Veranderingen in adaptieve immuunresponsen en effectorcelresponsen bij blootstelling aan neusallergenen - een pilotstudie

Rationeel van de studie

Eerdere studies naar de dynamiek van de in vivo klinische en immunologische reacties op neusallergeen hebben zich gericht op bepaalde parameters, maar hebben zich niet gericht op de kinetiek van het samenspel tussen de verschillende factoren (d.w.z. allergeenspecifieke IgE-spiegels, lokale IgE- en mediatorproductie, basofiele gevoeligheid, huidgevoeligheid). De onderzoekers stellen daarom een ​​gerandomiseerde, dubbelblinde, placebogecontroleerde studie voor waarbij de onderzoekers patiënten intranasaal provoceren met allergeenextract en vervolgens gedurende een periode van 4 maanden zowel de klinische als de immunologische immuunrespons nauwlettend volgen. Hierna vinden nog 4 bezoeken plaats voor en na het berkenseizoen.

De onderzoekers zullen kijken naar directe en late fase immuunresponsen op berkenpollenextract nasale provocatie buiten het pollenseizoen. Deelnemers aan de studie zullen in eerste instantie 3 opeenvolgende dagen een nasale allergeenuitdaging ondergaan en daarna gedurende een periode van 1 jaar nauwlettend worden gevolgd. Om de klinische respons op blootstelling aan allergenen te beoordelen, zullen de onderzoekers gebruik maken van de huidpriktest (SPT), totale nasale symptoomscore (TNSS), nasale endoscopie en Peak Inspiratory Nasal Flow Meter (PNIF). Om de immunologische respons te beoordelen, zullen bloedmonsters, neusslijmvliesmonsters en neusafscheidingen worden genomen.

Ontwerp ontwerpen

In deze single-center, gerandomiseerde, placebogecontroleerde, dubbelblinde studie zullen in totaal 36 (6 voor een pre-studie) patiënten op vrijwillige basis voor deze studie worden gerekruteerd en gerandomiseerd worden om een ​​neusprovocatie te krijgen met een van beide pollenextract of placebo. Randomisatie zal worden gestratificeerd volgens Bet v 1-specifieke IgE-niveaus om een ​​gelijke verdeling in beide groepen mogelijk te maken. 30 Studiedeelnemers zullen buiten het berkenpollenseizoen neusprovocatie krijgen met berkenpollenextract of placebo op drie opeenvolgende dagen en zullen daarna regelmatig worden gecontroleerd gedurende maximaal vier maanden.

Voorafgaand aan het onderzoek bij 30 patiënten zullen 6 personen met een berkenpollenallergie eerst een kort protocol ondergaan om ervoor te zorgen dat

1. De allergeenconcentratie die wordt gebruikt voor nasale provocatie is voldoende om een ​​stijging van IgE-antilichamen op te wekken
2. Dat de titraties van de huidpriktest voldoende zijn

3. Dat de timing van het nemen van neusafscheidingen voor het bepalen van mediatoren voldoende is.

   Als uit de resultaten van deze 6 patiënten blijkt dat ofwel de nasale allergeenconcentratie, huidtesttitraties of timing van nasale secreties niet adequaat zijn, dan zal een wijziging worden voorgelegd aan de ethische commissie.

   Het verkorte protocol omvat 5 bezoeken:

   • volledig screeningsbezoek
   • compleet bezoek N1
   • bezoek N2 zonder bloedafname en zonder neusafname
   • bezoek N3 zonder bloedafname en zonder neusafname
   • compleet bezoek N7

   Screeningsbezoek

   Procedure

   • Ondertekening van het formulier voor geïnformeerde toestemming (versie 2.1. voor initiële studie met kort protocol, versie 1.8 (bijgewerkt voor uitbreiding) voor hoofdstudie)
   • Toekenning screeningnummer
   • Demografische data
   • Geschiedenis van allergie
   • Beoordeling van in- en uitsluitingscriteria
   • Zwangerschapstest voor vrouwen indien SPT nodig is
   • Medische geschiedenis
   • Gelijktijdige medicatie
   • Voorafgaande rhinoscopie
   • Standaard SPT met commercieel extract van: hazelaar, as, grasmix, ambrosia, bijvoet, D. pteronyssinus, D. farina, huidschilfers van katten en honden, alternaria, cladosporium, histamine en negatieve controle
   • Getitreerde huidpriktest met commercieel berkenpollenextract
   • Bloedafname (max. 60 ml gehepariniseerd bloed en serum) - Een deel van het bloedmonster wordt rechtstreeks naar het laboratorium gestuurd voor analyse van basofielactivatie, totaal IgE en specifiek IgE voor relevante allergenen. Van de rest van het bloed wordt RNA bereid en bewaard bij -80°C en serum wordt gescheiden en bewaard bij -20°C
   • nasale bemonstering (neusspoeling, mucosale curettebemonstering en neussecretiebemonstering)

   Bezoek N0

   Vereisten met betrekking tot timing: Bezoek N0 wordt gepland tussen 2 weken en 4 dagen voor bezoek N1. Dit is alleen voor patiënten die meer dan 3 weken voor bezoek N1 zijn gescreend

   Procedure:

   • Bloedafname
   • Verzameling van neusmonsters (lavage, bemonstering van mucosale curette en bemonstering van neussecretie)
   • Getitreerde SPT
   • PNIF
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek N1

   Procedure:

   • Herbeoordeling van in- en uitsluitingscriteria (allergeenspecifieke IgE-resultaten)
   • Randomisatie: proefpersonen krijgen een behandelingsnummer toegewezen
   • Basislijn Bloedafname
   • Baseline verzameling van neusmonsters (lavage, monstername van neusslijmvlies en monstername van neussecretie)
   • Baseline TNSS-score
   • Opname van ongewenste voorvallen (AE).
   • Gelijktijdige medicatie
   • PNIF gegeven aan patiënten en uitleg/demonstratie hoe het werkt. Patiënten krijgen een papieren dagboek om de dagelijkse PNIF-waarden (van N1 tot N5) bij te houden. Deze zuivelfabriek zal ook worden gebruikt om dagelijkse TNSS-scores (N4-N5) vast te leggen.
   • Zwangerschaptest
   • in. toediening van berkenpollenextract of placebo
   • Documentatie van symptomen direct na provocatie
   • Bloed, PNIF, nasale monstername (neusspoeling, mucosale curette-monstername en nasale secretiemonstername) en TNSS-score, 20 min, 40 min, 1 uur, 2 uur, 4 uur, 20-24 uur na toediening van berkenpollenextract (20-24 uur tijdspunt zal worden uitgevoerd bij bezoek N2).
   • Neusafname, PNIF- en TNSS-score 10 min, 3 uur, 5 uur, 6 uur, 7 uur, 8 uur na toediening van berkenpollenextract
   • Getitreerde SPT
   • toediening van noodmedicatie indien nodig (azelastine neusspray, desloratadin 5 mg)

   Bezoek N2

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek N2 is gepland de dag na bezoek N1

   Procedure:

   • Bloed, PNIF, neusafname (lavage, mucosale curette-afname en nasale secretieafname) en TNSS-score (tijdstip 20-24 uur na toediening van berkenpollenextract in N1).
   • AE-opname
   • Gelijktijdige medicatie
   • in. toediening van berkenpollenextract of placebo gevolgd door een observatieperiode van 2 uur
   • Documentatie van symptomen direct na provocatie
   • toediening van noodmedicatie indien nodig (azelastine neusspray, desloratadin 5 mg)
   • Opmerking: bij de eerste 6 proefpersonen worden geen neus- en bloedafnames uitgevoerd

   Bezoek N3

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek N3 is gepland de dag na bezoek N2

   Procedure:

   • Bloedafname vóór provocatie
   • Neusspecimenafname vóór provocatie (lavage, mucosale curette-monstername en nasale secretie-monstername)
   • TNSS-score vóór provocatie
   • Getitreerde SPT
   • Opname van ongewenste voorvallen (AE).
   • Gelijktijdige medicatie
   • in. toediening van berkenpollenextract of placebo
   • Documentatie van symptomen direct na provocatie
   • Bloed-, PNIF-, neusafname (lavage, mucosale curette-afname en nasale secretieafname) en TNSS-score 20 min, 40 min, 1 uur, 2 uur, 4 uur, 20-24 uur en na toediening van berkenpollenextract (20-24 uur wordt uitgevoerd om bezoek N4).
   • Neusafname, PNIF- en TNSS-score 10 min, 3 uur, 5 uur, 6 uur, 7 uur, 8 uur na toediening van berkenpollenextract
   • Toediening van noodmedicatie indien nodig (azelastine neusspray, desloratadin 5 mg)
   • Opmerking: bij de eerste 6 proefpersonen worden geen neus- en bloedafnames uitgevoerd

   Bezoek N4

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek N4 staat de dag na bezoek N3 gepland

   Procedure:

   • Bloed-, PNIF-, neusafname (lavage, mucosale curette-afname en nasale secretieafname) en TNSS-score 20-24 uur na toediening van berkenpollenextract.

   Bezoek N5

   Bezoek N5 is gepland 14 ±4 dagen na bezoek N4:

   Procedure:

   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • PNIF
   • Getitreerde SPT
   • TNSS-score
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was
   • Verzameling papieren dagboek van Visit N1 tot N5

   Bezoek N6

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek N6 is gepland 14 ±4 dagen na bezoek N5

   Procedure:

   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • PNIF
   • Getitreerde SPT
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek N7

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek N7 is gepland 14 ±4 dagen na bezoek N6

   Procedure:

   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • PNIF
   • Getitreerde SPT
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek N8

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek N8 is gepland 14 ±4 dagen na bezoek N7

   Procedure:

   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • PNIF
   • Getitreerde SPT
   • scoren
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek N9

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek N9 is gepland 14 ±4 dagen na bezoek N8

   Procedure:

   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • PNIF
   • Getitreerde SPT
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek N10

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek N9 is gepland 14 ±4 dagen na bezoek N9

   Procedure:

   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • PNIF
   • Getitreerde SPT
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek N11 - Laatste bezoek van neusprovocatiecomponent

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek N11 is gepland 28 ±4 dagen na bezoek N10

   Procedure:

   • Bloed voor immunologische parameters en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafname)
   • PNIF
   • Getitreerde SPT
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek S1 (Uitbreiding - Goedgekeurd door MUW Ethische Commissie op 11 februari 2019)

   Vereisten met betrekking tot timing: Bezoek S1 is gepland 4 weken voor de voorspelde start van het berkenseizoen (+/- 7 dagen)

   Procedure:

   • Papierpollen en PNIF-dagboek uitgelegd aan patiënten en gevraagd dagelijks in te vullen tijdens het berkenseizoen
   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • Getitreerde SPT
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek S2

   Eisen qua timing: Bezoek S2 is gepland 4 weken na het einde van het berkenseizoen (+/- 7 dagen)

   Procedure:

   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • Collectie papieren dagboek
   • Waargenomen PNIF
   • Getitreerde SPT
   • TNSS-score bij bezoek
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek S3

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek S3 is gepland 4 weken na bezoek S2 - (+/- 7 dagen)

   Procedure:

   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • Waargenomen PNIF
   • Getitreerde SPT
   • TNSS-score bij bezoek
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was

   Bezoek S4 en Einde studie

   Vereisten met betrekking tot timing:

   Bezoek S4 is gepland 1 jaar na de start van de hele studie (1 jaar na bezoek N0) +/- 7 dagen

   Procedure:

   • Bloed- en neusafname (lavage, mucosale curette en neusafscheiding)
   • Waargenomen PNIF
   • Getitreerde SPT
   • TNSS-score bij bezoek
   • AE-opname
   • Zwangerschapstest voor vrouwen als de laatste test meer dan een maand geleden was
   • Einde studie

   Beschrijvingen van studieprocedures

   Medische geschiedenis van patiënten, demografische gegevens, gelijktijdige medicatie Patiënten zullen worden gevraagd naar hun medische geschiedenis inclusief demografische gegevens en gelijktijdige medicatie, hun allergische symptomen inclusief intensiteit en duur en hun geschiedenis van allergische medicatie.

   Geschiedenis van allergie en TNSS-score

   Patiënten zullen worden gevraagd naar het optreden van niezen, loopneus, neuspruritus, verstopte neus en slaapkwaliteit en om elk symptoom bij elk bezoek te beoordelen en thuis een verslag bij te houden. Ze zullen de volgende symptoomscoremethode gebruiken: 0 = afwezig; 1 = licht - aanwezig maar gemakkelijk te verdragen; 2 = matig - aanwezig, symptoom is hinderlijk maar verstoort de dagelijkse activiteiten niet; 3 = ernstig - symptoom is moeilijk te verdragen en belemmert dagelijkse activiteiten (24). Daarnaast komt er een visueel analoge schaal van de totale ziektelast op het formulier.

   Voorafgaande rhinoscopie

   Tijdens het screeningsbezoek wordt eenmaal een anterieure rhinoscopie uitgevoerd om anatomische afwijkingen (bijv. septumafwijking) of pathologische veranderingen (bijv. neuspoliepen). Het wordt uitgevoerd met behulp van een speculum waarbij de patiënt zit met het hoofd iets naar achteren.

   Peak Inspiratoire Nasale Flowmeter (PNIF)

   De draagbaarheid en het gemak van de PNIF biedt een unieke mogelijkheid om objectieve metingen te verkrijgen terwijl de patiënten thuis zijn. Het is onlangs ook gevalideerd als studiehulpmiddel tijdens nasale allergeenprovocatie.

   Procedure:

   Tijdens het bezoek wordt 1 patiënt getraind in het gebruik van het PNIF-apparaat (In-check, Inspiratoire flowmeter) en krijgt hij er een om mee naar huis te nemen tot N5. De PNIF maakt gebruik van een buis met variabele diameter die rechtstreeks in liters per minuut is gekalibreerd, samen met een indicatorring met lage traagheid. De positie van de ring na een inademingsmanoeuvre geeft de maximaal bereikte flow aan. Het apparaat werkt wanneer een patiënt door de mond of neus inademt, hierdoor wordt lucht door de meter gezogen en beweegt een cursor langs de schaal om de inademingssnelheid aan te geven. Het bereikte debiet kan worden genoteerd door de positie van de cursor tegen de gekalibreerde schaal te controleren.

   PNIF in studiegedrag:

   De PNIF zal worden gegeven aan studiedeelnemers om mee naar huis te nemen, zodat ze een dagelijkse of wekelijkse zuivel (afhankelijk van de fase van de studie) van hun nasale luchtstroom kunnen bijhouden. Ze zullen ook worden gevraagd om ze mee te nemen naar alle studiebezoeken, zodat geobserveerde PNIF-metingen kunnen worden gedaan.

   Huidpriktest

   4.5.1 Procedure: Allergenen worden ingebracht in de dermis van de onderarm door zachtjes in de huid te prikken door een druppel (20ul) van een allergeenbevattende oplossing met een steriel lancet met minstens 2 cm tussen elk afzonderlijk aanbrengpunt. 0,9% natriumchloride-oplossing wordt gebruikt als negatieve en histamine als positieve controle. Bij eerder gesensibiliseerde personen zullen jeukende zwelling en rood worden van de huid (wheal and flare reactie) optreden binnen 15 minuten na blootstelling aan het betreffende allergeen. Na 20 minuten worden de allergeenoplossingen weggeveegd en worden de randen van de striemen getraceerd met een balpen. Transparante tape wordt op de huid geplakt om de contouren van de kwaddel over te brengen op de tape voor de platen. Het oppervlak van de striemen wordt berekend door middel van digitale planimetrie. Voor opname worden striemen met een diameter van minimaal 3 mm beschouwd als positieve reacties.

   Testoplossingen:

   In de handel verkrijgbaar extract van berkenpollen en een panel van boom- en graspollen, onkruid en overblijvende allergenen (Allergopharma, Wenen, Oostenrijk) zullen worden gebruikt bij het screeningsbezoek en zullen worden bewaard volgens de instructies van de fabrikant. Als controles zullen steriele 0,9% NaCl-oplossing (negatieve controle) en histamine (positieve controle, Allergopharma, Wenen, Oostenrijk) worden gebruikt. Ze worden opgeslagen volgens de instructies van de fabrikant.

   SPT in studiegedrag:

   Screeningsbezoek:

   Een standaard huidpriktest met commercieel berkenpollenextract en een panel van boom- en graspollen, onkruid en overblijvende allergenen (alle Allergopharma, Wenen, Oostenrijk) zoals gebruikt bij routinematige diagnostiek in de allergiekliniek van de KNO-afdeling zal worden uitgevoerd om de sensibilisatieprofiel van de patiënt bij het screeningsbezoek.

   Screening en bezoeken N0, N5 - N11, S1-S4 Een getitreerde huidpriktest op berkenextract wordt uitgevoerd met toenemende verdunningen (verdunningen worden verhoogd met een factor 3 tot 1:60 000 (=11 verdunningsstappen) om te bepalen de laagste concentratie die een huidreactie uitlokt. Huidtesten voor alle verdunningen worden in viervoud uitgevoerd. Commerciële positieve controle-oplossing (histamine) en negatieve controle worden in duplo gedaan.

   Veiligheidsmaatregelen Als veiligheidsmaatregel worden patiënten gedurende 30 minuten na het testen gemonitord. Alle onderzoeken vinden plaats op de polikliniek van de KNO-afdeling, waar de volledige spoedeisende hulpapparatuur aanwezig is.

   Bloedafname en meting van immunologische parameters

   Tijdens het screeningsbezoek en bij alle studiebezoeken zullen bloedmonsters worden genomen door punctie van de antecubitale ader voorafgaand aan huidtesten. Er wordt maximaal 60 ml per bezoek ingenomen ofwel gehepariniseerd (bijv. voor basofielengevoeligheidstests) of voor de bereiding van serum (bijv. voor beoordeling van totale en allergeenspecifieke immunoglobulinespiegels of RBL-test). Serumflesjes worden verwerkt en serum wordt bewaard bij -20°C. Allergeenspecifiek IgE van bloedmonsters van het screeningsbezoek zal worden gemeten door CAP-FEIA om de allergeenspecifieke RAST-klasse van de patiënten te beoordelen. Meting van totaal, vrij en allergeenspecifiek serum IgE, IgG, IgA en IgM zal worden uitgevoerd door CAP-FEIA, door microarraymeting of ELISA. De meting zal worden uitgevoerd aan het einde van het onderzoek in alle verzamelde serummonsters om interassayvariatie te minimaliseren. Bij elk bezoek zal de basofiele respons op allergeen, fMLP en anti-IgE worden gemeten. In het kort zullen basofielen gedurende 15 minuten worden blootgesteld aan verschillende concentraties anti-IgE, fMLP of recombinante allergenen en vervolgens worden onderzocht op expressie van CD 63 en CD203c door middel van flowcytometrie. Als alternatief zal de histamine-afgifte worden bepaald door middel van in de handel verkrijgbare histamine-afgiftekits.

   Zwangerschapstesten

   Bij vrouwelijke patiënten wordt zwangerschap uitgesloten met een standaard urinezwangerschapstest. De test wordt uitgevoerd vóór de eerste huidpriktest bij het screeningsbezoek en daarna eenmaal per maand.

   Verzameling neusmonsters

   Bij alle bezoeken wordt een neusmonster afgenomen. Voor elk bezoek worden monsters verzameld met behulp van nasosorptie FXi/PU (met een synthetische absorberende matrix (SAM)) of een 10 cm lange plastic curette (beide apparaten van Hunt Developments, VK)

   Nasosorptie met behulp van FXi/PU (Hunt Developments, VK):

   Onder visualisatie wordt het apparaat in de neusholte ingebracht en langs de zijwand tegen de onderste neusschelp geplaatst. De wijsvinger van de patiënt zal worden gebruikt om op de externe aspecten van de alar en laterale neuskraakbeenderen te drukken om het apparaat op zijn plaats te houden. Na 1 minuut worden de apparaten verwijderd en wordt de vloeistof door centrifugeren geëxtraheerd. Supernatant zal worden ingevroren bij -70°C tot verdere analyse op de aanwezigheid van allergeenspecifieke en totale Ig-niveaus, mediator- en cytokineniveaus.

   Mucosale mRNA-bemonstering Er wordt een neuscurette van 10 cm gebruikt. Onder directe visualisatie wordt de curette tegen het midden-inferieure gedeelte van de inferieure neusschelp gebracht. De curette wordt 2-3 keer tegen het slijmvliesoppervlak gedrukt en naar buiten bewogen. Deze beweging wordt 2-3 keer herhaald om een ​​goede monsterverzameling te garanderen. Het is aangetoond dat deze curette en deze techniek geen noemenswaardig ongemak veroorzaken voor patiënten en heeft dus het voordeel dat er geen plaatselijke verdoving nodig is. Na verzameling worden de cellen gelyseerd in Qiagen RLT-buffer en bewaard bij -70°C voor latere mRNA-analyse.

   4.9 Intranasale provocatie

   Berkenpollenextract (Allergopharma, Wenen, Oostenrijk) wordt vers verdund in een steriele 0,9% natriumchlorideoplossing en wordt toegediend met behulp van een doseerpomp. Het allergeen wordt toegediend met behulp van een doseerpomp die 15 μl per puf naar beide neusgaten levert bij bezoek N1, N2, N3. Als de patiënt na de provocatie neus- of oogsymptomen krijgt, wordt azelastine-neusspray of desloratadine 5 mg toegediend.

   Randomisatieprocedure

   Bij bezoek N1 van het hoofdonderzoek worden de patiënten gerandomiseerd in een van de twee groepen (berkenpollenextract of placebo). Studieonderwerpen zullen worden gerandomiseerd (verhouding 2:1 voor provocatie versus controle) met behulp van het online randomisatieprogramma "randomizer" (www.meduniwien.ac.at/randomizer), dat wordt beheerd door het Instituut voor Medische Informatica, Statistiek en Documentatie bij Medical Universiteit van Graz, Graz, Oostenrijk. De verhouding 2:1 is gekozen omdat de variantie van Ig-metingen en afgeleide grootheden naar verwachting groter zal zijn in de provocatiegroep vanwege de verwachte grotere algehele Ig-niveaus, zie ook de overwegingen voor de steekproefomvang verderop in dit document.

   De randomisatie zal worden uitgevoerd door een persoon die niet betrokken is bij de studie en geen contact heeft met de patiënten om ervoor te zorgen dat de studie dubbelblind zal zijn.

   Onderzoeksmiddelen en studiemedicatie

   Berkenpollenextract:

   Berkenpollenextract (Allergopharma, Wenen, Oostenrijk) zal worden gebruikt voor intranasale provocatie. Berkenpollenextract komt gelyofiliseerd aan en wordt opgelost in steriel 0,9% natriumchloride. Het gehalte aan Bet v 1 in het extract wordt bepaald door middel van immunoblotting met behulp van antilichaamprobes die specifiek zijn voor Bet v 1. Ten slotte wordt het extract verdund zodat de uiteindelijke concentratie van Bet v 1 50 μg/ml zal zijn, aangezien deze concentratie eerder is vastgesteld. aangetoond dat het veranderingen in specifieke IgE-niveaus opwekt bij nasale provocatie.

   Besturingsoplossingen:

   Controleoplossingen zullen natriumchloride 0,9% bevatten als negatieve controle voor huidpriktest en als placebo voor intranasale provocatie. Histamine (Allergopharma, Wenen, Oostenrijk) zal worden gebruikt als een positieve controle voor de huidpriktest. Ze worden opgeslagen volgens de instructies van de fabrikant.

   Gelijktijdige medicatie

   Algemeen:

   Alle aanvullende medicatie die door de proefpersonen wordt ingenomen bij aanvang van de studie of op enig moment tijdens de studie, wordt beschouwd als gelijktijdige medicatie en zal worden gedocumenteerd in het Brongegevensbestand. Gelijktijdige medicatie moet tijdens het onderzoek tot een minimum worden beperkt, maar indien dit noodzakelijk wordt geacht, mag dit worden gegeven als dit het onderzoeksprotocol niet verstoort.

   Rescue-medicatie:

   Hoewel anafylactische gebeurtenissen in dit onderzoek zeer onwaarschijnlijk zijn, moeten ze altijd als mogelijk worden beschouwd. Daarom zal er onmiddellijk een complete noodkit beschikbaar zijn in geval van anafylactische reacties bij SPT of nasale provocatie. Bovendien, als de patiënt last heeft van neus- en oogsymptomen na de intranasale provocatie, zal azelastine neusspray en/of desloratadine 5 mg worden verstrekt om de symptomen te verlichten.

   Verboden gelijktijdige medicatie:

   Proefpersonen moeten voor de duur van het onderzoek geen medicatie gebruiken die de studieprocedures verstoort. De volgende gelijktijdige behandelingen zijn tijdens dit onderzoek niet toegestaan:

   • Systemische of lokale corticosteroïden
   • Andere immunosuppressiva
   • Antihistaminica of dinatriumcromoglycaat 3 dagen voorafgaand aan bezoeken
   • Systemische of intranasale adrenerge geneesmiddelen
   • Psychofarmacologische medicijnen
   • ACE-remmers of bètablokkers

   Bijwerkingen

   Een bijwerking is elke gebeurtenis tijdens een klinisch onderzoek, inclusief bijkomende ziekte of ongeval, die het welzijn van de proefpersoon schaadt; het kan ook de vorm aannemen van een abnormale laboratoriumwaarde. De term bijwerking impliceert geen causaal verband met de onderzoeksbehandeling.

   Alle proefpersonen die bijwerkingen ervaren - al dan niet geassocieerd met het gebruik van de onderzoeksbehandeling - zullen worden gecontroleerd totdat de symptomen verdwijnen en eventuele abnormale laboratoriumwaarden zijn teruggekeerd naar de basislijn, of totdat er een bevredigende verklaring is voor de waargenomen veranderingen, of tot overlijden , in welk geval een volledig pathologierapport van een gekwalificeerde patholoog zal worden verstrekt. Alle bevindingen moeten worden gerapporteerd op een "ongewenste gebeurtenis"-pagina in het dossierformulier.

   Alle bijwerkingen worden gerapporteerd en gedocumenteerd zoals hieronder beschreven. Bijwerkingen zijn onderverdeeld in de categorieën "ernstig" en "niet-ernstig". Dit bepaalt de procedure die moet worden gevolgd om de bijwerking te melden/documenteren.

   Definitie van ernstige en niet-ernstige bijwerkingen

   Een ernstige bijwerking is:

   • Elke gebeurtenis die dodelijk of levensbedreigend is
   • Elke gebeurtenis die permanent wordt uitgeschakeld
   • Elke gebeurtenis die ziekenhuisopname vereist of verlengt
   • Elke gebeurtenis waarbij sprake is van kanker, een aangeboren afwijking of die optreedt als gevolg van een overdosis (toediening van meer dan de voorgeschreven dosis).

   Bijwerkingen die niet in deze categorieën vallen, worden gedefinieerd als niet-ernstig.

   Beoordeling van de ernst van AE

   Ongeacht de classificatie van een bijwerking als ernstig of niet-ernstig (zie hierboven), moet de ernst ervan worden beoordeeld als licht, matig of ernstig, uitsluitend op basis van medische criteria:

   Licht = interfereert niet met routinematige activiteiten, aanvaardbaar Matig = interfereert met routinematige activiteiten Ernstig = onmogelijk om routinematige activiteiten uit te voeren, wordt door de arts als onaanvaardbaar beschouwd, vereist behandeling, vereist stopzetting van de studie, of heeft een blijvend effect.

   Opgemerkt moet worden dat een ernstige bijwerking niet ernstig van aard hoeft te zijn. Ongeacht de ernst moeten alle ernstige bijwerkingen worden gerapporteerd zoals hieronder.

   Melding/documentatie van ongewenste voorvallen

   Bijwerkingen worden verzameld door spontane melding.

   Melding/documentatie van ernstige ongewenste voorvallen

   Alle ernstige ongewenste voorvallen die tijdens dit onderzoek optreden, ongeacht of ze al dan niet in verband worden gebracht met de onderzoeksmedicatie, moeten worden gedocumenteerd op de pagina 'Bijwerkingen' in het casusformulier.

   Een vervolgrapport met alle nieuwe verkregen informatie over de ernstige gebeurtenis moet worden opgesteld en zal worden verzameld.

   De onderzoeker bezorgt op verzoek kopieën van al deze rapporten aan de ethische commissie. Waar nodig informeren rechercheurs de autoriteiten.

   Rapportage/documentatie van niet-ernstige bijwerkingen

   Deze moeten worden gedocumenteerd op een pagina "Ongewenste gebeurtenis" in het casusregistratieformulier.

   statistische analyse

   Aangezien dit een pilootstudie is, worden de uitgevoerde analyses beschouwd als verkennend en hypothesegenererend.

   Patiëntkarakteristieken en uitkomstvariabelen worden beschreven door maximale, minimale, mediaan, gemiddelde en standaarddeviatie te berekenen voor metrische variabelen en absolute en relatieve frequenties voor categorische variabelen.

   Om tijdtrajecten van IgE-niveaus en andere uitkomstvariabelen te analyseren, zullen beschrijvende statistieken en 95%-betrouwbaarheidsintervallen voor het gemiddelde worden berekend voor elk tijdstip en elke behandelingsgroep afzonderlijk. Om rekening te houden met heterogene basislijnniveaus tussen patiënten, zullen de waargenomen resultaten voor elke patiënt worden gestandaardiseerd door de respectieve basislijnwaarden voor deze analyses. Verder zullen gemiddelde verschillen tussen groepen en volgens 95% betrouwbaarheidsintervallen berekend worden voor elk tijdstip. Voor grafische illustratie worden de individuele trajecten van elke patiënt uitgezet.

   De gegevens die worden waargenomen in de huidpriktest bestaan ​​uit een reeks allergeendoses en de resulterende gebiedsmetingen. Gebaseerd op voorlopige gegevens van acht patiënten in een eerdere studie, bleek een exponentieel model van het type Area = A*(1-exp(-λ Dose) de dosis-responsrelatie die werd waargenomen in de huidpriktest, correct te beschrijven. Het model zal geschikt zijn voor elk tijdstip in elke groep met behulp van een niet-lineair kleinste-kwadratenalgoritme. Van deze modellen worden het responspercentage λ, het plateaugebied A en de 50% effectieve dosis gerapporteerd samen met 95% betrouwbaarheidsintervallen.

   Als er ontbrekende waarden zijn, wordt alle analyse uitgevoerd op basis van een beschikbaar geval.

   Overwegingen voor de grootte van de steekproef:

   Gezien het verkennende karakter van het onderzoek, zijn de overwegingen voor de steekproefomvang gebaseerd op de precisie van parameterschattingen. Het primaire doel is de analyse van IgE-niveaus in de loop van de tijd. Gegevens uit een eerdere studie tonen een relatieve toename van anti-Bet v 1 IgE vier weken na nasale provocatie met Bet v 1 met een gemiddelde factor van 1,4 en een standaarddeviatie van ongeveer 0,5 tussen patiënten. Met een controleantigeen was de gemiddelde factor 1,04 met een standaarddeviatie van ongeveer 0,25. De maximale statistische precisie voor een vergelijking van gemiddelde waarden tussen de twee groepen wordt bereikt als de toewijzingsverhouding evenredig is met de verhouding van standaarddeviaties, die 2:1 is op basis van de eerdere gegevens. Onder de bovenstaande aannames over effectgroottes en standaarddeviaties, levert een totale steekproefomvang van 30 (20:10) 95% betrouwbaarheidsintervallen op met een halfwaardebreedte van ongeveer 0,2 in beide groepen. De verwachte halfwaardebreedte van een betrouwbaarheidsinterval van 95% voor het gemiddelde verschil tussen groepen is 0,28. (Een overeenkomstige t-toets met twee steekproeven zou een vermogen van 80% hebben om een ​​gemiddeld verschil van 0,4 te detecteren bij een significantieniveau van 5%). Voor de analyse van de huidpriktest suggereren de voorlopige gegevens dat bij een steekproefomvang van 20 de halfwaardebreedte van 95% betrouwbaarheidsintervallen voor de 50% effectieve dosis ongeveer 0,25 keer de 50% effectieve dosis zal zijn, wat wordt beschouwd als als voldoende precisie voor deze pilootstudie. Zie bijlage voor grafische weergave

   Ethische en juridische aspecten

   Het onderzoek zal worden uitgevoerd in overeenstemming met de lokale wettelijke vereisten en GCP. Het zal worden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen van de Verklaring van Helsinki (1964), inclusief de huidige herzieningen.

   Geïnformeerde toestemming van de proefpersoon

   Alvorens tot het onderzoek te worden toegelaten, moet de proefpersoon toestemming hebben gegeven voor deelname nadat de aard, reikwijdte en mogelijke gevolgen van het klinisch onderzoek in een voor hem/haar begrijpelijke vorm zijn uitgelegd. De proefpersoon moet schriftelijk toestemming geven. De handtekening van de onderzoeker bevestigt de toestemming van de proefpersoon. De patiënt kan de toestemming te allen tijde intrekken, zelfs zonder commentaar te geven, zonder negatieve gevolgen voor zijn toekomstige medische zorg.

   Erkenning/goedkeuring van het onderzoek

   Voor aanvang van het onderzoek zal het onderzoeksprotocol worden voorgelegd aan de ethische commissie van de medische universiteit Wenen en het algemeen ziekenhuis van Wenen (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Wenen, Oostenrijk).

   Verzekering

   Alle proefpersonen die aan dit onderzoek deelnemen, zullen verzekerd zijn bij de verzekeringsmaatschappij Zürich (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Wenen, Tel. +43 50 1255 1255; verzekeringsnummer: 07229622-2).

   Vertrouwelijkheid

   De namen van alle proefpersonen worden geheim gehouden in de dossiers van de onderzoekers. Proefpersonen zullen tijdens de documentatie en evaluatie worden geïdentificeerd aan de hand van het nummer dat hen tijdens het onderzoek is toegewezen. De proefpersonen wordt verteld dat alle onderzoeksbevindingen strikt vertrouwelijk zullen worden opgeslagen en behandeld.

   Documentatie en gebruik van onderzoeksresultaten

   Documentatie van onderzoeksresultaten

   Alle resultaten die tijdens het onderzoek worden verzameld, worden verzameld in een brongegevensbestand en worden later overgebracht naar de case report-formulieren (CRF's). Alle vermeldingen op de dossierformulieren worden leesbaar gemaakt in zwarte of blauwe inkt. Als er correcties worden aangebracht in gegevens in het dossierformulier, worden de woorden of cijfers geringd en wordt er een enkele streep doorheen getrokken. De juiste waarde wordt naast de oude invoer en datum ingevoerd en de correctie wordt geparafeerd. Onjuiste invoer mag niet worden bedekt met correctievloeistof of op enigerlei wijze worden uitgewist of onleesbaar worden gemaakt. De ingevulde CRF's worden ondertekend door de onderzoeker. CRF's worden onmiddellijk na het eindexamen voltooid. De medische dossiers waarop het CRF is gebaseerd, worden minimaal 15 jaar bewaard.

   Gebruik van de onderzoeksresultaten

   De bevindingen van deze studie zullen door de onderzoekers worden gepubliceerd in een wetenschappelijk tijdschrift en gepresenteerd in wetenschappelijke bijeenkomsten. Het manuscript zal vóór indiening onder alle mede-onderzoekers worden verspreid.