鼻アレルゲン曝露時の適応免疫応答とエフェクター細胞応答の変化 - パイロット研究

研究の根拠

鼻アレルゲンに対する in vivo での臨床的および免疫学的応答のダイナミクスに関する以前の研究は、特定のパラメーターに焦点を当てていましたが、さまざまな要因間の相互作用の速度論には取り組んでいませんでした (つまり、 アレルゲン特異的 IgE レベル、局所 IgE およびメディエーター産生、好塩基球感受性、皮膚感受性)。 したがって、研究者は無作為化二重盲検プラセボ対照試験を提案します。研究者は患者にアレルゲン抽出物を鼻腔内投与し、4 か月間にわたって臨床的および免疫学的免疫応答の両方を綿密に監視します。 この後、白樺の季節の前後にさらに 4 回の訪問が行われます。

研究者は、花粉シーズン外のカバノキ花粉抽出物の経鼻攻撃に対する即時および後期免疫応答を調べます。 研究参加者は、最初に3日間連続して鼻アレルゲンチャレンジを受け、その後1年間綿密に追跡されます。 アレルゲン曝露に対する臨床反応を評価するために、研究者は皮膚プリックテスト（SPT）、総鼻症状スコア（TNSS）、鼻内視鏡検査、ピーク吸気鼻流量計（PNIF）を利用します。 免疫応答を評価するために、血液、鼻粘膜サンプリング、鼻分泌物を含むサンプルが採取されます。

研究デザイン

この単一施設、無作為化、プラセボ対照、二重盲検試験では、合計 36 人の患者 (事前試験では 6 人) が自発的にこの試験に募集され、無作為に割り付けられて、いずれかのカバノキによる鼻チャレンジを受けます。花粉抽出物またはプラセボ。 無作為化は、Bet v 1 特異的 IgE レベルに従って層別化され、両方のグループに均等に分配されるようにします。 30 研究参加者は、カバノキ花粉の季節外に、カバノキ花粉抽出物またはプラセボのいずれかを 3 日間連続して鼻刺激を受け、その後、最大 4 か月間定期的にフォローアップされます。

最初に、30人の患者での研究の前に、6人のカバノキ花粉アレルギー被験者が、以下を確実にするために短いプロトコルを受けます。

1. 鼻刺激に使用されるアレルゲン濃度は、IgE抗体の上昇を誘発するのに十分です
2. 皮膚プリックテストの滴定が適切であること

3. メディエーターを決定するために鼻汁を採取するタイミングが適切であること。

   これら 6 名の患者の結果から、鼻アレルゲン濃度、皮膚テストの滴定または鼻分泌のタイミングのいずれかが適切でないことが明らかになった場合、倫理委員会に修正案が提出されます。

   短縮されたプロトコルには、5 回の訪問が含まれます。

   • 完全なスクリーニング訪問
   • 完全な訪問 N1
   • 採血せず、鼻から採取せずにN2を訪問する
   • 採血せず、鼻から採取せずにN3を訪問する
   • 完全な訪問 N7

   スクリーニング訪問

   手順

   • インフォームド コンセント フォームへの署名 (バージョン 2.1. 短いプロトコールによる初期試験用、主試験用のバージョン 1.8 (拡張用に更新)
   • スクリーニング番号の割り当て
   • 人口統計データ
   • アレルギー歴
   • 対象および除外基準の評価
   • SPT が必要な場合は、女性の妊娠検査
   • 病歴
   • 併用薬
   • 前鼻鏡検査
   • ハシバミ、トネリコ、グラス ミックス、ブタクサ、ヨモギ、D. pteronyssinus、D. farina、猫と犬のふけ、alternaria、cladosporium、ヒスタミン、ネガティブ コントロールからの市販の抽出物を含む標準 SPT
   • 市販のシラカバ花粉抽出物を用いた滴定皮膚プリックテスト
   • 採血 (最大 60ml のヘパリン化血液および血清) - 血液サンプルの一部は、好塩基球の活性化、総 IgE、および関連するアレルゲンに対する特異的 IgE の分析のために検査室に直接送られます。 残りの血液から RNA を調製して -80°C で保存し、血清を分離して -20°C で保存します。
   • 鼻サンプリング（鼻洗浄、粘膜キュレットサンプリングおよび鼻分泌物サンプリング）

   N0 を訪問

   タイミングに関する要件: 訪問 N0 は、訪問 N1 の 2 週間から 4 日前に予定されています。 これは、訪問 N1 の 3 週間以上前にスクリーニングされた患者のみを対象としています。

   手順：

   • 採血
   • 鼻検体採取（洗浄液、粘膜キュレット採取、鼻汁採取）
   • 滴定 SPT
   • PNIF
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   N1にアクセス

   手順：

   • In および除外基準の再評価 (アレルゲン特異的 IgE 結果)
   • 無作為化：被験者には治療番号が割り当てられます
   • ベースライン採血
   • ベースライン鼻検体採取（洗浄液、鼻粘膜採取、鼻分泌物採取）
   • ベースライン TNSS スコア
   • 有害事象（AE）の記録
   • 併用薬
   • 患者に提供される PNIF とその仕組みの説明/デモンストレーション。 患者には、毎日の PNIF 値 (N1 から N5) を追跡するために紙の日記が渡されます。 この乳製品は、毎日の TNSS スコア (N4-N5) を記録するためにも使用されます。
   • 妊娠検査
   • の。 白樺花粉抽出物またはプラセボの投与
   • 誘発直後の症状の記録
   • 採血、PNIF、鼻腔サンプリング（鼻洗浄液、粘膜キュレットサンプリングおよび鼻分泌物サンプリング）および TNSS スコア、カバノキ花粉抽出物投与後 20 分、40 分、1 時間、2 時間、4 時間、20 ～ 24 時間（20 ～ 24 時間の時点で実施されます）来院時 N2)。
   • カバノキ花粉抽出物投与後 10 分、3 時間、5 時間、6 時間、7 時間、8 時間後の鼻サンプリング、PNIF および TNSS スコア
   • 滴定 SPT
   • 必要に応じてレスキュー薬の投与 (アゼラスチン点鼻薬、デスロラタジン 5mg)

   N2 にアクセス

   タイミングに関する要件:

   訪問 N2 は、訪問 N1 の翌日に予定されています

   手順：

   • 血液、PNIF、鼻サンプリング（洗浄液、粘膜キュレットサンプリングおよび鼻分泌物サンプリング）および TNSS スコア（N1 でのカバノキ花粉抽出物投与後 20 ～ 24 時間の時点）。
   • AE記録
   • 併用薬
   • の。 カバノキ花粉抽出物またはプラセボの投与とそれに続く2時間の観察期間
   • 誘発直後の症状の記録
   • 必要に応じてレスキュー薬の投与 (アゼラスチン点鼻薬、デスロラタジン 5mg)
   • 注：最初の6人の研究対象では、鼻と血液のサンプリングは行われません

   N3にアクセス

   タイミングに関する要件:

   訪問 N3 は、訪問 N2 の翌日に予定されています

   手順：

   • 挑発前の採血
   • 挑発前の鼻腔検体採取（洗浄、粘膜キュレット採取、鼻汁採取）
   • 挑発前のTNSSスコア
   • 滴定 SPT
   • 有害事象（AE）の記録
   • 併用薬
   • の。 白樺花粉抽出物またはプラセボの投与
   • 誘発直後の症状の記録
   • 20分、40分、1時間、2時間、4時間、20〜24時間、およびカバノキ花粉抽出物投与後（20〜24時間の時点でN4 を参照してください)。
   • カバノキ花粉抽出物投与後 10 分、3 時間、5 時間、6 時間、7 時間、8 時間後の鼻サンプリング、PNIF および TNSS スコア
   • 必要に応じてレスキュー薬の投与 (アゼラスチン点鼻薬、デスロラタジン 5mg)
   • 注：最初の6人の研究対象では、鼻と血液のサンプリングは行われません

   N4にアクセス

   タイミングに関する要件:

   訪問 N4 は、訪問 N3 の翌日に予定されています

   手順：

   • カバノキ花粉抽出物の投与後 20 ～ 24 時間での血液、PNIF、鼻サンプリング（洗浄液、粘膜キュレット サンプリングおよび鼻分泌物サンプリング）および TNSS スコア。

   N5にアクセス

   訪問 N5 は、訪問 N4 の 14 ± 4 日後に予定されています。

   手順：

   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • PNIF
   • 滴定 SPT
   • TNSS スコア
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査
   • 訪問N1からN5までの紙の日記のコレクション

   N6にアクセス

   タイミングに関する要件:

   訪問 N6 は、訪問 N5 の 14 ± 4 日後に予定されています

   手順：

   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • PNIF
   • 滴定 SPT
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   N7にアクセス

   タイミングに関する要件:

   訪問 N7 は、訪問 N6 の 14 ± 4 日後に予定されています

   手順：

   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • PNIF
   • 滴定 SPT
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   N8にアクセス

   タイミングに関する要件:

   訪問 N8 は、訪問 N7 の 14 ± 4 日後に予定されています

   手順：

   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • PNIF
   • 滴定 SPT
   • スコア
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   N9にアクセス

   タイミングに関する要件:

   訪問 N9 は、訪問 N8 の 14 ± 4 日後に予定されています

   手順：

   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • PNIF
   • 滴定 SPT
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   N10にアクセス

   タイミングに関する要件:

   訪問 N9 は、訪問 N9 の 14 ± 4 日後に予定されています

   手順：

   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • PNIF
   • 滴定 SPT
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   訪問 N11 - 鼻刺激コンポーネントの最終訪問

   タイミングに関する要件:

   訪問 N11 は、訪問 N10 の 28 ± 4 日後に予定されています。

   手順：

   • 免疫学的パラメータおよび鼻サンプリングのための血液 (洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物サンプリング)
   • PNIF
   • 滴定 SPT
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   訪問 S1 (延長 - 2019 年 2 月 11 日に MUW 倫理委員会によって承認)

   タイミングに関する要件: 訪問 S1 は、白樺のシーズンの予測開始の 4 週間前 (+/- 7 日) にスケジュールされます。

   手順：

   • 紙の花粉と PNIF 日記を患者に説明し、白樺の季節に毎日記入するよう求めた
   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • 滴定 SPT
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   S2 にアクセス

   タイミングに関する要件: 訪問 S2 は、白樺のシーズンが終了してから 4 週間後 (+/- 7 日) に予定されています。

   手順：

   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • コレクションペーパーダイアリー
   • 観察されたPNIF
   • 滴定 SPT
   • 来院時のTNSSスコア
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   S3にアクセス

   タイミングに関する要件:

   訪問 S3 は、訪問 S2 の 4 週間後にスケジュールされます - (+/- 7 日)

   手順：

   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • 観察されたPNIF
   • 滴定 SPT
   • 来院時のTNSSスコア
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査

   S4 にアクセスして研究を終了する

   タイミングに関する要件:

   訪問 S4 は、研究全体の開始から 1 年後 (訪問 N0 の 1 年後) +/- 7 日後に予定されています。

   手順：

   • 血液および鼻のサンプリング（洗浄、粘膜キュレットおよび鼻分泌物のサンプリング）
   • 観察されたPNIF
   • 滴定 SPT
   • 来院時のTNSSスコア
   • AE記録
   • 前回の検査が 1 か月以上前の場合は、女性の妊娠検査
   • 学習の終了

   研究手順の説明

   患者の病歴、人口統計データ、併用薬 患者は、人口統計データと併用薬を含む病歴、強度と期間を含むアレルギー症状、およびアレルギー薬歴について尋ねられます。

   アレルギー歴とTNSSスコア

   患者は、くしゃみ、鼻漏、鼻かゆみ、鼻づまりおよび睡眠の質の発生について尋ねられ、来院ごとに各症状を等級分けし、自宅で記録をつけます。 次の症状スコア方法を使用します。0 = 不在。 1 = 軽度 - 存在するが容易に許容される。 2 = 中等度 - 現在、症状は煩わしいが、日常生活に支障はない。 3 = 重度 - 症状に耐えられず、日常生活に支障をきたしている (24)。 これに加えて、用紙には総疾病負荷の視覚的アナログスケールがあります。

   前鼻鏡検査

   前鼻鏡検査は、解剖学的差異を排除するために、スクリーニング訪問中に1回実行されます（例： 中隔偏差) または病理学的変化 (例えば 鼻ポリープ）。 頭を少し後ろにして座った状態で検鏡を使用して実行されます。

   ピーク吸気鼻流量計 (PNIF)

   PNIF の携帯性と使いやすさは、患者が自宅にいる間に客観的な測定値を取得するユニークな機会を提供します。 また、最近、鼻アレルゲンチャレンジ中の研究ツールとしても検証されました.

   手順：

   訪問 1 で、患者は PNIF デバイス (インチェック、吸気流量計) の使用方法を訓練され、N5 まで家に持ち帰るために 1 つ受け取ります。 PNIF は、1 分あたりのリットル数で直接校正された可変直径のチューブと、低慣性のインジケータ リングを使用します。 吸気操作後のリングの位置は、達成された最大流量を示します。 この装置は、患者が口または鼻から息を吸い込むと機能します。これにより、メーターから空気が引き込まれ、カーソルがスケールに沿って移動して、吸入の速度が示されます。 達成された流量は、カーソルの位置を校正済みの目盛りと照合することで確認できます。

   研究実施におけるPNIF：

   PNIF は研究参加者に与えられ、家に持ち帰って、毎日または毎週 (研究の段階に応じて) 鼻の気流を維持できるようにします。 また、観測された PNIF 測定値を取得できるように、すべての研究訪問にそれらを持参するよう求められます。

   皮膚プリックテスト

   4.5.1 手順: アレルゲン含有溶液の 1 滴 (20ul) を無菌ランセットで、個々の適用点の間に少なくとも 2 cm の間隔で皮膚をそっと刺すことにより、アレルゲンを前腕の真皮に挿入します。 0.9% 塩化ナトリウム溶液を陰性対照として使用し、ヒスタミンを陽性対照として使用します。 以前に感作された人では、それぞれのアレルゲンで攻撃すると、かゆみを伴う腫れと皮膚の発赤（膨疹と発赤反応）が15分以内に発生します. 20分後、アレルゲン溶液を拭き取り、膨疹の縁をボールペンでなぞります。 記録用のテープに膨疹の輪郭を転写するために透明テープを皮膚に貼り付けます。 隆起の表面は、デジタル面積測定によって計算されます。 含めるために、少なくとも直径 3 mm の膨疹は陽性反応と見なされます。

   テスト ソリューション:

   市販のシラカバ花粉抽出物および樹木および草の花粉、雑草および多年生アレルゲンのパネル（Allergopharma、ウィーン、オーストリア）をスクリーニング訪問時に使用し、製造元の指示に従って保存します。 コントロールとして、無菌の 0.9% NaCl 溶液 (ネガティブ コントロール) およびヒスタミン (ポジティブ コントロール、Allergopharma、ウィーン、オーストリア) を使用します。 それらは製造元の指示に従って保管されます。

   研究実施におけるSPT：

   スクリーニング訪問:

   耳鼻咽喉科のアレルギークリニックでの日常的な診断に使用される、市販のカバノキ花粉抽出物および木および草の花粉、雑草および多年生アレルゲンのパネル（すべてAllergopharma、ウィーン、オーストリア）を使用した標準的な皮膚プリックテストが実行されます。スクリーニング訪問時の患者の感作プロファイル。

   スクリーニングおよび来院 N0、N5 - N11、S1-S4 カバノキ抽出物に対する滴定皮膚プリックテストは、希釈を増やして実行されます (希釈は、決定するために 1:60 000 (= 11 希釈ステップ) まで 3 倍に増加されます)。皮膚反応を誘発する最低濃度。 すべての希釈に対する皮膚試験は、4 連で行われます。 市販のポジティブ コントロール ソリューション (ヒスタミン) とネガティブ コントロールは、重複して行われます。

   安全上の注意事項 安全上の注意事項として、患者は検査後 30 分間監視されます。 すべての調査は、完全な緊急設備が利用できる耳鼻咽喉科の外来クリニックで行われます。

   採血と免疫学的パラメーターの測定

   血液サンプルは、スクリーニング訪問時およびすべての研究訪問時に、皮膚テストの前に肘前静脈の穿刺によって採取されます。 来院ごとに最大 60ml をヘパリン化 (好塩基球感受性アッセイなど) または血清の調製 (総およびアレルゲン特異的免疫グロブリンレベルの評価または RBL アッセイなど) のいずれかで行います。 血清バイアルを処理し、血清を-20°Cで保存します。 スクリーニング訪問の血液サンプルのアレルゲン特異的IgEは、患者のアレルゲン特異的RASTクラスを評価するためにCAP-FEIAによって測定されます。 総血清、遊離血清、およびアレルゲン特異的血清 IgE、IgG、IgA、および IgM の測定は、CAP-FEIA、マイクロアレイ測定、または ELISA のいずれかによって行われます。 アッセイ間の変動を最小限に抑えるために、収集されたすべての血清サンプルで研究の最後に測定が行われます。 アレルゲン、fMLPおよび抗IgEに対する好塩基球応答の測定は、各訪問で実行されます。 簡単に説明すると、好塩基球をさまざまな濃度の抗 IgE、fMLP、または組換えアレルゲンに 15 分間曝露した後、フローサイトメトリーによって CD63 および CD203c の発現を調べます。 あるいは、ヒスタミン放出は、市販のヒスタミン放出キットによって決定される。

   妊娠検査

   女性患者の場合、妊娠は標準的な尿妊娠検査で除外されます。 この検査は、スクリーニング来院時の最初の皮膚プリック検査の前に、その後は月に 1 回実施されます。

   鼻検体採取

   鼻検体の収集は、すべての訪問で実行されます。 来院ごとに、経鼻吸着 FXi/PU (合成吸収マトリックス (SAM) を含む)、または長さ 10 cm のプラスチック キュレット (どちらも Hunt Developments、英国のデバイス) を使用して検体を採取します。

   FXi/PU を使用した鼻吸着 (Hunt Developments、英国):

   視覚化の下で、デバイスは鼻腔に挿入され、下鼻甲介に対して側壁に沿って配置されます。 患者の人差し指を使用して、鼻翼軟骨および外側鼻軟骨の外側を押して、デバイスを所定の位置に保持します。 1 分後、デバイスを取り外し、遠心分離によって液体を抽出します。 アレルゲン特異的および総Igレベル、メディエーターおよびサイトカインレベルの存在についてさらに分析するまで、上清を-70°Cで凍結します。

   粘膜mRNAサンプリング 10cmの鼻キュレットを使用します。 直接可視化の下で、キュレットは下鼻甲介の中央下部分に対して横たわるようにもたらされます。 キュレットを粘膜面に押し付け、外側に 2 ～ 3 回動かします。 この動きは、良好なサンプル収集を確保するために 2 ～ 3 回繰り返されます。 このキュレットと技術は、患者に重大な不快感を与えないことが示されているため、局所麻酔を必要としないという利点があります。 回収後、細胞をQiagen RLT緩衝液に溶解し、後のmRNA分析のために-70℃で保存する。

   4.9 鼻腔内チャレンジ

   白樺花粉抽出物（Allergopharma、ウィーン、オーストリア）を無菌の0.9％塩化ナトリウム溶液で新たに希釈し、定量ポンプを使用して投与します。 アレルゲンは、訪問N1、N2、N3で両方の鼻孔にパフあたり15μlを送達する定量ポンプを使用して投与されます。 チャレンジ後に患者が鼻または眼の症状に苦しんでいる場合は、アゼラスチン点鼻スプレーまたはデスロラタジン 5mg が供給されます。

   無作為化手順

   主な研究の訪問N1で、患者は2つのグループの1つに無作為化されます（白樺花粉抽出物またはプラセボ）。 研究対象は、Institute for Medical Informatics、Statistics and Documentation at Medical で維持されているオンラインランダム化プログラム「randomizer」（www.meduniwien.ac.at/randomizer）を使用してランダム化されます（挑発対対照の比率 2:1）。グラーツ大学、グラーツ、オーストリア。 2:1 の比率が選択されているのは、Ig 測定値と派生量の分散が、全体的な Ig レベルがより大きくなると予想されるため、挑発グループでより大きくなると予想されるためです。この文書の後半にあるサンプルサイズの考慮事項も参照してください。

   無作為化は、研究に関与しておらず、患者と接触していない人によって行われ、研究が二重盲検になるようにします。

   治験薬および治験薬

   白樺花粉エキス:

   白樺花粉抽出物 (Allergopharma、ウィーン、オーストリア) を鼻腔内チャレンジに使用します。 白樺花粉抽出物は凍結乾燥された状態で届き、無菌の 0.9% 塩化ナトリウムに溶解されます。 抽出物中のBet v 1の含有量は、Bet v 1に特異的な抗体プローブを使用したイムノブロッティングによって決定されます。最後に、Bet v 1の最終濃度が50μg/mlになるように抽出物を希釈します。経鼻チャレンジ時に特定の IgE レベルの変化を誘発することが示されています。

   制御ソリューション:

   対照溶液は、皮膚プリック試験の陰性対照として、および鼻腔内チャレンジのプラセボとして、0.9%の塩化ナトリウムを含みます。 ヒスタミン (Allergopharma、ウィーン、オーストリア) は、皮膚プリック テストの陽性対照として使用されます。 それらは製造元の指示に従って保管されます。

   併用薬

   全般的：

   研究への参加時または研究中の任意の時点で被験者が服用しているすべての追加の薬は、併用薬と見なされ、ソースデータファイルに記録されます。 研究中の併用薬は最小限に抑える必要がありますが、研究プロトコルに干渉しない限り、必要と考えられる場合は投与することができます。

   レスキュー薬:

   この研究ではアナフィラキシー事象が発生する可能性は非常に低いですが、常に可能性を考慮しなければなりません. そのため、SPT でアナフィラキシー反応が起きた場合、または鼻のチャレンジが発生した場合に備えて、完全な緊急キットがすぐに利用できるようになります。 さらに、鼻腔内チャレンジ後に患者が鼻および眼の症状に苦しんでいる場合、症状を改善するためにアゼラスチン点鼻スプレーおよび/またはデスロラタジン5mgが提供されます。

   併用禁止薬：

   被験者は、研究期間中、研究手順を妨げる薬を服用していない必要があります。 以下の併用治療は、この試験中は許可されていません。

   • 全身または局所コルチコステロイド
   • その他の免疫抑制剤
   • 訪問の3日前に抗ヒスタミン薬またはクロモグリク酸二ナトリウム
   • 全身または鼻腔内アドレナリン薬
   • 向精神薬
   • ACE阻害薬またはベータ遮断薬

   有害事象

   有害事象とは、併発する病気や事故を含む、臨床試験中のあらゆる事象であり、被験者の健康を損ないます。また、異常な検査値の形をとる場合もあります。 有害事象という用語は、試験治療との因果関係を意味するものではありません。

   有害事象を経験しているすべての被験者は、研究治療の使用に関連していると考えられるかどうかにかかわらず、症状が治まり、異常な検査値がベースラインに戻るまで、または観察された変化について満足のいく説明が得られるまで、または死亡するまで監視されます。その場合、資格のある病理学者からの完全な病理レポートが提供されます。 すべての調査結果は、症例記録フォームの「有害事象」ページで報告する必要があります。

   すべての有害事象は、以下で説明するように報告および文書化されます。 有害事象は「重篤」と「非重篤」に分類されます。 これにより、有害事象を報告/文書化するために使用する必要がある手順が決まります。

   重篤および重篤でない有害事象の定義

   重大な有害事象は次のとおりです。

   • 致命的または生命を脅かすあらゆるイベント
   • 永久に無効化するイベント
   • 入院が必要または長期化するイベント
   • がん、先天異常、過剰摂取（規定量以上の塗布）による事象。

   これらのカテゴリーに分類されない有害事象は、重篤でないと定義されます。

   AEの重症度の評価

   有害事象の重篤または重篤ではない分類 (上記参照) に関係なく、その重篤度は、医学的基準のみに従って、軽度、中等度、または重度として評価する必要があります。

   軽度 = 日常活動を妨げない、許容できる 中等度 = 日常活動を妨げる 重度 = 日常活動を行うことが不可能である、医師によって容認できないと見なされる、治療が必要である、研究の中止が必要である、または残留効果がある。

   重篤な有害事象は本質的に深刻である必要はないことに注意する必要があります。 重症度に関係なく、すべての重篤な有害事象は以下のように報告する必要があります。

   有害事象の報告/文書化

   有害事象は、自発的な報告によって収集されます。

   重大な有害事象の報告/文書化

   この研究中に発生したすべての重篤な有害事象は、研究薬に関連すると見なされるかどうかにかかわらず、症例記録フォームの「有害事象」ページに記録する必要があります。

   重大な事象に関して得られたすべての新しい情報を含む追跡報告書を作成し、収集する必要があります。

   研究者は、要求に応じてこれらすべてのレポートのコピーを倫理委員会に提出します。 必要に応じて、捜査官は当局に通知します。

   重篤でない有害事象の報告/文書化

   これらは、症例記録フォームの「有害事象」ページに記録されます。

   統計分析

   これはパイロット研究であるため、実行された分析は探索的および仮説生成と見なされます。

   患者の特性と転帰変数は、メトリック変数の最大値、最小値、中央値、平均値、標準偏差、およびカテゴリ変数の絶対頻度と相対頻度を計算することによって説明されます。

   IgE レベルおよびその他の結果変数の時間軌跡を分析するために、記述統計量と平均値の 95% 信頼区間が、各時点および各治療グループについて個別に計算されます。 患者間の不均一なベースラインレベルを説明するために、各患者の観察された結果は、これらの分析のそれぞれのベースライン値によって標準化されます。 さらに、グループ間の平均差とそれに応じた 95% 信頼区間が各時点で計算されます。 グラフィカルな説明のために、各患者の個々の軌跡がプロットされます。

   皮膚プリックテストで観察されたデータは、一連のアレルゲン投与量とその結果の面積測定値で構成されています。 以前の研究における 8 人の患者からの予備データに基づいて、Area = A*(1-exp(-λ Dose) タイプの指数モデルが、皮膚プリック テストで観察された用量反応関係を適切に説明することがわかりました。 モデルは、非線形最小二乗アルゴリズムを使用して、各グループの各時点に適合します。 これらのモデルから、応答率 λ、プラトー領域 A、および 50% 有効線量が 95% 信頼区間と共に報告されます。

   欠損値がある場合、すべての分析は利用可能なケースに基づいて行われます。

   サンプルサイズの考慮事項:

   研究の探索的性質を考えると、サンプルサイズの考慮事項は、パラメーター推定の精度に基づいています。 主な目的は、経時的な IgE レベルの分析です。 以前の研究からのデータは、Bet v 1 による鼻刺激の 4 週間後に抗 Bet v 1 IgE が平均 1.4 倍、患者間の標準偏差が約 0.5 増加したことを示しています。 対照抗原では、平均係数は 1.04 で、標準偏差は約 0.25 でした。 2 つのグループ間の平均値を比較するための最大の統計精度は、割り当て比率が標準偏差の比率に比例する場合に達成されます。これは、前のデータに基づいて 2:1 です。 効果サイズと標準偏差に関する上記の仮定の下で、合計サンプル サイズが 30 (20:10) の場合、どちらのグループでも半値幅が約 0.2 の 95% 信頼区間が得られます。 グループ間の平均差の 95% 信頼区間の予想半値幅は 0.28 です。 (対応する 2 標本 t 検定の検出力は 80% で、5% の有意水準で 0.4 の平均差を検出します)。 皮膚プリックテストの分析では、予備データは、サンプルサイズが 20 の場合、50% 有効用量の 95% 信頼区間の半値幅が 50% 有効用量の約 0.25 倍になることを示唆しています。このパイロット研究の十分な精度として。 グラフ表示については、付録を参照してください

   倫理的および法的側面

   この調査は、現地の法的要件および GCP に従って実施されます。 ヘルシンキ宣言（1964 年）のガイドライン（現在の改訂版を含む）に従って実施されます。

   被験者のインフォームドコンセント

   研究への参加が認められる前に、被験者は、臨床研究の性質、範囲、および考えられる結果について、理解できる形で説明された後、参加に同意する必要があります。 被験者は書面で同意する必要があります。 治験責任医師の署名により、被験者の同意が確認されます。 患者は、コメントをしなくても、いつでも同意を取り消すことができ、将来の医療に悪影響を与えることはありません。

   研究の確認/承認

   研究の開始前に、研究プロトコルはウィーン医科大学の倫理委員会およびウィーン総合病院 (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Vienna, Austria) に提出されます。

   保険

   この研究に参加するすべての被験者は、チューリッヒ保険会社（Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft、Schwarzenbergplatz 15、1010 Vienna、Tel. +43 50 1255 1255;保険番号：07229622-2）。

   守秘義務

   すべての対象者の名前は調査員ファイルで秘密にされます。 被験者は、研究中に割り当てられた数によって、文書化および評価を通じて識別されます。 被験者には、すべての調査結果が極秘に保管および処理されることが通知されます。

   調査結果の文書化と使用

   調査結果の文書化

   調査中に収集されたすべての結果は、ソース データ ファイルに収集され、後で症例報告フォーム (CRF) に転送されます。 症例記録フォームのすべてのエントリは、黒または青のインクで判読できるように作成されます。 症例記録フォームの記入事項に訂正があった場合、単語または数字にリングが付けられ、それらに一筆書きが行われます。 古いエントリと日付の横に正しい値が入力され、修正が初期化されます。 誤ったエントリは、修正液で覆ったり、消したり、判読不能にしたりしてはなりません。 完成した CRF は、治験責任医師によって署名されます。 CRFは、最終試験の直後に完了します。 CRF の基となる医療記録は、少なくとも 15 年間保管されます。

   調査結果の使用

   この研究の結果は、研究者によって科学雑誌に掲載され、科学会議で発表されます。 原稿は、提出前にすべての共同研究者に配布されます。