nyomatékú jelzőgyűrűt. A gyűrű helyzete belégzési manőver után az elért maximális áramlást jelzi. A készülék akkor működik, amikor a páciens szájon vagy orrán keresztül lélegzik be, ami azt eredményezi, hogy a levegő átszívja a mérőt, és a kurzor a skálán mozog, jelezve a belégzés sebességét. Az elért áramlási sebességet a kurzor helyzetének a kalibrált skálával való összehasonlításával lehet megjegyezni.

   PNIF a vizsgálat során:

   A PNIF-et a vizsgálatban részt vevők hazavihetik, hogy napi vagy heti tejterméket tarthassanak (a vizsgálat fázisától függően) az orr légáramlását. Arra is felkérik őket, hogy minden tanulmányi látogatásra hozzák magukkal, hogy a megfigyelt PNIF-méréseket lehessen elvégezni.

   Bőrszúrási teszt

   4.5.1 Eljárás: Az allergéneket az alkar dermisébe kell bevinni úgy, hogy a bőrön egy csepp (20 ul) allergén tartalmú oldatot steril lándzsával óvatosan szúrnak át úgy, hogy az egyes alkalmazási pontok között legalább 2 cm legyen. Negatív kontrollként 0,9%-os nátrium-klorid oldatot, pozitív kontrollként hisztamint használunk. Korábban érzékenyített egyéneknél viszkető duzzanat és bőrvörösödés (bőrgyulladás és fellángolási reakció) 15 percen belül jelentkezik az adott allergénnel való érintkezés után. 20 perc elteltével az allergén oldatokat letöröljük, és golyóstollal megjelöljük a búza széleit. Átlátszó szalagot ragasztanak a bőrre, hogy a búza körvonalát átvigye a felvételek szalagjára. A bálnák felületét digitális planimetriával számítjuk ki. A felvételhez a legalább 3 mm átmérőjű búzaszemeket pozitív reakciónak kell tekinteni.

   Teszt megoldások:

   A szűrővizsgálaton a kereskedelemben kapható nyírfa pollenkivonatot, valamint a fa és fű pollenjét, a gyomnövényeket és az évelő allergéneket tartalmazó panelt (Allergopharma, Bécs, Ausztria) használjuk fel, és a gyártó utasításai szerint tároljuk. Kontrollként steril 0,9%-os NaCl-oldatot (negatív kontroll) és hisztamint (pozitív kontroll, Allergopharma, Bécs, Ausztria) használunk. Tárolásuk a gyártó utasításai szerint történik.

   SPT a vizsgálat lefolytatásában:

   Szűrőlátogatás:

   A fül-orr-gégészeti osztály allergiaklinikáján a rutin diagnosztikában használt szabványos bőrszúrási tesztet végeznek kereskedelmi nyírfa pollen kivonattal, valamint fa és fű pollenből, gyomnövényekből és évelő allergénekből álló panellel (valamennyi Allergopharma, Bécs, Ausztria). a beteg szenzibilizációs profilja a szűrővizsgálaton.

   Szűrés és látogatások N0, N5 - N11, S1-S4 Nyírfakivonat titrált bőrszúrási tesztet végeznek növekvő hígításokkal (a hígításokat 3-szorosára növelik 1:60 000-ig (=11 hígítási lépés) a legalacsonyabb koncentráció, amely bőrreakciót vált ki. A bőrteszteket minden hígításra négyszeres ismétlésben kell elvégezni. A kereskedelemben kapható pozitív kontrolloldatot (hisztamin) és a negatív kontrollt két párhuzamosban készítik el.

   Biztonsági óvintézkedések Biztonsági óvintézkedésként a betegeket a vizsgálat után 30 percig megfigyeljük. Minden vizsgálatot a fül-orr-gégészeti osztály Rendelőintézetében végeznek, ahol a teljes sürgősségi felszerelés rendelkezésre áll.

   Vérvétel és immunológiai paraméterek mérése

   A szűrővizsgálaton és minden vizsgálati látogatáson vérmintát vesznek az antecubitalis véna szúrásával a bőrvizsgálat előtt. Látogatásonként legfeljebb 60 ml-t kell bevenni heparinnal (például bazofil érzékenységi vizsgálatokhoz), vagy szérum készítéséhez (például a teljes és allergénspecifikus immunglobulinszintek vagy az RBL-vizsgálathoz). A szérum fiolákat feldolgozzák, és a szérumot -20°C-on tárolják. A szűrési vizit vérmintáinak allergén-specifikus IgE-jét CAP-FEIA méri, hogy felmérje a betegek allergén-specifikus RAST-osztályát. A teljes, szabad és allergénspecifikus szérum IgE, IgG, IgA és IgM mérését CAP-FEIA, microarray mérés vagy ELISA módszerrel végezzük. A mérést a vizsgálat végén minden összegyűjtött szérummintában elvégzik, hogy minimalizálják a vizsgálatok közötti eltéréseket. Az allergénre, az fMLP-re és az anti-IgE-re adott basophil válaszok mérésére minden egyes látogatás alkalmával kerül sor. Röviden, a bazofileket különböző koncentrációjú anti-IgE, fMLP vagy rekombináns allergének hatásának tesszük ki 15 percig, majd áramlási citometriával megvizsgáljuk a CD 63 és CD203c expresszióját. Alternatív megoldásként a hisztamin felszabadulást a kereskedelemben kapható hisztaminfelszabadító készletekkel határozzák meg.

   Terhességi vizsgálat

   Nőbetegeknél a terhesség kizárása standard vizelet terhességi teszttel történik. A tesztet a szűrővizsgálaton az első bőrszúrás előtt, majd havonta egyszer végezzük el.

   Orrmintagyűjtés

   Minden vizit alkalmával orrmintavételezésre kerül sor. Minden látogatás alkalmával mintákat veszünk nasosorption FXi/PU (szintetikus abszorpciós mátrixot (SAM)) vagy 10 cm hosszú műanyag kürettel (mindkét eszköz a Hunt Developmentstől, Egyesült Királyság).

   Nazoszorpció FXi/PU használatával (Hunt Developments, Egyesült Királyság):

   A vizualizáció során az eszközt behelyezik az orrüregbe, és az oldalfal mentén az alsó turbina mellé helyezik. A páciens mutatóujjával rá kell nyomni az orr- és oldalsó orrporc külső oldalait, hogy a készülék a helyén maradjon. 1 perc elteltével az eszközöket eltávolítjuk, és a folyadékot centrifugálással extraháljuk. A felülúszót -70 °C-on lefagyasztjuk az allergén-specifikus és a teljes Ig-szintek, a mediátor- és a citokinszintek jelenlétének további elemzéséig.

   Nyálkahártya-mRNS-mintavétel 10 cm-es orrkürettet használunk. Közvetlen megjelenítés esetén a küret az alsó turbina középső alsó részéhez feküdjön. A küretet 2-3 alkalommal kifelé mozgatva a nyálkahártya felületéhez kell nyomni. Ezt a mozdulatot 2-3 alkalommal meg kell ismételni a megfelelő mintagyűjtés érdekében. Kimutatták, hogy ez a küret és technika nem okoz jelentős kényelmetlenséget a betegeknek, így megvan az az előnye, hogy nincs szükség helyi érzéstelenítésre. Az összegyűjtés után a sejteket Qiagen RLT pufferben lizáljuk, és -70 °C-on tároljuk a későbbi mRNS elemzéshez.

   4.9 Intranazális kihívás

   A nyírfa pollen kivonatát (Allergopharma, Bécs, Ausztria) frissen hígítjuk steril 0,9%-os nátrium-klorid oldattal, és adagoló pumpával adjuk be. Az allergén adagolása egy adagolt pumpával történik, amely befújásonként 15 μl-t juttat mindkét orrlyukba az N1, N2, N3 látogatáskor. Ha a betegnek orr- vagy szemtünetei vannak a kihívást követően, azelastine orrspray vagy 5 mg dezloratadin fog kapni.

   Randomizálási eljárás

   A fő vizsgálat N1 vizitjén a betegeket véletlenszerűen besorolják a két csoport egyikébe (nyírfa pollenkivonat vagy placebo). A vizsgálati alanyok véletlenszerű besorolása történik (2:1 arány a provokáció és a kontroll esetében) a "randomizer" online randomizációs program (www.meduniwien.ac.at/randomizer) segítségével, amelyet az Orvosi Informatikai, Statisztikai és Dokumentációs Intézet tart fenn. Grazi Egyetem, Graz, Ausztria. A 2:1 arányt azért választottuk, mert az Ig-mérések és a származtatott mennyiségek szórása várhatóan nagyobb lesz a provokációs csoportban a várható magasabb össz-Ig-szintek miatt, lásd a mintamérettel kapcsolatos megfontolásokat a dokumentum későbbi részében.

   A véletlen besorolást olyan személy végzi el, aki nem vesz részt a vizsgálatban, és nincs kapcsolata a betegekkel, így biztosítva, hogy a vizsgálat kettős vak lesz.

   Vizsgálati termékek és tanulmányi gyógyszerek

   Nyírfa pollen kivonat:

   Nyírfa pollen kivonatot (Allergopharma, Bécs, Ausztria) használunk intranazális fertőzésre. A nyírfa pollenkivonat liofilizálva érkezik, és steril 0,9%-os nátrium-kloridban lesz feloldva. A kivonat Bet v 1 tartalmát immunblottal határozzuk meg a Bet v 1-re specifikus antitest próbákkal. Végül a kivonatot úgy hígítjuk, hogy a Bet v 1 végső koncentrációja 50 μg/ml legyen, ahogy ezt a koncentrációt korábban meghatároztuk. kimutatták, hogy változást váltanak ki a specifikus IgE-szintekben orrfertőzéskor.

   Ellenőrző megoldások:

   A kontrolloldatok 0,9%-os nátrium-kloridot tartalmaznak negatív kontrollként a bőrszúrási teszthez és placebóként az intranazális fertőzéshez. Pozitív kontrollként hisztamint (Allergopharma, Bécs, Ausztria) használnak a bőrszúrási teszthez. Tárolásuk a gyártó utasításai szerint történik.

   Egyidejű gyógyszeres kezelés

   Tábornok:

   Az alanyok által a vizsgálatba való belépéskor vagy a vizsgálat során bármikor szedett minden további gyógyszert egyidejű gyógyszernek kell tekinteni, és dokumentálni kell a forrásadatfájlban. Az egyidejűleg alkalmazott gyógyszereket minimálisra kell csökkenteni a vizsgálat során, de ha szükségesnek ítélik, adható, ha nem zavarja a vizsgálati protokollt.

   Mentő gyógyszer:

   Bár az anafilaxiás események ebben a vizsgálatban nagyon valószínűtlenek, ezeket mindig lehetségesnek kell tekinteni. Ezért azonnal rendelkezésre áll egy teljes sürgősségi készlet az SPT vagy az orrfertőzés során fellépő anafilaxiás reakciók esetére. Ezen túlmenően, ha a beteg az intranazális beadást követően orr- és szemtünetekben szenved, azelastine orrspray és/vagy dezloratadin 5 mg-ot biztosítanak a tünetek enyhítésére.

   Tiltott egyidejű gyógyszerek:

   Az alanyoknak a vizsgálat időtartama alatt tartózkodniuk kell a vizsgálati eljárásokat megzavaró gyógyszerektől. A következő egyidejű kezelések nem megengedettek a vizsgálat során:

   • Szisztémás vagy helyi kortikoszteroidok
   • Egyéb immunszuppresszáns gyógyszerek
   • Antihisztaminok vagy dinátrium-kromoglikát 3 nappal a látogatás előtt
   • Szisztémás vagy intranazális adrenerg gyógyszerek
   • Pszichofarmakológiai gyógyszerek
   • ACE-gátlók vagy béta-blokkolók

   Mellékhatások

   Nemkívánatos esemény minden olyan esemény a klinikai vizsgálat során, beleértve az egyidejű betegséget vagy balesetet, amely rontja az alany jólétét; abnormális laboratóriumi érték formájában is megjelenhet. A nemkívánatos esemény kifejezés nem utal okozati összefüggésre a vizsgálati kezeléssel.

   Minden olyan alanyt, akinél nemkívánatos események jelentkeznek – függetlenül attól, hogy összefüggésbe hozhatónak tekinthető-e a vizsgálati kezelés alkalmazásával, vagy sem – a tünetek enyhüléséig és a kóros laboratóriumi értékek visszatéréséig, vagy a megfigyelt változások kielégítő magyarázatáig, vagy a halálig monitorozni kell. , ebben az esetben szakképzett patológus teljes kórtani jelentését adjuk meg. Minden megállapítást jelenteni kell az esetnyilvántartási űrlap „mellékhatás” oldalán.

   Minden nemkívánatos eseményt jelentenek és dokumentálnak az alábbiak szerint. A nemkívánatos események „súlyos” és „nem súlyos” kategóriákra oszthatók. Ez határozza meg azt az eljárást, amelyet a nemkívánatos esemény bejelentésére/dokumentálására kell alkalmazni.

   A súlyos és nem súlyos nemkívánatos események meghatározása

   Súlyos nemkívánatos esemény:

   • Minden olyan esemény, amely végzetes vagy életveszélyes
   • Minden olyan esemény, amely véglegesen letiltásra kerül
   • Minden olyan esemény, amely kórházi kezelést igényel vagy meghosszabbítja
   • Minden olyan esemény, amely rákkal, veleszületett rendellenességgel vagy túladagolás következtében fordul elő (az előírtnál nagyobb adag alkalmazása).

   Ezek a kategóriákba nem tartozó mellékhatások nem súlyosnak minősülnek.

   Az AE súlyosságának értékelése

   Függetlenül attól, hogy egy nemkívánatos eseményt súlyosnak vagy nem súlyosnak minősítenek (lásd fent), annak súlyosságát enyhe, közepes vagy súlyos kategóriába kell sorolni, pusztán az orvosi kritériumok alapján:

   Enyhe = nem zavarja a rutintevékenységeket, elfogadható Mérsékelt = zavarja a rutintevékenységeket Súlyos = lehetetlen a rutintevékenységek elvégzése, az orvos szerint elfogadhatatlan, kezelést igényel, a vizsgálat leállítását igényli, vagy maradvány hatása van.

   Meg kell jegyezni, hogy a súlyos nemkívánatos eseménynek nem kell súlyosnak lennie. Súlyosságától függetlenül minden súlyos nemkívánatos eseményt jelenteni kell az alábbiak szerint.

   Nemkívánatos események jelentése/dokumentálása

   A nemkívánatos eseményeket spontán bejelentések gyűjtik össze.

   Súlyos nemkívánatos események jelentése/dokumentálása

   Minden súlyos nemkívánatos eseményt, amely a vizsgálat során fellép, függetlenül attól, hogy összefüggésbe hozható a vizsgálati gyógyszerrel, vagy sem, dokumentálni kell az esetnyilvántartási űrlap „Nemkívánatos esemény” oldalán.

   A súlyos eseményről szerzett minden új információt tartalmazó nyomon követési jelentést kell készíteni, és össze kell gyűjteni.

   A vizsgáló kérésre valamennyi jelentés másolatát benyújtja az etikai bizottságnak. Szükség esetén a nyomozók tájékoztatják a hatóságokat.

   A nem súlyos nemkívánatos események jelentése/dokumentálása

   Ezeket az esetnyilvántartási űrlap „Káros esemény” oldalán kell dokumentálni.

   Statisztikai analízis

   Mivel ez egy pilot tanulmány, az elvégzett elemzés feltáró és hipotézisgenerálónak tekinthető.

   A betegek jellemzőit és kimeneti változóit a metrikus változók maximális, minimum, medián, átlag és szórása, a kategorikus változók abszolút és relatív gyakoriságának kiszámításával írják le.

   Az IgE-szintek és más kimeneti változók időbeli pályáinak elemzéséhez leíró statisztikákat, valamint az átlaghoz tartozó 95%-os konfidenciaintervallumokat minden egyes időpontra és kezelési csoportra külön-külön számítják ki. A betegek közötti heterogén kiindulási szintek figyelembevétele érdekében az egyes betegeknél megfigyelt eredményeket ezen elemzések megfelelő kiindulási értékeivel standardizálják. Továbbá minden egyes időpontra kiszámítjuk a csoportok közötti átlagos különbségeket és a megfelelő 95%-os konfidencia intervallumokat. Grafikus szemléltetés céljából minden egyes páciens egyéni pályáját ábrázoljuk.

   A bőrszúrási teszt során megfigyelt adatok allergéndózisok sorozatából és az így kapott területmérésekből állnak. Az előző vizsgálatban szereplő nyolc beteg előzetes adatai alapján az Area = A*(1-exp(-λ Dose)) típusú exponenciális modellről azt találták, hogy megfelelően írja le a bőrszúrási tesztben megfigyelt dózis-válasz összefüggést. A modell nemlineáris legkisebb négyzetek algoritmusával illeszkedik az egyes csoportok minden időpontjához. Ezekből a modellekből a λ válaszarányt, az A platóterületet és az 50%-os effektív dózist 95%-os konfidenciaintervallumokkal együtt jelentik.

   Ha hiányoznak értékek, minden elemzést a rendelkezésre álló esetek alapján végeznek el.

   A minta méretére vonatkozó szempontok:

   Tekintettel a vizsgálat feltáró jellegére, a mintanagysággal kapcsolatos megfontolások a paraméterbecslések pontosságán alapulnak. Az elsődleges cél az IgE-szintek időbeli elemzése. Egy korábbi tanulmányból származó adatok azt mutatják, hogy az anti-Bet v 1 IgE relatív növekedése négy héttel a Bet v 1 orr-provokáció után átlagosan 1,4-szeres, és a betegek közötti standard eltérés körülbelül 0,5. Kontroll antigén esetén az átlagos faktor 1,04 volt, körülbelül 0,25 szórással. A két csoport átlagértékeinek összehasonlításának maximális statisztikai pontossága akkor érhető el, ha az allokációs arány arányos a szórások arányával, amely az előző adatok alapján 2:1. A hatásméretekre és a szórásra vonatkozó fenti feltételezések szerint a 30-as teljes mintanagyság (20:10) 95%-os konfidenciaintervallumot biztosít körülbelül 0,2-es félszélességgel mindkét csoportban. A 95%-os konfidencia intervallum várható félszélessége a csoportok közötti átlagos különbséghez 0,28. (Egy megfelelő kétmintás t-próba 80%-os ereje lenne 0,4 átlagos eltérés kimutatására 5%-os szignifikancia szinten). A bőrszúrás-teszt elemzéséhez az előzetes adatok azt sugallják, hogy 20-as mintaméret mellett az 50%-os hatásos dózis 95%-os konfidencia intervallumának fele körülbelül 0,25-szöröse lesz az 50%-os hatásos dózisnak, amit tekintünk. mint kellő pontosság ehhez a kísérleti tanulmányhoz. A grafikus ábrázoláshoz lásd a mellékletet

   Etikai és jogi szempontok

   A tanulmányt a helyi jogi követelményeknek és a GCP-nek megfelelően végzik el. Ezt a Helsinki Nyilatkozat (1964) irányelvei szerint hajtják végre, beleértve a jelenlegi felülvizsgálatokat is.

   Az alany tájékozott beleegyezése

   A vizsgálatba való felvétel előtt az alanynak bele kell adnia a részvételt, miután a klinikai vizsgálat természetét, terjedelmét és lehetséges következményeit számára érthető formában elmagyarázta. Az alanynak írásban kell hozzájárulnia. A vizsgáló aláírása megerősíti az alany beleegyezését. A beteg a hozzájárulását észrevételezés nélkül is bármikor visszavonhatja, anélkül, hogy ez negatív következményekkel járna a jövőbeni egészségügyi ellátásra nézve.

   A tanulmány elismerése/jóváhagyása

   A vizsgálat megkezdése előtt a vizsgálati jegyzőkönyvet benyújtják a Bécsi Orvostudományi Egyetem Etikai Bizottságának és a Bécsi Általános Kórháznak (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Bécs, Ausztria).

   Biztosítás

   A tanulmányban részt vevő összes alany a Zürich Biztosító társaságnál lesz biztosítva (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Bécs, Tel. +43 50 1255 1255; biztosítási szám: 07229622-2).

   Titoktartás

   Az összes alany nevét titokban tartják a nyomozói aktákban. Az alanyokat a dokumentáció és az értékelés során a vizsgálat során számukra kijelölt szám alapján azonosítják. Az alanyok tájékoztatást kapnak arról, hogy minden vizsgálati eredményt a legszigorúbb bizalmasan tárolnak és kezelnek.

   A vizsgálati eredmények dokumentálása és felhasználása

   A vizsgálati eredmények dokumentálása

   A vizsgálat során összegyűjtött összes eredményt egy forrásadatfájlban gyűjtik össze, és később átkerülnek az esetjelentési űrlapokra (CRF). Az ügyirat-űrlapokon minden bejegyzést olvashatóan fekete vagy kék tintával kell feltüntetni. Ha az esetnyilvántartási űrlap bejegyzéseit javítják, a szavak vagy számok begyűrűznek, és egyetlen vonást húznak át rajtuk. A helyes érték kerül beírásra a régi bejegyzés és dátum mellé, és a javítás inicializálódik. A hibás bejegyzéseket nem szabad javítófolyadékkal lefedni, eltörölni vagy olvashatatlanná tenni. A kitöltött CRF-eket a vizsgáló írja alá. A CRF-ek a záróvizsga után azonnal elkészülnek. A CRF alapjául szolgáló orvosi feljegyzéseket legalább 15 évig meg kell őrizni.

   A tanulmány eredményeinek felhasználása

   A tanulmány eredményeit a kutatók egy tudományos folyóiratban teszik közzé, és tudományos üléseken mutatják be. A kéziratot a benyújtás előtt minden társnyomozóhoz eljuttatják.