Změny v adaptivních imunitních odpovědích a odpovědích efektorových buněk po expozici nosnímu alergenu – pilotní studie

Zdůvodnění studie

Předchozí studie o dynamice in vivo klinických a imunologických odpovědí na nosní alergen se zaměřily na konkrétní parametry, ale nezabývaly se kinetikou souhry mezi různými faktory (tj. hladiny alergen-specifických IgE, lokální produkce IgE a mediátorů, bazofilní citlivost, kožní citlivost). Vyšetřovatelé proto navrhují randomizovanou dvojitě zaslepenou placebem kontrolovanou studii, kde vyšetřovatelé provokují pacienty intranazálně extraktem alergenu a poté pečlivě sledují klinické i imunologické imunitní reakce po dobu 4 měsíců. Poté proběhnou další 4 návštěvy před a po březové sezóně.

Výzkumníci se zaměří na okamžitou a pozdní fázi imunitních reakcí na nosní expozici extraktu z pylu břízy mimo pylové sezóny. Účastníci studie nejprve podstoupí 3 po sobě jdoucí dny nazálního alergenu a poté budou pečlivě sledováni po dobu 1 roku. K posouzení klinické odpovědi na expozici alergenu budou vyšetřovatelé používat kožní prick test (SPT), celkové skóre nosních příznaků (TNSS), nosní endoskopii a měřič maximálního inspiračního nasálního průtoku (PNIF). K posouzení imunologické odezvy budou odebrány vzorky krve, nosní sliznice a nosní sekrece.

Studovat design

V této jednocentrické, randomizované, placebem kontrolované, dvojitě zaslepené studii bude do této studie dobrovolně přijato celkem 36 (6 pro předstudii) pacientů, kteří budou randomizováni tak, aby dostali nosní provokační dávku buď břízy. pylový extrakt nebo placebo. Randomizace bude stratifikována podle hladin specifických IgE Bet v 1, aby byla umožněna rovnoměrná distribuce v obou skupinách. 30 Účastníci studie budou dostávat nosní provokaci mimo sezónu pylu břízy buď extraktem z pylu břízy, nebo placebem ve třech po sobě jdoucích dnech a poté budou pravidelně sledováni po dobu až čtyř měsíců.

Zpočátku, před studií na 30 pacientech, podstoupí 6 subjektů alergických na pyl břízy krátký protokol, aby se zajistilo, že

1. Koncentrace alergenu použitá k nazální provokaci je dostatečná k vyvolání vzestupu IgE protilátek
2. Že titrace kožního prick testu jsou přiměřené

3. Že načasování odběru nosního sekretu pro stanovení mediátorů je adekvátní.

   Pokud výsledky od těchto 6 pacientů odhalí, že buď koncentrace alergenu v nosu, titrace kožních testů nebo načasování nosní sekrece nejsou adekvátní, bude etické komisi předložen dodatek.

   Zkrácený protokol bude zahrnovat 5 návštěv:

   • kompletní screeningová návštěva
   • kompletní návštěva N1
   • návštěva N2 bez odběru krve a bez odběru nosu
   • návštěva N3 bez odběru krve a bez odběru nosu
   • kompletní návštěva N7

   Screeningová návštěva

   Postup

   • Podepsání formuláře informovaného souhlasu (verze 2.1. pro úvodní studii s krátkým protokolem, verze 1.8 (aktualizovaná pro rozšíření) pro hlavní studii)
   • Přidělení čísla screeningu
   • Demografická data
   • Historie alergie
   • Posouzení kritérií pro zařazení a vyloučení
   • Těhotenský test pro ženy, pokud vyžadují SPT
   • Zdravotní historie
   • Souběžná medikace
   • Přední rinoskopie
   • Standardní SPT s komerčním extraktem z: lísky, jasanu, travní směsi, ambrózie, pelyňku, D. pteronyssinus, D. farina, kočičí a psí srsti, alternaria, cladosporia, histaminu a negativní kontroly
   • Titrovaný kožní prick test s komerčním extraktem z pylu břízy
   • Odběr krve (max 60ml heparinizované krve a séra) - Část krevního vzorku bude přímo odeslána do laboratoře k analýze aktivace bazofilů, celkového IgE a specifických IgE na příslušné alergeny. Ze zbytku krve bude RNA připravena a skladována při -80°C a sérum bude separováno a skladováno při -20°C
   • odběry z nosu (výplach nosu, odběr slizniční kyrety a odběr nosního sekretu)

   Navštivte N0

   Požadavky týkající se načasování: Návštěva N0 je naplánována mezi 2 týdny a 4 dny před návštěvou N1. Toto je pouze pro pacienty, kteří byli vyšetřeni více než 3 týdny před návštěvou N1

   Postup:

   • Odběr krve
   • Odběr nosních vzorků (výplach, odběr slizniční kyrety a odběr nosního sekretu)
   • Titrovaný SPT
   • PNIF
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Navštivte N1

   Postup:

   • Přehodnocení vstupních a vylučovacích kritérií (výsledky alergen-specifických IgE)
   • Randomizace: Subjektům bude přiděleno číslo léčby
   • Základní odběr krve
   • Základní odběr nosního vzorku (výplach, odběr nosní sliznice a odběr nosního sekretu)
   • Základní skóre TNSS
   • Záznam nežádoucích událostí (AE).
   • Souběžná medikace
   • PNIF podávaný pacientům a vysvětlení/ukázka, jak to funguje. Pacienti dostanou papírový deník, aby mohli sledovat denní hodnoty PNIF (od N1 do N5). Tato mlékárna bude také sloužit k zaznamenávání denních skóre TNSS (N4-N5).
   • Těhotenský test
   • v. podávání extraktu z pylu břízy nebo placeba
   • Dokumentace příznaků bezprostředně po provokaci
   • Krev, PNIF, odběr vzorků z nosu (výplach nosu, odběr slizniční kyrety a odběr vzorků z nosního sekretu) a skóre TNSS, 20 minut, 40 minut, 1 hodina, 2 hodiny, 4 hodiny, 20-24 hodin po podání extraktu z pylu břízy (bude proveden časový bod 20-24 hodin při návštěvě N2).
   • Odběr vzorků z nosu, skóre PNIF a TNSS za 10 minut, 3 hodiny, 5 hodin, 6 hodin, 7 hodin, 8 hodin po podání extraktu z pylu břízy
   • Titrovaný SPT
   • podání záchranné medikace v případě potřeby (azelastin nosní sprej, desloratadin 5 mg)

   Navštivte N2

   Požadavky na časování:

   Návštěva N2 je naplánována den po návštěvě N1

   Postup:

   • Krev, PNIF, odběr vzorků z nosu (výplach, odběr slizniční kyrety a odběr vzorků z nosního sekretu) a skóre TNSS (časový bod 20–24 hodin po podání extraktu z pylu břízy v N1).
   • AE záznam
   • Souběžná medikace
   • v. podání extraktu z pylu břízy nebo placeba s následnou dobou pozorování 2 hodiny
   • Dokumentace příznaků bezprostředně po provokaci
   • podání záchranné medikace v případě potřeby (azelastin nosní sprej, desloratadin 5 mg)
   • Poznámka: v úvodních 6 subjektech studie nebudou provedeny odběry z nosu a krve

   Navštivte N3

   Požadavky na časování:

   Návštěva N3 je naplánována den po návštěvě N2

   Postup:

   • Odběr krve před provokací
   • Odběr nosního vzorku před provokací (výplach, odběr slizniční kyrety a odběr nosního sekretu)
   • Skóre TNSS před provokací
   • Titrovaný SPT
   • Záznam nežádoucích událostí (AE).
   • Souběžná medikace
   • v. podávání extraktu z pylu břízy nebo placeba
   • Dokumentace příznaků bezprostředně po provokaci
   • Krev, PNIF, odběr z nosu (výplach, odběr slizniční kyrety a odběr vzorků z nosního sekretu) a skóre TNSS 20 minut, 40 minut, 1 hodina, 2 hodiny, 4 hodiny, 20-24 hodin a po podání extraktu z pylu břízy (časový bod 20-24 hodin bude proveden v navštivte N4).
   • Odběr vzorků z nosu, skóre PNIF a TNSS za 10 minut, 3 hodiny, 5 hodin, 6 hodin, 7 hodin, 8 hodin po podání extraktu z pylu břízy
   • V případě potřeby podání záchranné medikace (azelastin nosní sprej, desloratadin 5 mg)
   • Poznámka: v úvodních 6 subjektech studie nebudou provedeny odběry z nosu a krve

   Navštivte N4

   Požadavky na časování:

   Návštěva N4 je naplánována den po návštěvě N3

   Postup:

   • Krev, PNIF, odběr vzorků z nosu (výplach, odběr slizniční kyrety a odběr vzorků z nosního sekretu) a skóre TNSS 20-24 hodin po podání extraktu z pylu břízy.

   Navštivte N5

   Návštěva N5 je naplánována 14 ± 4 dny po návštěvě N4:

   Postup:

   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • PNIF
   • Titrovaný SPT
   • Skóre TNSS
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem
   • Sbírka papírového deníku od návštěvy N1 do N5

   Navštivte N6

   Požadavky na časování:

   Návštěva N6 je naplánována 14 ± 4 dny po návštěvě N5

   Postup:

   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • PNIF
   • Titrovaný SPT
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Navštivte N7

   Požadavky na časování:

   Návštěva N7 je naplánována 14 ± 4 dny po návštěvě N6

   Postup:

   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • PNIF
   • Titrovaný SPT
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Navštivte N8

   Požadavky na časování:

   Návštěva N8 je naplánována 14 ± 4 dny po návštěvě N7

   Postup:

   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • PNIF
   • Titrovaný SPT
   • skóre
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Navštivte N9

   Požadavky na časování:

   Návštěva N9 je naplánována 14 ± 4 dny po návštěvě N8

   Postup:

   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • PNIF
   • Titrovaný SPT
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Navštivte N10

   Požadavky na časování:

   Návštěva N9 je naplánována 14 ±4 dny po návštěvě N9

   Postup:

   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • PNIF
   • Titrovaný SPT
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Návštěva N11 – závěrečná návštěva nosní provokační složky

   Požadavky na časování:

   Návštěva N11 je naplánována 28 ±4 dny po návštěvě N10

   Postup:

   • Krev na imunologické parametry a odběr z nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • PNIF
   • Titrovaný SPT
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Navštivte S1 (prodloužení – schváleno etickou komisí MUW dne 11. února 2019)

   Požadavky na načasování: Návštěva S1 je naplánována 4 týdny před předpokládaným začátkem sezóny břízy (+/- 7 dní)

   Postup:

   • Papírový pyl a deník PNIF vysvětlil pacientům a požádal o vyplnění denně v období břízy
   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • Titrovaný SPT
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Navštivte S2

   Požadavky na načasování: Návštěva S2 je naplánována 4 týdny po skončení sezóny břízy (+/- 7 dní)

   Postup:

   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • Sběrný papírový deník
   • Pozorováno PNIF
   • Titrovaný SPT
   • Skóre TNSS při návštěvě
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Navštivte S3

   Požadavky na časování:

   Návštěva S3 je naplánována 4 týdny po návštěvě S2 - (+/- 7 dní)

   Postup:

   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • Pozorováno PNIF
   • Titrovaný SPT
   • Skóre TNSS při návštěvě
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem

   Navštivte S4 a konec studia

   Požadavky na časování:

   Návštěva S4 je naplánována 1 rok po zahájení celé studie (1 rok po návštěvě N0) +/- 7 dní

   Postup:

   • Odběr krve a nosu (výplach, slizniční kyreta a odběr nosního sekretu)
   • Pozorováno PNIF
   • Titrovaný SPT
   • Skóre TNSS při návštěvě
   • AE záznam
   • Těhotenský test pro ženy, pokud byl poslední test proveden před více než jedním měsícem
   • Konec studia

   Popis studijních postupů

   Zdravotní anamnéza pacientů, demografické údaje, souběžná medikace Pacienti budou požádáni o jejich anamnézu včetně demografických údajů a souběžné medikace, jejich alergické symptomy včetně intenzity a trvání a jejich anamnézu alergické medikace.

   Anamnéza alergie a skóre TNSS

   Pacienti budou požádáni o výskyt kýchání, výtoku z nosu, svědění nosu, ucpaného nosu a kvalitu spánku ao hodnocení každého příznaku při každé návštěvě ao vedení záznamů doma. Budou používat následující metodu skóre symptomů: 0 = chybí; 1 = mírná – přítomná, ale snadno tolerovatelná; 2 = střední – přítomný, symptom je obtěžující, ale nenarušuje každodenní činnosti; 3 = závažný – symptom je obtížně tolerovatelný a zasahuje do každodenních činností (24). Kromě toho bude na formuláři vizuální analogová stupnice celkové nemocnosti.

   Přední rinoskopie

   Přední rinoskopie bude provedena jednou během screeningové návštěvy, aby se vyloučily anatomické odchylky (např. odchylka septa) nebo patologické změny (např. nosní polypy). Provede se pomocí zrcátka s pacientem posazeným s hlavou mírně vzad.

   Měřič maximálního inspiračního nosního průtoku (PNIF)

   Přenosnost a snadnost PNIF poskytuje jedinečnou příležitost získat objektivní měření, když jsou pacienti doma. Nedávno byla také ověřena jako studijní nástroj během nazálního alergenu.

   Postup:

   Při návštěvě 1 budou pacienti proškoleni, jak používat zařízení PNIF (In-check, Inspirační průtokoměr), a jeden obdrží s sebou domů do N5. PNIF používá trubici s proměnným průměrem kalibrovanou přímo v litrech za minutu spolu s indikačním kroužkem nízké setrvačnosti. Poloha kroužku po inspiračním manévru udává maximální dosažený průtok. Zařízení funguje, když pacient vdechuje ústy nebo nosem, což způsobí nasávání vzduchu přes měřič a kurzor se pohybuje po stupnici, aby ukazoval rychlost inhalace. Dosažený průtok lze zaznamenat kontrolou polohy kurzoru vůči kalibrované stupnici.

   PNIF při provádění studie:

   PNIF bude dán účastníkům studie, aby si je vzali domů, aby si mohli denní nebo týdenní mlékárnu (v závislosti na fázi studie) nechat proudit nosním vzduchem. Budou také požádáni, aby je přinesli na všechny studijní návštěvy, aby bylo možné provést pozorovaná měření PNIF.

   Kožní prick test

   4.5.1 Postup: Alergeny se vpravují do dermis předloktí jemným píchnutím do kůže kapkou (20 ul) roztoku obsahujícího alergen sterilní lancetou s minimálně 2 cm mezi každým jednotlivým bodem aplikace. 0,9% roztok chloridu sodného bude použit jako negativní a histamin jako pozitivní kontrola. U dříve senzibilizovaných jedinců se do 15 minut po expozici příslušným alergenem objeví svědivé otoky a zarudnutí kůže (reakce pupínků a vzplanutí). Po 20 minutách se roztoky alergenů setřou a okraje šrámů se obkreslí kuličkovým perem. Průhledná páska bude nalepena na kůži, aby se obrys pupínky přenesl na pásku pro záznamy. Povrch šrámů bude vypočítán pomocí digitální planimetrie. Pro zahrnutí budou za pozitivní reakce považovány pupeny o průměru alespoň 3 mm.

   Testovací řešení:

   Při screeningové návštěvě bude použit komerčně dostupný extrakt z pylu břízy a panel pylu stromů a trav, plevelů a vytrvalých alergenů (Allergopharma, Vídeň, Rakousko) a budou skladovány podle pokynů výrobce. Jako kontroly bude použit sterilní 0,9% roztok NaCl (negativní kontrola) a histamin (pozitivní kontrola, Allergopharma, Vídeň, Rakousko). Budou skladovány podle pokynů výrobce.

   SPT ve vedení studie:

   Prohlídka:

   K posouzení bude proveden standardní kožní prick test s komerčním extraktem z pylu břízy a panelem pylu stromů a trav, plevelů a vytrvalých alergenů (vše Allergopharma, Vídeň, Rakousko) používaný v běžné diagnostice na alergologické klinice ORL oddělení. profil senzibilizace pacienta při screeningové návštěvě.

   Screening a návštěvy N0, N5 - N11, S1-S4 Titrovaný kožní prick test na extrakt z břízy bude proveden se zvyšujícími se ředěními (ředění se zvýší faktorem 3 až na 1:60 000 (=11 kroků ředění) pro stanovení nejnižší koncentrace, která vyvolává kožní reakci. Kožní testy všech ředění budou provedeny ve čtyřech opakováních. Komerční pozitivní kontrolní roztok (histamin) a negativní kontrola budou provedeny v duplikátech.

   Bezpečnostní opatření Jako bezpečnostní opatření budou pacienti po testování sledováni po dobu 30 minut. Veškerá vyšetření budou prováděna na ambulanci ORL oddělení, kde je k dispozici kompletní pohotovostní vybavení.

   Odběr krve a měření imunologických parametrů

   Vzorky krve budou odebrány při screeningové návštěvě a při všech studijních návštěvách punkcí antekubitální žíly před kožním testováním. Na jednu návštěvu bude odebráno maximálně 60 ml buď heparinizovaných (např. pro testy citlivosti bazofilů) nebo pro přípravu séra (např. pro hodnocení celkových a alergen specifických hladin imunoglobulinu nebo RBL test). Lahvičky séra budou zpracovány a sérum bude skladováno při -20°C. Alergen-specifické IgE vzorků krve ze screeningové návštěvy budou měřeny pomocí CAP-FEIA, aby se vyhodnotila alergen-specifická RAST-třída pacientů. Měření celkových, volných a alergen-specifických sérových IgE, IgG, IgA a IgM bude provedeno buď pomocí CAP-FEIA, měřením microarray nebo ELISA. Měření bude provedeno na konci studie ve všech odebraných vzorcích séra, aby se minimalizovaly rozdíly mezi testy. Při každé návštěvě bude provedeno měření bazofilních odpovědí na alergen, fMLP a anti-IgE. Stručně řečeno, bazofily budou vystaveny různým koncentracím anti-IgE, fMLP nebo rekombinantních alergenů po dobu 15 minut a poté budou vyšetřeny na expresi CD 63 a CD203c pomocí průtokové cytometrie. Alternativně bude uvolňování histaminu stanoveno komerčně dostupnými soupravami pro uvolňování histaminu.

   Těhotenský test

   U pacientek bude těhotenství vyloučeno standardním těhotenským testem z moči. Test bude proveden před prvním kožním prick testem při screeningové návštěvě a poté jednou měsíčně.

   Sbírka nosních vzorků

   Při všech návštěvách bude prováděn odběr nosních vzorků. Při každé návštěvě budou vzorky odebírány pomocí nasosorpce FXi/PU (obsahující syntetickou absorpční matrici (SAM)) nebo 10 cm dlouhé plastové kyrety (oba zařízení od Hunt Developments, UK)

   Nasosorpce pomocí FXi/PU (Hunt Developments, UK):

   Při vizualizaci bude zařízení zavedeno do nosní dutiny a umístěno podél laterální stěny proti dolní mulčnici. Ukazováček pacienta se použije k přitlačení na vnější části alárních a laterálních nosních chrupavek, aby se zařízení udrželo na místě. Po 1 minutě budou zařízení odstraněna a tekutina bude extrahována centrifugací. Supernatant bude zmražen při -70 °C až do další analýzy na přítomnost alergen-specifických a celkových hladin Ig, mediátorů a cytokinů.

   Odběr slizniční mRNA Bude použita 10cm nosní kyreta. Pod přímou vizualizací bude kyreta přiložena tak, aby ležela proti střední dolní části dolní skořepiny. Kyreta se 2-3krát přitlačí na povrch sliznice posunutý ven. Tento pohyb bude opakován 2-3krát, aby byl zajištěn dobrý odběr vzorku. Ukázalo se, že tato kyreta a technika nezpůsobují pacientům žádné významné nepohodlí, a proto má výhodu v tom, že nevyžaduje lokální anestetikum. Po odběru budou buňky lyžovány v Qiagen RLT pufru a uloženy při -70 °C pro pozdější analýzu mRNA.

   4.9 Intranazální provokace

   Extrakt z pylu břízy (Allergopharma, Vídeň, Rakousko) bude čerstvě naředěn ve sterilním 0,9% roztoku chloridu sodného a bude podáván pomocí dávkovací pumpy. Alergen bude podáván pomocí dávkovací pumpy, která dodává 15 μl na vdechnutí do obou nosních dírek při návštěvě N1, N2, N3. Pokud pacient po stimulaci trpí nosními nebo očními příznaky, bude mu dodán azelastin nosní sprej nebo desloratadin 5 mg.

   Postup randomizace

   Při návštěvě N1 hlavní studie budou pacienti randomizováni do jedné ze dvou skupin (extrakt z pylu břízy nebo placebo). Předměty studie budou randomizovány (poměr 2:1 pro provokaci versus kontrola) pomocí online randomizačního programu „randomizer“ (www.meduniwien.ac.at/randomizer), který je veden na Institutu lékařské informatiky, statistiky a dokumentace ve zdravotnictví Univerzita Graz, Graz, Rakousko. Poměr 2:1 je zvolen, protože se očekává, že rozptyl měření Ig a odvozených veličin bude větší ve skupině provokací kvůli očekávaným vyšším celkovým hladinám Ig, viz také úvahy o velikosti vzorku dále v tomto dokumentu.

   Randomizace bude provedena osobou, která není zapojena do studie a nemá žádný kontakt s pacienty, aby bylo zajištěno, že studie bude dvojitě zaslepená.

   Výzkumné produkty a studijní léky

   Extrakt z pylu břízy:

   Extrakt z pylu břízy (Allergopharma, Vídeň, Rakousko) bude použit pro intranazální provokaci. Extrakt z pylu břízy dorazí lyofilizovaný a bude rozpuštěn ve sterilním 0,9% chloridu sodném. Obsah Bet v 1 v extraktu bude stanoven imunoblotem s použitím protilátkových sond specifických pro Bet v 1. Nakonec se extrakt zředí tak, aby konečná koncentrace Bet v 1 byla 50 μg/ml, jak byla tato koncentrace dříve ukázalo se, že vyvolává změny v hladinách specifických IgE po nazální provokaci.

   Kontrolní řešení:

   Kontrolní roztoky budou obsahovat 0,9% chlorid sodný jako negativní kontrolu pro kožní prick test a jako placebo pro intranazální stimulaci. Histamin (Allergopharma, Vídeň, Rakousko) bude použit jako pozitivní kontrola pro kožní prick test. Budou skladovány podle pokynů výrobce.

   Souběžná medikace

   Všeobecné:

   Veškerá další medikace užívaná subjekty při vstupu do studie nebo kdykoli během studie se považuje za souběžnou medikaci a bude zdokumentována ve zdrojovém datovém souboru. Souběžná medikace by měla být během studie omezena na minimum, ale pokud je to považováno za nutné, může být podána, pokud neinterferuje s protokolem studie.

   Záchranné léky:

   Ačkoli jsou anafylaktické příhody v této studii velmi nepravděpodobné, vždy je nutné je považovat za možné. Proto bude okamžitě k dispozici kompletní pohotovostní sada pro případ anafylaktických reakcí při SPT nebo nazální provokaci. Kromě toho, pokud pacient trpí nosními a očními příznaky po intranazální stimulaci, bude mu poskytnut azelastin nosní sprej a/nebo desloratadin 5 mg ke zmírnění příznaků.

   Zakázané souběžné podávání léků:

   Subjekty musí po dobu trvání studie zůstat bez léků, které interferují s postupy studie. Během této studie nejsou povoleny následující souběžné léčby:

   • Systémové nebo topické kortikosteroidy
   • Jiné imunosupresivní léky
   • Antihistaminika nebo kromoglykát disodný 3 dny před návštěvami
   • Systémové nebo intranazální adrenergní léky
   • Psychofarmakologické léky
   • ACE-inhibitory nebo beta-blokátory

   Nežádoucí události

   Nežádoucí příhoda je jakákoli událost během klinické studie, včetně interkurentního onemocnění nebo nehody, která zhoršuje pohodu subjektu; může mít také podobu abnormální laboratorní hodnoty. Termín nežádoucí příhoda neimplikuje kauzální vztah se studovanou léčbou.

   Všichni jedinci, u kterých se vyskytly nežádoucí příhody – ať už jsou považovány za spojené s použitím studijní léčby či nikoli – budou sledovány, dokud symptomy neustoupí a jakákoli abnormální laboratorní hodnota se nevrátí na výchozí hodnotu, nebo dokud nebude uspokojivé vysvětlení pozorovaných změn, nebo do smrti. , v takovém případě bude poskytnuta úplná patologická zpráva od kvalifikovaného patologa. Všechna zjištění musí být hlášena na stránce „nežádoucí událost“ ve formuláři záznamu o případu.

   Všechny nežádoucí příhody budou hlášeny a dokumentovány, jak je popsáno níže. Nežádoucí účinky jsou rozděleny do kategorií „závažné“ a „nezávažné“. To určuje postup, který musí být použit pro hlášení/dokumentaci nežádoucí příhody.

   Definice závažných a nezávažných nežádoucích příhod

   Závažná nežádoucí příhoda je:

   • Jakákoli událost, která je smrtelná nebo život ohrožující
   • Jakákoli událost, která je trvale deaktivována
   • Jakákoli událost, která vyžaduje nebo prodlužuje hospitalizaci
   • Jakákoli událost, která zahrnuje rakovinu, vrozenou abnormalitu nebo nastane v důsledku předávkování (aplikace vyšší než stanovené dávky).

   Nežádoucí účinky, které nespadají do těchto kategorií, jsou definovány jako nezávažné.

   Posouzení závažnosti AE

   Bez ohledu na klasifikaci nežádoucí příhody jako závažnou nebo nezávažnou (viz výše), její závažnost musí být posouzena jako mírná, střední nebo závažná pouze podle lékařských kritérií:

   Mírná = nenarušuje rutinní činnosti, přijatelná Střední = zasahuje do rutinních činností Těžká = nelze provádět rutinní činnosti, je lékařem považována za nepřijatelnou, vyžaduje léčbu, vyžaduje přerušení studie nebo má reziduální účinek.

   Je třeba poznamenat, že závažná nežádoucí příhoda nemusí mít závažný charakter. Bez ohledu na závažnost musí být všechny závažné nežádoucí příhody hlášeny níže.

   Hlášení/dokumentace nežádoucích příhod

   Nežádoucí účinky jsou shromažďovány spontánním hlášením.

   Hlášení/dokumentace závažných nežádoucích příhod

   Všechny závažné nežádoucí příhody, které se vyskytnou během této studie, ať už jsou považovány za spojené se studijní medikací či nikoli, musí být zdokumentovány na stránce "Nežádoucí příhoda" ve formuláři záznamu případu.

   Musí být připravena a shromážděna následná zpráva obsahující všechny nové informace získané o závažné události.

   Zkoušející předloží na požádání kopie všech těchto zpráv etické komisi. V případě potřeby budou vyšetřovatelé informovat úřady.

   Hlášení/dokumentace nezávažných nežádoucích příhod

   Ty mají být zdokumentovány na stránce „Nežádoucí událost“ ve formuláři záznamu případu.

   Statistická analýza

   Protože se jedná o pilotní studii, provedené analýzy jsou považovány za průzkumné a vytvářející hypotézy.

   Charakteristiky pacienta a výsledné proměnné budou popsány výpočtem maxima, minima, mediánu, průměru a směrodatné odchylky pro metrické proměnné a absolutní a relativní četnosti pro kategorické proměnné.

   Pro analýzu časových trajektorií hladin IgE a dalších výsledných proměnných budou pro každý časový bod a každou léčebnou skupinu samostatně vypočítány popisné statistiky a také 95% intervaly spolehlivosti pro průměr. Aby se zohlednily heterogenní výchozí hladiny mezi pacienty, budou pozorované výsledky pro každého pacienta standardizovány příslušnými výchozími hodnotami pro tyto analýzy. Dále budou pro každý časový bod vypočítány průměrné rozdíly mezi skupinami a podle 95% intervalů spolehlivosti. Pro grafické znázornění budou vyneseny jednotlivé trajektorie každého pacienta.

   Údaje pozorované v kožním prick testu se skládají ze série dávek alergenu a výsledných plošných měření. Na základě předběžných údajů od osmi pacientů v předchozí studii bylo zjištěno, že exponenciální model typu Plocha = A*(1-exp(-λ Dávka) vhodně popisuje vztah mezi dávkou a odezvou pozorovaný v kožním prick testu. Model bude přizpůsoben pro každý časový bod v každé skupině pomocí nelineárního algoritmu nejmenších čtverců. Z těchto modelů bude hlášena míra odezvy λ, oblast plató A a 50% efektivní dávka spolu s 95% intervaly spolehlivosti.

   Pokud chybí hodnoty, veškerá analýza bude provedena na základě dostupných případů.

   Úvahy o velikosti vzorku:

   Vzhledem k průzkumné povaze studie jsou úvahy o velikosti vzorku založeny na přesnosti odhadů parametrů. Primárním cílem je analýza hladin IgE v čase. Data z předchozí studie ukazují relativní zvýšení anti-Bet v 1 IgE čtyři týdny po nazální provokaci Bet v 1 o průměrný faktor 1,4 a standardní odchylku přibližně 0,5 mezi pacienty. S kontrolním antigenem byl průměrný faktor 1,04 se standardní odchylkou přibližně 0,25. Maximální statistické přesnosti pro srovnání středních hodnot mezi oběma skupinami je dosaženo, pokud je alokační poměr úměrný poměru směrodatných odchylek, který je na základě předchozích údajů 2:1. Za výše uvedených předpokladů o velikosti účinku a standardních odchylkách poskytne celková velikost vzorku 30 (20:10) 95% intervaly spolehlivosti s poloviční šířkou přibližně 0,2 v každé skupině. Očekávaná poloviční šířka 95% intervalu spolehlivosti pro střední rozdíl mezi skupinami je 0,28. (Odpovídající dvouvýběrový t-test by měl sílu 80 % k detekci středního rozdílu 0,4 na 5% hladině významnosti). Pro analýzu kožního prick testu předběžná data naznačují, že při velikosti vzorku 20 bude poloviční šířka 95% intervalů spolehlivosti pro 50% efektivní dávku přibližně 0,25násobek 50% efektivní dávky, za kterou se uvažuje. jako dostatečná přesnost pro tuto pilotní studii. Grafické znázornění viz příloha

   Etické a právní aspekty

   Studie bude provedena v souladu s místními právními požadavky a GCP. Bude prováděna v souladu s pokyny Helsinské deklarace (1964), včetně aktuálních revizí.

   Informovaný souhlas subjektu

   Před přijetím do studie musí subjekt souhlasit s účastí poté, co mu byla vysvětlena povaha, rozsah a možné důsledky klinické studie formou pro něj srozumitelnou. Subjekt musí dát souhlas písemně. Podpis zkoušejícího potvrdí souhlas subjektu. Pacient může svůj souhlas odvolat, a to i bez vyjádření, kdykoli a bez negativních důsledků pro jeho budoucí lékařskou péči.

   Potvrzení/schválení studia

   Před zahájením studie bude protokol studie předložen Etické komisi lékařské univerzity ve Vídni a všeobecné nemocnice ve Vídni (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Vídeň, Rakousko).

   Pojištění

   Všechny subjekty účastnící se této studie budou pojištěny u pojišťovny Zürich (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Vídeň, Tel. +43 50 1255 1255; číslo pojištění: 07229622-2).

   Důvěrnost

   Jména všech subjektů budou ve vyšetřovatelských spisech utajena. Subjekty budou identifikovány v průběhu dokumentace a hodnocení podle počtu, který jim byl přidělen během studie. Subjektům bude řečeno, že všechny výsledky studie budou uloženy a bude s nimi nakládáno v nejpřísnější důvěrnosti.

   Dokumentace a využití výsledků studie

   Dokumentace výsledků studie

   Všechny výsledky shromážděné během studie budou shromážděny ve zdrojovém datovém souboru a později budou převedeny do formulářů případových zpráv (CRF). Všechny záznamy na formulářích pro záznam případu budou provedeny čitelně černým nebo modrým inkoustem. Pokud jsou provedeny opravy záznamů ve formuláři záznamu případu, slova nebo čísla budou zakroužkována a přes ně nakreslena jedna čára. Správná hodnota bude vložena vedle starého záznamu a data a oprava bude parafována. Nesprávné údaje nesmí být zakryty korekční kapalinou nebo žádným způsobem vymazány nebo nečitelné. Vyplněné CRF podepíše zkoušející. CRF budou vyplněny ihned po závěrečné zkoušce. Zdravotní záznamy, na kterých je CRF založen, budou uchovávány po dobu nejméně 15 let.

   Využití výsledků studie

   Výsledky této studie budou výzkumníci publikovány ve vědeckém časopise a prezentovány na vědeckých setkáních. Rukopis bude před odesláním rozeslán všem spoluřešitelům.