Muutokset adaptiivisissa immuunivasteissa ja efektorisoluvasteissa nenän allergeenialtistuksen yhteydessä – pilottitutkimus

Tutkimuksen perustelu

Aiemmat tutkimukset in vivo -kliinisten ja immunologisten vasteiden dynamiikasta nenäallergeenille ovat keskittyneet tiettyihin parametreihin, mutta ne eivät ole käsitelleet eri tekijöiden välisen vuorovaikutuksen kinetiikkaa (esim. allergeenispesifiset IgE-tasot, paikallinen IgE- ja välittäjätuotanto, basofiilien herkkyys, ihon herkkyys). Siksi tutkijat ehdottavat satunnaistettua kaksoissokkoutettua lumekontrolloitua tutkimusta, jossa tutkijat haastavat potilaat nenänsisäisesti allergeeniuutteella ja seuraavat sitten tarkasti sekä kliinisiä että immunologisia immuunivasteita 4 kuukauden ajan. Tämän jälkeen järjestetään vielä 4 käyntiä ennen ja jälkeen koivukauden.

Tutkijat tarkastelevat välittömän ja myöhäisen vaiheen immuunivasteita koivun siitepölyuutteen nenähaasteelle siitepölykauden ulkopuolella. Tutkimukseen osallistuville suoritetaan aluksi 3 peräkkäisenä päivänä nenän allergeenialtistus, minkä jälkeen heitä seurataan tarkasti 1 vuoden ajan. Kliinisen vasteen arvioimiseksi allergeenialtistukseen tutkijat käyttävät ihopistotestiä (SPT), nenäoireiden kokonaispistemäärää (TNSS), nenän endoskopiaa ja Peak Inspiratory Nenän virtausmittaria (PNIF). Immunologisten vasteiden arvioimiseksi otetaan näytteitä, mukaan lukien verta, nenän limakalvonäytteitä ja nenän eritteitä.

Opintojen suunnittelu

Tässä yhden keskuksen satunnaistetussa, lumekontrolloidussa kaksoissokkotutkimuksessa tähän tutkimukseen rekrytoidaan vapaaehtoisesti yhteensä 36 (6 esitutkimuksessa) potilasta, jotka satunnaistetaan saamaan nenäaltistus jommallakummalla koivulla. siitepölyuute tai lumelääke. Satunnaistaminen ositetaan Bet v 1 -spesifisten IgE-tasojen mukaan tasaisen jakautumisen mahdollistamiseksi molemmissa ryhmissä. 30 tutkimukseen osallistunutta saa koivun siitepölykauden ulkopuolella nenäprovokaatiota joko koivun siitepölyuutteella tai lumelääkettä kolmena peräkkäisenä päivänä, minkä jälkeen heitä seurataan säännöllisesti enintään neljän kuukauden ajan.

Aluksi ennen tutkimusta 30 potilaalla kuudelle koivun siitepölylle allergiselle koehenkilölle tehdään lyhyt protokolla sen varmistamiseksi, että

1. Nenän provokaatioon käytetty allergeenipitoisuus on riittävä saamaan aikaan IgE-vasta-aineiden nousun
2. Että ihopistokokeen titraukset ovat riittävät

3. Että nenäeritteiden oton ajoitus välittäjien määrittämiseen on riittävä.

   Jos näiden kuuden potilaan tuloksista ilmenee, että joko nenän allergeenipitoisuus, ihotestien titraukset tai nenäeritteiden ajoitus eivät ole riittävät, muutos toimitetaan eettiselle komitealle.

   Lyhennetty protokolla sisältää 5 käyntiä:

   • täydellinen seulontakäynti
   • täydellinen vierailu N1
   • käydä N2:ssa ilman verinäytteitä ja ilman nenänäytettä
   • käydä N3:ssa ilman verinäytteitä ja ilman nenänäytettä
   • täydellinen vierailu N7

   Seulontakäynti

   Menettely

   • Ilmoitettu suostumuslomakkeen allekirjoittaminen (versio 2.1. alkututkimukseen lyhyellä protokollalla, versio 1.8 (päivitetty laajennusta varten) päätutkimukselle)
   • Seulontanumeron jako
   • Väestötiedot
   • Allergiahistoria
   • Sisään- ja poissulkemiskriteerien arviointi
   • Raskaustesti naisille, jos tarvitaan SPT
   • Lääketieteellinen historia
   • Samanaikainen lääkitys
   • Anterior rhinoscopy
   • Standardi SPT kaupallisella uutteella: pähkinä, tuhka, ruohoseos, tuoksuhe, mugwort, D. pteronyssinus, D. farina, kissan ja koiran hilse, alternaria, cladosporium, histamiini ja negatiivinen kontrolli
   • Titrattu ihopistokoe kaupallisella koivun siitepölyuutteella
   • Verinäytteenotto (enintään 60 ml heparinisoitua verta ja seerumia) - Osa verinäytteestä lähetetään suoraan laboratorioon basofiilien aktivaation, kokonais-IgE:n ja relevanttien allergeenien spesifisen IgE:n analysoimiseksi. Muusta verestä valmistetaan ja säilytetään -80 °C:ssa RNA ja seerumi erotetaan ja säilytetään -20 °C:ssa.
   • nenän näytteenotto (nenähuuhtelu, limakalvon kyrettinäytteenotto ja nenäeritteen näytteenotto)

   Käy osoitteessa N0

   Ajoitusvaatimukset: Vierailu N0 on ajoitettu 2 viikkoa ja 4 päivää ennen vierailua N1. Tämä koskee vain potilaita, jotka seulottiin yli 3 viikkoa ennen N1-käyntiä

   Toimenpide:

   • Verinäytteenotto
   • Nenänäytteiden otto (huuhtelu, limakalvon kyrettinäytteenotto ja nenäeritteen näytteenotto)
   • Titrattu SPT
   • PNIF
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Vieraile osoitteessa N1

   Toimenpide:

   • In- ja poissulkemiskriteerien uudelleenarviointi (allergeenispesifiset IgE-tulokset)
   • Satunnaistaminen: Koehenkilöille annetaan hoitonumero
   • Lähtötilanne Verinäytteenotto
   • Nenänäytteen otto lähtötilanteessa (huuhtelu, nenän limakalvonäytteenotto ja nenän eritenäytteenotto)
   • Perustason TNSS-pisteet
   • Haitallisen tapahtuman (AE) tallennus
   • Samanaikainen lääkitys
   • PNIF annetaan potilaille ja selitys/esittely siitä, miten se toimii. Potilaille annetaan paperipäiväkirja päivittäisten PNIF-arvojen kirjaamista varten (N1 - N5). Tätä meijeriä käytetään myös päivittäisten TNSS-pisteiden (N4-N5) tallentamiseen.
   • Raskaustesti
   • sisään. koivun siitepölyuutteen tai lumelääkkeen antaminen
   • Oireiden dokumentointi välittömästi provokaation jälkeen
   • Veri-, PNIF-, nenänäytteenotto (nenähuuhtelu, limakalvon kyrettinäytteenotto ja nenäeritteen näytteenotto) ja TNSS-pisteet, 20 min, 40 min, 1 h, 2 h, 4 h, 20-24 h koivun siitepölyuutteen annon jälkeen (20-24 h aikapiste suoritetaan vierailulla N2).
   • Nenänäytteenotto, PNIF- ja TNSS-pisteet 10 minuutin, 3 tunnin, 5 tunnin, 6 tunnin, 7 tunnin, 8 tunnin kuluttua koivun siitepölyuutteen antamisen jälkeen
   • Titrattu SPT
   • tarvittaessa pelastuslääkitys (atselastiini-nenäsumute, desloratadiini 5 mg)

   Vieraile osoitteessa N2

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Vierailu N2 on suunniteltu N1-käynnin jälkeisenä päivänä

   Toimenpide:

   • Veri-, PNIF-, nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvon kyrettinäytteenotto ja nenäeritteen näytteenotto) ja TNSS-pisteet (20-24 tunnin aikapiste koivun siitepölyuutteen antamisen jälkeen N1:ssä).
   • AE-tallennus
   • Samanaikainen lääkitys
   • sisään. koivun siitepölyuutteen tai lumelääkkeen antaminen, minkä jälkeen seurasi 2 tunnin tarkkailujakso
   • Oireiden dokumentointi välittömästi provokaation jälkeen
   • tarvittaessa pelastuslääkitys (atselastiini-nenäsumute, desloratadiini 5 mg)
   • Huomautus: ensimmäisillä 6 tutkimushenkilöllä ei oteta nenä- ja verinäytteitä

   Vieraile osoitteessa N3

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Vierailu N3 on suunniteltu N2-käynnin jälkeisenä päivänä

   Toimenpide:

   • Verinäytteet ennen provokaatiota
   • Nenänäytteiden otto ennen provokaatiota (huuhtelu, limakalvon kyrettinäytteenotto ja nenäeritteen näytteenotto)
   • TNSS-pisteet ennen provokaatiota
   • Titrattu SPT
   • Haitallisen tapahtuman (AE) tallennus
   • Samanaikainen lääkitys
   • sisään. koivun siitepölyuutteen tai lumelääkkeen antaminen
   • Oireiden dokumentointi välittömästi provokaation jälkeen
   • Veri-, PNIF-, nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvon kyrettinäytteenotto ja nenäeritteen näytteenotto) ja TNSS-pisteet 20 min, 40 min, 1 h, 2 h, 4 h, 20-24 h ja koivun siitepölyuutteen annon jälkeen (20-24 h aikapiste suoritetaan klo. käy N4).
   • Nenänäytteenotto, PNIF- ja TNSS-pisteet 10 minuutin, 3 tunnin, 5 tunnin, 6 tunnin, 7 tunnin, 8 tunnin kuluttua koivun siitepölyuutteen antamisen jälkeen
   • Tarvittaessa pelastuslääkitys (atselastiininenäsumute, desloratadiini 5 mg)
   • Huomautus: ensimmäisillä 6 tutkimushenkilöllä ei oteta nenä- ja verinäytteitä

   Vieraile osoitteessa N4

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Vierailu N4 on suunniteltu N3-käynnin jälkeisenä päivänä

   Toimenpide:

   • Veri-, PNIF-, nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvonäytteiden otto ja nenäeritteen näytteenotto) ja TNSS-pisteet 20–24 tunnin kuluttua koivun siitepölyuutteen antamisesta.

   Vieraile osoitteessa N5

   Vierailu N5 on suunniteltu 14 ± 4 päivää vierailun N4 jälkeen:

   Toimenpide:

   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • PNIF
   • Titrattu SPT
   • TNSS-pisteet
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten
   • Paperipäiväkirjan kokoelma Visit N1 - N5 välillä

   Vieraile osoitteessa N6

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Käynti N6 on ajoitettu 14 ± 4 päivää vierailun N5 jälkeen

   Toimenpide:

   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • PNIF
   • Titrattu SPT
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Vieraile osoitteessa N7

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Vierailu N7 on ajoitettu 14 ± 4 päivää vierailun N6 jälkeen

   Toimenpide:

   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • PNIF
   • Titrattu SPT
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Vieraile osoitteessa N8

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Vierailu N8 on ajoitettu 14 ± 4 päivää vierailun N7 jälkeen

   Toimenpide:

   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • PNIF
   • Titrattu SPT
   • pisteet
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Vieraile osoitteessa N9

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Vierailu N9 on ajoitettu 14 ± 4 päivää vierailun N8 jälkeen

   Toimenpide:

   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • PNIF
   • Titrattu SPT
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Vieraile osoitteessa N10

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Vierailu N9 on ajoitettu 14 ± 4 päivää vierailun N9 jälkeen

   Toimenpide:

   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • PNIF
   • Titrattu SPT
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Käynti N11 - Nenän provosointikomponentin viimeinen käynti

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Käynti N11 on ajoitettu 28 ± 4 päivää käynnin N10 jälkeen

   Toimenpide:

   • Veri immunologisia parametreja ja nenänäytteenottoa varten (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • PNIF
   • Titrattu SPT
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Vierailu S1 (laajennus – MUW:n eettisen toimikunnan hyväksymä 11. helmikuuta 2019)

   Ajoitusvaatimukset: Vierailu S1 on ajoitettu 4 viikkoa ennen ennustettua koivukauden alkua (+/- 7 päivää)

   Toimenpide:

   • Paperinen siitepöly- ja PNIF-päiväkirja selitettiin potilaille ja pyydettiin täyttämään päivittäin koivukauden aikana
   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • Titrattu SPT
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Käy osoitteessa S2

   Ajoitusvaatimukset: Vierailu S2 on suunniteltu 4 viikkoa koivukauden päättymisen jälkeen (+/- 7 päivää)

   Toimenpide:

   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • Keräyspaperipäiväkirja
   • Havaittu PNIF
   • Titrattu SPT
   • TNSS-pisteet vierailulla
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Käy osoitteessa S3

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Vierailu S3 on suunniteltu 4 viikkoa käynnin S2 jälkeen - (+/- 7 päivää)

   Toimenpide:

   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • Havaittu PNIF
   • Titrattu SPT
   • TNSS-pisteet vierailulla
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten

   Vieraile S4:ssä ja opintojen lopussa

   Ajankohtaa koskevat vaatimukset:

   Käynti S4 on suunniteltu 1 vuosi koko tutkimuksen alkamisen jälkeen (1 vuosi käynnin N0 jälkeen) +/- 7 päivää

   Toimenpide:

   • Veri- ja nenänäytteenotto (huuhtelu, limakalvokyretti ja nenäeritteen näytteenotto)
   • Havaittu PNIF
   • Titrattu SPT
   • TNSS-pisteet vierailulla
   • AE-tallennus
   • Raskaustesti naisille, jos viimeisin testi oli yli kuukausi sitten
   • Opiskelun loppu

   Kuvaukset tutkimusmenetelmistä

   Potilaiden sairaushistoria, demografiset tiedot, samanaikainen lääkitys Potilailta kysytään heidän sairaushistoriansa, mukaan lukien demografiset tiedot ja samanaikainen lääkitys, allergiset oireet, mukaan lukien voimakkuus ja kesto, sekä heidän allergisen lääkityshistoriansa.

   Allergiahistoria ja TNSS-pisteet

   Potilaita pyydetään aivastelua, nuhaa, nenän kutinaa, nenän tukkoisuutta ja unen laatua sekä arvioimaan jokainen oire jokaisella käynnillä ja pitämään kirjaa kotona. He käyttävät seuraavaa oirepisteytysmenetelmää: 0 = poissa; 1 = lievä - läsnä, mutta helposti siedetty; 2 = kohtalainen - läsnä, oireet ovat häiritseviä, mutta eivät häiritse jokapäiväistä elämää; 3 = vakava – oiretta on vaikea sietää ja se häiritsee jokapäiväistä elämää (24). Tämän lisäksi lomakkeelle tulee visuaalinen analoginen asteikko sairauden kokonaistaakasta.

   Anterior rhinoscopy

   Anterior-rinoskopia tehdään kerran seulontakäynnin aikana anatomisten varianssien (esim. väliseinän poikkeama) tai patologisia muutoksia (esim. nenäpolyypit). Se suoritetaan käyttämällä tähystystä potilaan istuessa pää hieman taaksepäin.

   Peak Inspiratory Nenän virtausmittari (PNIF)

   PNIF:n siirrettävyys ja helppous tarjoavat ainutlaatuisen mahdollisuuden saada objektiivisia mittauksia potilaiden ollessa kotona. Se on myös hiljattain validoitu tutkimusvälineeksi nenän allergeenialtistuksen aikana.

   Toimenpide:

   Vierailulla 1 potilaat koulutetaan käyttämään PNIF-laitetta (In-check, Inspiratory Flow meter) ja he saavat sellaisen kotiin vietäväksi N5 asti. PNIF käyttää halkaisijaltaan muuttuvaa putkea, joka on kalibroitu suoraan litroina minuutissa, sekä matalan inertian ilmaisinrengasta. Renkaan asento sisäänhengitysliikkeen jälkeen osoittaa saavutetun maksimivirtauksen. Laite toimii, kun potilas hengittää sisään suun tai nenän kautta, jolloin ilma imeytyy mittarin läpi ja osoitin liikkuu asteikolla osoittamaan sisäänhengityksen nopeutta. Saavutettu virtausnopeus voidaan havaita tarkistamalla kursorin sijainti kalibroitua asteikkoa vasten.

   PNIF tutkimuksen suorittamisessa:

   PNIF annetaan tutkimuksen osallistujille kotiin vietäväksi, jotta he voivat pitää päivittäin tai viikoittain (tutkimuksen vaiheesta riippuen) meijerin nenän kautta. Heitä pyydetään myös tuomaan ne kaikille opintokäynneille, jotta havaitut PNIF-mittaukset voidaan tehdä.

   Ihonpistokoe

   4.5.1 Toimenpide: Allergeenit asetetaan kyynärvarren dermiin pistämällä ihoa varovasti pisaran (20 ul) läpi allergeenia sisältävää liuosta steriilillä lansetilla siten, että kunkin yksittäisen levityskohdan välissä on vähintään 2 cm. Negatiivisena kontrollina käytetään 0,9 % natriumkloridiliuosta ja positiivisena kontrollina histamiinia. Aiemmin herkistyneillä henkilöillä esiintyy kutiavaa turvotusta ja ihon punoitusta (halvaus- ja leikkausreaktio) 15 minuutin kuluessa, kun ne altistetaan vastaavalle allergeenille. 20 minuutin kuluttua allergeeniliuokset pyyhitään pois ja vehnäten reunat piirretään kuulakärkikynällä. Läpinäkyvä teippi liimataan iholle, jotta renkaan ääriviivat siirretään levyjen teippiin. Pyörien pinta-ala lasketaan digitaalisella planimetrialla. Sisällyttämisen kannalta positiivisina reaktioina pidetään halkaisijaltaan vähintään 3 mm:n vanhoja.

   Testiratkaisut:

   Seulontakäynnillä käytetään kaupallisesti saatavilla olevaa koivun siitepölyuutetta sekä paneeli puiden ja ruohojen siitepölyä, rikkaruohoja ja monivuotisia allergeeneja (Allergopharma, Wien, Itävalta) ja varastoidaan valmistajan ohjeiden mukaisesti. Kontrollina käytetään steriiliä 0,9 % NaCl-liuosta (negatiivinen kontrolli) ja histamiinia (positiivinen kontrolli, Allergopharma, Wien, Itävalta). Ne säilytetään valmistajan ohjeiden mukaisesti.

   SPT tutkimuksen suorittamisessa:

   Seulontakäynti:

   Tavallinen ihopistokoe kaupallisella koivun siitepölyuutteella sekä paneeli puiden ja ruohojen siitepölyä, rikkaruohoja ja monivuotisia allergeeneja (kaikki Allergopharma, Wien, Itävalta), joita käytetään rutiininomaisessa diagnostiikassa ENT-osaston allergiaklinikalla. potilaan herkistymisprofiili seulontakäynnillä.

   Seulonta ja käynnit N0, N5 - N11, S1-S4 Titrattu ihopistokoe koivuuutteelle suoritetaan kasvavilla laimennoksilla (laimennoksia korotetaan kertoimella 3 aina 1:60 000 asti (= 11 laimennusvaihetta) pienin pitoisuus, joka saa aikaan ihoreaktion. Ihotestit kaikille laimennoksille tehdään neljänä kappaleena. Kaupallinen positiivinen kontrolliliuos (histamiini) ja negatiivinen kontrolli tehdään kahtena kappaleena.

   Turvallisuustoimenpiteet Turvallisuussyistä potilaita seurataan 30 minuutin ajan testin jälkeen. Kaikki tutkimukset tehdään ENT-osaston poliklinikalla, jossa on saatavilla täydet päivystyslaitteet.

   Verinäytteenotto ja immunologisten parametrien mittaus

   Verinäytteet otetaan seulontakäynnillä ja kaikilla tutkimuskäynneillä pistoksena kyynärpäälaskimosta ennen ihotestiä. Enintään 60 ml käyntiä kohden otetaan joko heparinisoituna (esim. basofiiliherkkyysmäärityksiin) tai seerumin valmistamiseksi (esim. kokonais- ja allergeenispesifisten immunoglobuliinitasojen arvioimiseksi tai RBL-määritys). Seerumipullot käsitellään ja seerumia säilytetään -20 °C:ssa. Seulontakäynnin verinäytteiden allergeenispesifinen IgE mitataan CAP-FEIA:lla potilaiden allergeenispesifisen RAST-luokan arvioimiseksi. Kokonais-, vapaa- ja allergeenispesifisen seerumin IgE:n, IgG:n, IgA:n ja IgM:n mittaus suoritetaan joko CAP-FEIA:lla, microarray-mittauksella tai ELISA:lla. Mittaus suoritetaan tutkimuksen lopussa kaikista kerätyistä seeruminäytteistä määritysten välisen vaihtelun minimoimiseksi. Basofiilien vasteet allergeenille, fMLP:lle ja anti-IgE:lle mitataan jokaisella käynnillä. Lyhyesti sanottuna basofiilit altistetaan erilaisille anti-IgE-, fMLP- tai rekombinanttiallergeenipitoisuuksille 15 minuutin ajan ja sitten tutkitaan CD 63:n ja CD203c:n ilmentymisen suhteen virtaussytometrian avulla. Vaihtoehtoisesti histamiinin vapautuminen määritetään kaupallisesti saatavien histamiinin vapautumispakkausten avulla.

   Raskaustesti

   Naispotilailla raskaus suljetaan pois tavallisella virtsaraskaustestillä. Testi tehdään ennen ensimmäistä ihopistotestiä seulontakäynnillä ja sen jälkeen kerran kuukaudessa.

   Nenänäytekokoelma

   Nenänäytteenotto suoritetaan kaikilla käynneillä. Jokaisella käynnillä näytteet otetaan käyttämällä nasosorptiota FXi/PU (sisältää synteettisen absorptiomatriisin (SAM)) tai 10 cm pitkää muovikyrettiä (molemmat laitteet Hunt Developmentsilta, UK)

   Nasosorptio FXi/PU:lla (Hunt Developments, UK):

   Visualisoinnin aikana laite työnnetään nenäonteloon ja sijoitetaan sivuseinää pitkin alempaa turbinaattia vasten. Potilaan etusormella painetaan ala- ja lateraalisia nenärustoja, jotta laite pysyy paikallaan. 1 minuutin kuluttua laitteet poistetaan ja neste uutetaan sentrifugoimalla. Supernatantti jäädytetään -70 °C:ssa, kunnes tehdään lisäanalyysejä allergeenispesifisten ja kokonais-Ig-tasojen, välittäjäaineiden ja sytokiinien esiintymisen varalta.

   Limakalvon mRNA-näytteenotto Käytetään 10 cm:n nenäkyrettiä. Suorassa visualisoinnissa kyretti saatetaan makaamaan alemman turbinaatin keski-alaosaa vasten. Kyretti painetaan limakalvon pintaa vasten siirrettynä ulospäin 2-3 kertaa. Tämä liike toistetaan 2-3 kertaa hyvän näytteenoton varmistamiseksi. Tämän kyretin ja tekniikan ei ole osoitettu aiheuttavan merkittävää epämukavuutta potilaille, joten sen etuna on, ettei paikallispuudutusta tarvita. Keräyksen jälkeen Solut hajotetaan Qiagen RLT -puskurissa ja säilytetään -70 °C:ssa myöhempää mRNA-analyysiä varten.

   4.9 Intranasaalinen haaste

   Koivun siitepölyuute (Allergopharma, Wien, Itävalta) laimennetaan juuri steriiliin 0,9 % natriumkloridiliuokseen ja annostellaan annospumpulla. Allergeeni annetaan mittapumpulla, joka antaa 15 μl imua kohti molempiin sieraimiin vierailulla N1, N2, N3. Jos potilaalla on nenä- tai silmäoireita altistuksen jälkeen, hänelle annetaan atselastiini-nenäsumutetta tai 5 mg desloratadiinia.

   Satunnaistusmenettely

   Päätutkimuksen N1-käynnillä potilaat satunnaistetaan toiseen kahdesta ryhmästä (koivun siitepölyuute tai lumelääke). Tutkimuskohteet satunnaistetaan (suhde 2:1 provokaatiolle vs. kontrollille) käyttämällä online-satunnaistusohjelmaa "randomizer" (www.meduniwien.ac.at/randomizer), jota ylläpidetään Medical Informatics, Statistics and Documentation at Medical Institutessa. Grazin yliopisto, Graz, Itävalta. Suhde 2:1 on valittu, koska Ig-mittausten ja johdettujen määrien varianssin odotetaan olevan suurempi provokaatioryhmässä odotettavissa olevien suurempien kokonais-Ig-tasojen vuoksi. Katso myös otoskokoa koskevat näkökohdat myöhemmin tässä asiakirjassa.

   Satunnaistamisen suorittaa henkilö, joka ei ole mukana tutkimuksessa ja jolla ei ole yhteyttä potilaisiin, jotta voidaan varmistaa, että tutkimus on kaksoissokkoutettu.

   Tutkimustuotteet ja tutkimuslääkkeet

   Koivun siitepölyuute:

   Koivun siitepölyuutetta (Allergopharma, Wien, Itävalta) käytetään intranasaaliseen altistukseen. Koivun siitepölyuute saapuu kylmäkuivattuna ja liuotetaan steriiliin 0,9 % natriumkloridiin. Bet v 1:n pitoisuus uutteessa määritetään immunoblottauksella käyttäen Bet v 1:lle spesifisiä vasta-ainekoettimia. Lopuksi uute laimennetaan siten, että Bet v 1:n lopullinen pitoisuus on 50 μg/ml, kuten aiemmin on määritetty. on osoitettu aiheuttavan muutoksia spesifisissä IgE-tasoissa nenäaltistuksen yhteydessä.

   Ohjausratkaisut:

   Kontrolliliuokset sisältävät 0,9 % natriumkloridia negatiivisena kontrollina ihopistotestissä ja lumelääkkeenä intranasaalista altistusta varten. Positiivisena kontrollina ihopistokokeessa käytetään histamiinia (Allergopharma, Wien, Itävalta). Ne säilytetään valmistajan ohjeiden mukaisesti.

   Samanaikainen lääkitys

   Yleistä:

   Kaikki lisälääkkeet, joita koehenkilöt ottavat tutkimukseen tullessa tai milloin tahansa tutkimuksen aikana, katsotaan samanaikaisiksi lääkkeiksi, ja ne dokumentoidaan lähdetietotiedostoon. Samanaikaiset lääkkeet tulee pitää mahdollisimman vähäisinä tutkimuksen aikana, mutta tarvittaessa niitä voidaan antaa, jos ne eivät häiritse tutkimusprotokollaa.

   Pelastuslääke:

   Vaikka anafylaktiset tapahtumat ovat erittäin epätodennäköisiä tässä tutkimuksessa, ne on aina pidettävä mahdollisina. Siksi täydellinen hätäpakkaus on heti saatavilla siltä varalta, että SPT:ssä tai nenäaltistuksessa ilmenee anafylaktisia reaktioita. Lisäksi jos potilas kärsii nenä- ja silmäoireista intranasaalisen altistuksen jälkeen, hänelle annetaan 5 mg atselastiini-nenäsumutetta ja/tai desloratadiinia oireiden lievittämiseksi.

   Kielletyt samanaikainen lääkitys:

   Koehenkilöiden on pysyttävä poissa tutkimusmenetelmiä häiritsevistä lääkkeistä tutkimuksen ajan. Seuraavat samanaikaiset hoidot eivät ole sallittuja tämän tutkimuksen aikana:

   • Systeemiset tai paikalliset kortikosteroidit
   • Muut immunosuppressiiviset lääkkeet
   • Antihistamiinit tai dinatriumkromoglikaatti 3 päivää ennen käyntiä
   • Systeemiset tai intranasaaliset adrenergiset lääkkeet
   • Psykofarmakologiset lääkkeet
   • ACE:n estäjät tai beetasalpaajat

   Vastoinkäymiset

   Haittatapahtumalla tarkoitetaan mitä tahansa tapahtumaa kliinisen tutkimuksen aikana, mukaan lukien väliaikainen sairaus tai tapaturma, joka heikentää tutkittavan hyvinvointia; se voi myös olla epänormaalin laboratorioarvon muodossa. Termi haittatapahtuma ei tarkoita syy-yhteyttä tutkimushoitoon.

   Kaikkia koehenkilöitä, joilla esiintyy haittavaikutuksia – riippumatta siitä katsotaanko ne liittyvän tutkimushoidon käyttöön tai ei – seurataan, kunnes oireet häviävät ja kaikki epänormaalit laboratorioarvot ovat palanneet lähtötasolle tai kunnes havaituille muutoksille on tyydyttävä selitys tai kuolemaan asti. , jolloin pätevältä patologilta toimitetaan täydellinen patologiaraportti. Kaikki havainnot on raportoitava tapaustietolomakkeen "haittatapahtuma"-sivulla.

   Kaikki haittatapahtumat raportoidaan ja dokumentoidaan alla kuvatulla tavalla. Haittatapahtumat on jaettu luokkiin "vakava" ja "ei-vakava". Tämä määrittää menettelyn, jota on käytettävä haittatapahtuman raportoinnissa/dokumentoinnissa.

   Vakavien ja ei-vakavien haittatapahtumien määritelmä

   Vakava haittatapahtuma on:

   • Mikä tahansa kohtalokas tai hengenvaarallinen tapahtuma
   • Mikä tahansa tapahtuma, joka poistetaan pysyvästi käytöstä
   • Mikä tahansa tapahtuma, joka vaatii tai pidentää sairaalahoitoa
   • Mikä tahansa tapahtuma, johon liittyy syöpä, synnynnäinen poikkeavuus tai joka johtuu yliannostuksesta (määrättyä annostusta suuremman annoksen käyttö).

   Haittatapahtumat, jotka eivät kuulu näihin luokkiin, määritellään ei-vakaviksi.

   AE:n vakavuuden arviointi

   Riippumatta siitä, luokitellaanko haittatapahtuma vakavaksi vai ei-vakavaksi (katso edellä), sen vakavuus on arvioitava lieväksi, kohtalaiseksi tai vakavaksi pelkän lääketieteellisten kriteerien mukaan:

   Lievä = ei häiritse rutiinitoimintoja, hyväksyttävä Keskivaikea = häiritsee rutiinitoimintoja Vaikea = mahdoton suorittaa rutiinitoimintoja, lääkäri ei hyväksy sitä, vaatii hoitoa, vaatii tutkimuksen keskeyttämisen tai sillä on jäännösvaikutus.

   On huomattava, että vakavan haittatapahtuman ei tarvitse olla luonteeltaan vakava. Vakavuudesta riippumatta kaikki vakavat haittatapahtumat on raportoitava alla kuvatulla tavalla.

   Haittavaikutusten raportointi/dokumentointi

   Haittatapahtumat kerätään spontaanilla raportoinnilla.

   Vakavien haittatapahtumien raportointi/dokumentointi

   Kaikki tämän tutkimuksen aikana ilmenevät vakavat haittatapahtumat riippumatta siitä, katsotaanko niiden liittyvän tutkimuslääkitykseen tai ei, on dokumentoitava tapaustietolomakkeen "haittatapahtuma"-sivulla.

   On laadittava seurantaraportti, joka sisältää kaikki vakavasta tapahtumasta saadut uudet tiedot, ja se kerätään.

   Tutkija toimittaa pyynnöstä kopiot kaikista näistä raporteista eettiselle toimikunnalle. Tarvittaessa tutkijat ilmoittavat asiasta viranomaisille.

   Ei-vakavien haittatapahtumien raportointi/dokumentointi

   Nämä on dokumentoitava tapaustietolomakkeen "Haitallinen tapahtuma" -sivulla.

   Tilastollinen analyysi

   Koska tämä on pilottitutkimus, tehtyä analyysiä pidetään tutkivana ja hypoteesia luovana.

   Potilaiden ominaisuudet ja tulosmuuttujat kuvataan laskemalla maksimi-, minimi-, mediaani-, keski- ja standardipoikkeama metrisille muuttujille sekä absoluuttiset ja suhteelliset frekvenssit kategorisille muuttujille.

   IgE-tasojen ja muiden tulosmuuttujien aikaratojen analysoimiseksi lasketaan kuvaavat tilastot sekä keskiarvon 95 %:n luottamusvälit kullekin aikapisteelle ja jokaiselle hoitoryhmälle erikseen. Potilaiden välisten heterogeenisten lähtötasojen huomioon ottamiseksi kunkin potilaan havaitut tulokset standardoidaan näiden analyysien vastaavilla lähtötasoarvoilla. Lisäksi keskimääräiset erot ryhmien välillä ja 95 %:n luottamusvälien mukaisesti lasketaan kullekin aikapisteelle. Graafista kuvaa varten piirretään kunkin potilaan yksittäiset liikeradat.

   Ihopistokokeessa havaitut tiedot koostuvat sarjasta allergeeniannoksia ja niistä saatuja pinta-alan mittauksia. Perustuen kahdeksalta potilaalta edellisessä tutkimuksessa saatuihin alustaviin tietoihin, eksponentiaalisen mallin tyyppiä Area = A*(1-exp(-λ Dose)) havaittiin kuvaavan sopivasti ihopistokokeessa havaittua annos-vaste-suhdetta. Malli sopii jokaiselle aikapisteelle kussakin ryhmässä käyttämällä epälineaarista pienimmän neliösumman algoritmia. Näistä malleista raportoidaan vastenopeus λ, tasannealue A ja 50 %:n tehokas annos yhdessä 95 %:n luottamusvälien kanssa.

   Jos arvoja puuttuu, kaikki analyysit tehdään saatavilla olevan tapauksen perusteella.

   Ota huomioon näytekoko:

   Ottaen huomioon tutkimuksen tutkiva luonne, otoksen kokoa koskevat näkökohdat perustuvat parametriestimaattien tarkkuuteen. Ensisijainen tavoite on IgE-tasojen analysointi ajan mittaan. Aiemman tutkimuksen päivämäärät osoittavat anti-Bet v 1 IgE:n suhteellisen nousun neljä viikkoa nenän Bet v 1 -provokoinnin jälkeen keskimäärin 1,4-kertoimella ja noin 0,5:n keskihajonnan potilaiden välillä. Kontrolliantigeenilla keskimääräinen kerroin oli 1,04 ja standardipoikkeama noin 0,25. Maksimaalinen tilastollinen tarkkuus keskiarvojen vertailussa kahden ryhmän välillä saavutetaan, jos allokaatiosuhde on verrannollinen keskihajonnan suhteeseen, joka on 2:1 aikaisempien tietojen perusteella. Yllä olevien vaikutusten kokoa ja standardipoikkeamia koskevien oletusten mukaisesti 30:n (20:10) kokonaisotoskoko antaa 95 %:n luottamusvälit noin 0,2:n puolileveydellä kummassakin ryhmässä. Ryhmien välisen keskimääräisen eron 95 %:n luottamusvälin odotettu puolileveys on 0,28. (Vastaavalla kahden näytteen t-testillä olisi 80 %:n kyky havaita 0,4:n keskimääräinen ero 5 %:n merkitsevyystasolla). Ihopistokokeen analysointia varten alustavat tiedot viittaavat siihen, että otoskoolla 20 95 %:n luottamusvälien puolileveys 50 %:n tehokkaalle annokselle on noin 0,25 kertaa 50 %:n tehokas annos, mikä katsotaan. riittävän tarkkuuden tähän pilottitutkimukseen. Katso graafinen esitys liitteestä

   Eettiset ja juridiset näkökohdat

   Tutkimus tehdään paikallisten lakivaatimusten ja GCP:n mukaisesti. Se suoritetaan Helsingin julistuksen (1964) ohjeiden mukaisesti, mukaan lukien nykyiset tarkistukset.

   Tutkittavan tietoinen suostumus

   Ennen tutkimukseen hyväksymistä koehenkilön tulee olla suostumus osallistumiseen sen jälkeen, kun kliinisen tutkimuksen luonne, laajuus ja mahdolliset seuraukset on selvitetty hänelle ymmärrettävässä muodossa. Tutkittavan on annettava suostumus kirjallisesti. Tutkijan allekirjoitus vahvistaa tutkittavan suostumuksen. Potilas voi peruuttaa suostumuksensa, myös kommentoimatta, milloin tahansa ja ilman kielteisiä seurauksia hänen tulevaan sairaanhoitoonsa.

   Tutkimuksen kuittaus/hyväksyminen

   Ennen tutkimuksen aloittamista tutkimuspöytäkirja toimitetaan Wienin lääketieteellisen yliopiston ja Wienin yleissairaalan eettiselle komitealle (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Wien, Itävalta).

   Vakuutus

   Kaikki tähän tutkimukseen osallistuvat henkilöt on vakuutettu Zürich-vakuutusyhtiössä (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Wien, Puh. +43 50 1255 1255; vakuutusnumero: 07229622-2).

   Luottamuksellisuus

   Kaikkien koehenkilöiden nimet pidetään salassa tutkijatiedostoissa. Koehenkilöt tunnistetaan koko dokumentaatiossa ja arvioinnissa heille tutkimuksen aikana annetulla numerolla. Koehenkilöille kerrotaan, että kaikki tutkimustulokset tallennetaan ja niitä käsitellään luottamuksellisesti.

   Tutkimustulosten dokumentointi ja käyttö

   Tutkimustulosten dokumentointi

   Kaikki tutkimuksen aikana kerätyt tulokset kerätään lähdetietotiedostoon ja siirretään myöhemmin tapausraporttilomakkeille (CRF). Kaikki tapauslomakkeiden merkinnät tehdään selkeästi mustalla tai sinisellä musteella. Jos tapauspöytäkirjalomakkeen merkintöihin tehdään korjauksia, sanat tai numerot rengastetaan ja niiden läpi vedetään yksi veto. Oikea arvo syötetään vanhan merkinnän ja päivämäärän viereen ja korjaus aloitetaan. Virheellisiä merkintöjä ei saa peittää korjausnesteellä tai poistaa tai tehdä lukukelvottomaksi millään tavalla. Täytetyt CRF:t allekirjoittaa tutkija. CRF:t täytetään välittömästi loppukokeen jälkeen. Lääketieteellisiä tietoja, joihin CRF perustuu, säilytetään vähintään 15 vuotta.

   Tutkimustulosten käyttö

   Tutkijat julkaisevat tämän tutkimuksen tulokset tieteellisessä lehdessä ja esittelevät tieteellisissä kokouksissa. Käsikirjoitus jaetaan kaikille tutkijoille ennen lähettämistä.