Förändringar i adaptiva immunsvar och effektorcellsvar vid exponering för nasal allergen - en pilotstudie

Studiens rationella

Tidigare studier om dynamiken hos in vivo kliniska och immunologiska svar på nasalt allergen har fokuserat på särskilda parametrar men har inte tagit upp kinetiken för samspelet mellan de olika faktorerna (dvs. allergenspecifika IgE-nivåer, lokal IgE- och mediatorproduktion, basofilkänslighet, kutan känslighet). Utredarna föreslår därför en randomiserad dubbelblind placebokontrollerad studie där Utredarna utmanar patienter intranasalt med allergenextrakt och sedan noggrant övervakar både kliniska och immunologiska immunsvar under en period av 4 månader. Därefter kommer ytterligare 4 besök att ske före och efter björksäsongen.

Utredarna kommer att titta på immunsvaren i omedelbar och sen fas på björkpollenextrakt i näsan utanför pollensäsongen. Studiedeltagare kommer initialt att genomgå 3 på varandra följande dagar av näsallergenutmaning och sedan följas upp noga under en period av 1 år. För att bedöma det kliniska svaret på allergenexponering kommer utredarna att använda sig av hudpricktestet (SPT), total nasal symptom score (TNSS), nasal endoskopi och Peak Inspiratory Nasal Flow Meter (PNIF). För att bedöma immunologiska svar kommer prover inklusive blod, nässlemhinneprov och nässekret att tas.

Studera design

I denna singelcenter, randomiserade, placebokontrollerade, dubbelblinda studie kommer totalt 36 (6 för en förstudie) patienter att rekryteras till denna studie på frivillig basis och kommer att randomiseras för att få en nasal utmaning med någon av björkarna. pollenextrakt eller placebo. Randomisering kommer att stratifieras enligt Bet v 1-specifika IgE-nivåer för att möjliggöra lika fördelning i båda grupperna. 30 Studiedeltagare kommer att få näsprovokation utanför björkpollensäsongen med antingen björkpollenextrakt eller placebo under tre på varandra följande dagar och kommer därefter att följas upp regelbundet i upp till fyra månader.

Inledningsvis, före studien på 30 patienter, kommer 6 patienter med björkpollenallergiska att genomgå ett kort protokoll för att säkerställa att

1. Allergenkoncentrationen som används för nasal provokation är tillräcklig för att framkalla en ökning av IgE-antikroppar
2. Att titreringarna av hudpricktestet är tillräckliga

3. Att tidpunkten för att ta nasala sekret för bestämning av mediatorer är adekvat.

   Skulle resultaten från dessa 6 patienter avslöja att antingen koncentrationen av nasala allergen, titrering av hudtest eller tidpunkten för nässekret inte är tillräcklig, kommer en ändring att lämnas till den etiska kommittén.

   Det förkortade protokollet kommer att innehålla 5 besök:

   • komplett screeningbesök
   • komplett besök N1
   • besök N2 utan blodprov och utan näsprov
   • besök N3 utan blodprov och utan näsprov
   • komplett besök N7

   Visningsbesök

   Procedur

   • Undertecknande av formuläret för informerat samtycke (version 2.1. för initial studie med kort protokoll, version 1.8 (uppdaterad för förlängning) för huvudstudie)
   • Tilldelning av screeningnummer
   • Demografisk data
   • Historia av allergi
   • Bedömning av in- och uteslutningskriterier
   • Graviditetstest för kvinnor vid behov av SPT
   • Medicinsk historia
   • Samtidig medicinering
   • Främre rhinoskopi
   • Standard SPT med kommersiellt extrakt från: hassel, ask, gräsmix, ragweed, byngröt, D. pteronyssinus, D. farina, katt- och hundmjäll, alternaria, cladosporium, histamin och negativ kontroll
   • Titrerat hudpricktest med kommersiellt björkpollenextrakt
   • Blodprovstagning (max 60 ml hepariniserat blod och serum) - En del av blodprovet skickas direkt till laboratoriet för analys av basofilaktivering, totalt IgE och specifikt IgE för relevanta allergener. Från resten av blodet kommer RNA att beredas och förvaras vid -80°C och serum kommer att separeras och förvaras vid -20°C
   • näsprovtagning (nässköljning, slemhinnekyrettprovtagning och nässekretprovtagning)

   Besök N0

   Krav gällande tidpunkt: Besök N0 är schemalagt mellan 2 veckor och 4 dagar innan besök N1. Detta är endast för patienter som screenades mer än 3 veckor före besök N1

   Procedur:

   • Blodprovtagning
   • Insamling av näsprov (sköljning, provtagning av slemhinnekyrett och provtagning av nässekret)
   • Titrerad SPT
   • PNIF
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök N1

   Procedur:

   • Omvärdering av in- och uteslutningskriterier (allergenspecifika IgE-resultat)
   • Randomisering: Försökspersonerna kommer att tilldelas ett behandlingsnummer
   • Baslinje blodprovstagning
   • Insamling av näsprov vid baslinje (sköljning, provtagning av nässlemhinnor och provtagning av nässekret)
   • Baslinje TNSS-poäng
   • Registrering av biverkningar (AE).
   • Samtidig medicinering
   • PNIF ges till patienter och förklaring/demonstration av hur det fungerar. Patienterna kommer att få en pappersdagbok för att hålla reda på dagliga PNIF-värden (från N1 till N5). Detta mejeri kommer också att användas för att registrera dagliga TNSS-poäng (N4-N5).
   • Graviditetstest
   • i. administrering av björkpollenextrakt eller placebo
   • Dokumentation av symtom direkt efter provokation
   • Blod, PNIF, näsprovtagning (nässköljning, provtagning av slemhinnekyrett och provtagning av nässekret) och TNSS-poäng, 20 min, 40 min, 1 timme, 2 timmar, 4 timmar, 20-24 timmar efter administrering av björkpollenextrakt (20-24 timmars tidpunkt kommer att utföras vid besök N2).
   • Näsprovtagning, PNIF och TNSS poäng vid 10 minuter, 3 timmar, 5 timmar, 6 timmar, 7 timmar, 8 timmar efter administrering av björkpollenextrakt
   • Titrerad SPT
   • administrering av räddningsmedicin vid behov (azelastin nässpray, desloratadin 5 mg)

   Besök N2

   Krav på timing:

   Besök N2 är planerat dagen efter besök N1

   Procedur:

   • Blod, PNIF, näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrettprovtagning och nässekretprovtagning) och TNSS-poäng (20-24 timmars tidpunkt efter administrering av björkpollenextrakt i N1).
   • AE-inspelning
   • Samtidig medicinering
   • i. administrering av björkpollenextrakt eller placebo följt av en observationsperiod på 2 timmar
   • Dokumentation av symtom direkt efter provokation
   • administrering av räddningsmedicin vid behov (azelastin nässpray, desloratadin 5 mg)
   • Obs: i de inledande 6 försökspersonerna kommer näs- och blodprov inte att utföras

   Besök N3

   Krav på timing:

   Besök N3 är planerat dagen efter besök N2

   Procedur:

   • Blodprovstagning före provokation
   • Insamling av näsprov före provokation (sköljning, provtagning av slemhinnekyrett och provtagning av nässekret)
   • TNSS-poäng före provokation
   • Titrerad SPT
   • Registrering av biverkningar (AE).
   • Samtidig medicinering
   • i. administrering av björkpollenextrakt eller placebo
   • Dokumentation av symtom direkt efter provokation
   • Blod, PNIF, näsprovtagning (sköljning, provtagning av slemhinnekyrett och provtagning av nässekret) och TNSS-poäng 20 min, 40 min, 1 timme, 2 timmar, 4 timmar, 20-24 timmar och efter administrering av björkpollenextrakt (20-24 timmars tidpunkt kommer att utföras kl. besök N4).
   • Näsprovtagning, PNIF och TNSS poäng vid 10 minuter, 3 timmar, 5 timmar, 6 timmar, 7 timmar, 8 timmar efter administrering av björkpollenextrakt
   • Administrering av räddningsmedicin vid behov (azelastinnässpray, desloratadin 5 mg)
   • Obs: i de inledande 6 försökspersonerna kommer näs- och blodprov inte att utföras

   Besök N4

   Krav på timing:

   Besök N4 är planerat dagen efter besök N3

   Procedur:

   • Blod, PNIF, näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrettprovtagning och nässekretprov) och TNSS-poäng 20-24 timmar efter administrering av björkpollenextrakt.

   Besök N5

   Besök N5 är planerat 14 ±4 dagar efter besök N4:

   Procedur:

   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • PNIF
   • Titrerad SPT
   • TNSS-poäng
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan
   • Samling av pappersdagbok från Visit N1 till N5

   Besök N6

   Krav på timing:

   Besök N6 är planerat 14 ±4 dagar efter besök N5

   Procedur:

   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • PNIF
   • Titrerad SPT
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök N7

   Krav på timing:

   Besök N7 är planerat 14 ±4 dagar efter besök N6

   Procedur:

   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • PNIF
   • Titrerad SPT
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök N8

   Krav på timing:

   Besök N8 är planerat 14 ±4 dagar efter besök N7

   Procedur:

   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • PNIF
   • Titrerad SPT
   • Göra
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök N9

   Krav på timing:

   Besök N9 är planerat 14 ±4 dagar efter besök N8

   Procedur:

   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • PNIF
   • Titrerad SPT
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök N10

   Krav på timing:

   Besök N9 är planerat 14 ±4 dagar efter besök N9

   Procedur:

   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • PNIF
   • Titrerad SPT
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök N11 - Slutbesök av näsprovokationskomponent

   Krav på timing:

   Besök N11 är planerat 28 ±4 dagar efter besök N10

   Procedur:

   • Blod för immunologiska parametrar och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprovtagning)
   • PNIF
   • Titrerad SPT
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök S1 (förlängning - godkänd av MUWs etiska kommitté den 11 februari 2019)

   Krav gällande tidpunkt: Besök S1 är planerat 4 veckor före beräknad start på björksäsongen (+/- 7 dagar)

   Procedur:

   • Papperspollen och PNIF-dagbok förklarade för patienterna och bad att fylla i dagligen under björksäsongen
   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • Titrerad SPT
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök S2

   Krav gällande tidpunkt: Besök S2 är planerat 4 veckor efter björksäsongens slut (+/- 7 dagar)

   Procedur:

   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • Samlingspappersdagbok
   • Observerade PNIF
   • Titrerad SPT
   • TNSS-poäng vid besök
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök S3

   Krav på timing:

   Besök S3 är schemalagt 4 veckor efter besök S2 - (+/- 7 dagar)

   Procedur:

   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • Observerade PNIF
   • Titrerad SPT
   • TNSS-poäng vid besök
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan

   Besök S4 och Studieslut

   Krav på timing:

   Besök S4 är schemalagt 1 år efter starten av hela studien (1 år efter besök N0) +/- 7 dagar

   Procedur:

   • Blod- och näsprovtagning (sköljning, slemhinnekyrett och nässekretprov)
   • Observerade PNIF
   • Titrerad SPT
   • TNSS-poäng vid besök
   • AE-inspelning
   • Graviditetstest för kvinnor om det senaste testet var mer än en månad sedan
   • Slut på studien

   Beskrivningar av studieprocedurer

   Patienters medicinska historia, demografiska data, samtidig medicinering Patienterna kommer att tillfrågas om sin medicinska historia inklusive demografiska data och samtidig medicinering, deras allergiska symptom inklusive intensitet och varaktighet och deras allergiska medicinhistoria.

   Historik om allergi och TNSS-poäng

   Patienterna kommer att uppmanas för förekomst av nysningar, rinorré, näsklåda, nästäppa och sömnkvalitet och att gradera varje symptom vid varje besök och föra journal hemma. De kommer att använda följande symtompoängmetod: 0 = frånvarande; 1 = mild - närvarande men lätt tolererad; 2 = måttlig - närvarande, symtom är besvärande men stör inte dagliga aktiviteter; 3 = allvarligt - symptom är svårt att tolerera och stör dagliga aktiviteter (24). Utöver detta kommer det att finnas en visuell analog skala av total sjukdomsbörda på formuläret.

   Främre rhinoskopi

   Främre rhinoskopi kommer att utföras en gång under screeningbesöket för att utesluta anatomiska avvikelser (t. septumavvikelse) eller patologiska förändringar (t.ex. näspolyper). Det kommer att utföras med hjälp av ett spekulum med patienten sittande med huvudet något bakåt.

   Peak Inspiratory Nasal Flow Meter (PNIF)

   Bärbarheten och lättheten hos PNIF ger en unik möjlighet att få objektiva mätningar medan patienterna är hemma. Det har också nyligen validerats som ett studieverktyg under näsallergenutmaning.

   Procedur:

   Vid besöket kommer 1 patient att utbildas i hur man använder PNIF-enheten (In-check, Inspiratorisk flödesmätare) och kommer att få en att ta med sig hem till N5. PNIF använder ett rör med variabel diameter kalibrerat direkt i liter per minut tillsammans med en indikatorring för låg tröghet. Ringens position efter en inandningsmanöver indikerar det maximala flödet som uppnåtts. Enheten fungerar när en patient andas in genom munnen eller näsan, detta gör att luft dras genom mätaren och en markör rör sig längs skalan för att indikera inandningshastigheten. Den uppnådda flödeshastigheten kan noteras genom att kontrollera markörens position mot den kalibrerade skalan.

   PNIF i studieuppförande:

   PNIF kommer att ges till studiedeltagare att ta med hem så att de kan hålla ett dagligt eller veckovis mejeri (beroende på studiefasen) av deras nasala luftflöde. De kommer också att uppmanas att ta med dem till alla studiebesök så att observerade PNIF-mätningar kan tas.

   Hudstickstest

   4.5.1 Procedur: Allergener förs in i underarmens dermis genom att försiktigt sticka huden genom en droppe (20 ul) av en allergenhaltig lösning med en steril lansett med minst 2 cm mellan varje enskild appliceringspunkt. 0,9 % natriumkloridlösning kommer att användas som negativ och histamin som positiv kontroll. Hos tidigare sensibiliserade individer kommer kliande svullnad och en rodnad av huden (hår och fläckreaktion) att inträffa inom 15 minuter efter provokation med respektive allergen. Efter 20 minuter kommer allergenlösningar att torkas av och marginalerna på vallarna kommer att spåras med en kulspetspenna. Genomskinlig tejp kommer att fästas på huden för att överföra konturerna av valsen till tejpen för skivorna. Ytan på valen kommer att beräknas med digital planimetri. För inkludering kommer valar med en diameter på minst 3 mm att betraktas som positiva reaktioner.

   Testlösningar:

   Kommersiellt tillgängligt björkpollenextrakt och en panel av träd- och gräspollen, ogräs och perenna allergener (Allergopharma, Wien, Österrike) kommer att användas vid screeningbesöket och kommer att förvaras enligt tillverkarens instruktioner. Som kontroller kommer steril 0,9 % NaCl-lösning (negativ kontroll) och histamin (positiv kontroll, Allergopharma, Wien, Österrike) att användas. De kommer att förvaras enligt tillverkarens instruktioner.

   SPT i studieuppförande:

   Visningsbesök:

   Ett standardprov på huden med kommersiellt björkpollenextrakt och en panel av träd- och gräspollen, ogräs och perenna allergener (alla Allergopharma, Wien, Österrike) som används vid rutindiagnostik på ÖNH-avdelningens allergiklinik kommer att utföras för att bedöma patientens sensibiliseringsprofil vid screeningbesöket.

   Screening och besök N0, N5 - N11, S1-S4 Ett titrerat hudpricktest för björkextrakt kommer att utföras med ökande spädningar (utspädningarna kommer att ökas med en faktor 3 upp till 1:60 000 (=11 spädningssteg) för att fastställa den lägsta koncentrationen som framkallar ett hudsvar. Hudtest av alla spädningar kommer att göras i fyrdubbla exemplar. Kommersiell positiv kontrolllösning (histamin) och negativ kontroll kommer att göras i duplikat.

   Säkerhetsåtgärder Som en säkerhetsåtgärd kommer patienter att övervakas i 30 minuter efter testning. Alla utredningar kommer att göras i ÖNH-mottagningens poliklinik där full akututrustning finns tillgänglig.

   Blodprovtagning och mätning av immunologiska parametrar

   Blodprov kommer att tas vid screeningbesöket och vid alla studiebesök genom punktering av antecubitalvenen före hudtestning. Maximalt 60 ml per besök kommer att tas antingen hepariniserat (t.ex. för basofila känslighetsanalyser) eller för beredning av serum (t.ex. för bedömning av totala och allergenspecifika immunglobulinnivåer eller RBL-analys). Serumflaskor kommer att behandlas och serum kommer att förvaras vid -20°C. Allergenspecifik IgE i blodprover från screeningbesöket kommer att mätas av CAP-FEIA för att bedöma den allergenspecifika RAST-klassen hos patienterna. Mätning av totalt, fritt och allergenspecifikt serum IgE, IgG, IgA och IgM kommer att utföras antingen med CAP-FEIA, genom mikroarraymätning eller ELISA. Mätningen kommer att utföras i slutet av studien i alla insamlade serumprover för att minimera variationen mellan analysen. Mätning av basofila svar på allergen, fMLP och anti-IgE kommer att utföras vid varje besök. Kortfattat kommer basofiler att exponeras för olika koncentrationer av anti-IgE, fMLP eller rekombinanta allergener under 15 minuter och sedan undersökas för uttryck av CD 63 och CD203c med hjälp av flödescytometri. Alternativt kommer histaminfrisättning att bestämmas av kommersiellt tillgängliga histaminfrisättningskit.

   Graviditetstest

   Hos kvinnliga patienter kommer graviditet att uteslutas med ett standarduringraviditetstest. Testet kommer att utföras före det första hudpricktestet vid screeningbesöket och efteråt en gång i månaden.

   Samling av näsprover

   Nasala provtagningar kommer att utföras vid alla besök. För varje besök kommer prover att samlas in med hjälp av nasosorption FXi/PU (innehållande en syntetisk absorptiv matris (SAM)), eller en 10 cm lång plastkyrett (båda enheterna från Hunt Developments, Storbritannien)

   Nasosorption med FXi/PU (Hunt Developments, Storbritannien):

   Under visualisering kommer enheten att föras in i näshålan och placeras längs sidoväggen mot den nedre turbinatet. Patientens pekfinger kommer att användas för att trycka på de yttre aspekterna av larmet och sidonäsbrosket för att hålla enheten på plats. Efter 1 minut kommer enheterna att tas bort och vätskan extraheras genom centrifugering. Supernatanten kommer att frysas vid -70°C tills vidare analys för närvaron av allergenspecifika och totala Ig-nivåer, mediator- och cytokinnivåer.

   Slemhinne-mRNA-provtagning En 10 cm näskyrett kommer att användas. Under direkt visualisering kommer kyretten att bringas att ligga mot den mittre delen av den nedre turbinaten. Kyretten kommer att pressas mot slemhinneytan flyttas utåt 2-3 gånger. Denna rörelse kommer att upprepas 2-3 gånger för att säkerställa en bra provtagning. Denna kyrett och teknik har visat sig inte orsaka några betydande obehag för patienter och har därför fördelen av att det inte krävs någon lokalbedövning. Efter insamling kommer cellerna att lyseras i Qiagen RLT-buffert och lagras vid -70C för senare mRNA-analys.

   4.9 Intranasal utmaning

   Björkpollenextrakt (Allergopharma, Wien, Österrike) späds nyspädd i steril 0,9 % natriumkloridlösning och administreras med hjälp av en doserad pump. Allergenet kommer att administreras med en doserad pump som levererar 15 μl per bloss till båda näsborrarna vid besök N1, N2, N3. Om patienten lider av näs- eller ögonsymtom efter provokationen, kommer azelastin nässpray eller desloratadin 5 mg att tillhandahållas.

   Randomiseringsförfarande

   Vid besök N1 i huvudstudien kommer patienter att randomiseras till en av de två grupperna (björkpollenextrakt eller placebo). Studieämnen kommer att randomiseras (förhållande 2:1 för provokation kontra kontroll) med hjälp av online-randomiseringsprogrammet "randomizer" (www.meduniwien.ac.at/randomizer), som upprätthålls vid Institutet för medicinsk informatik, statistik och dokumentation vid Medical Universitetet i Graz, Graz, Österrike. Förhållandet 2:1 väljs eftersom variansen av Ig-mätningar och härledda kvantiteter förväntas vara större i provokationsgruppen på grund av förväntade större totala Ig-nivåer, se även provstorleksöverväganden längre fram i detta dokument.

   Randomiseringen kommer att utföras av en person som inte är involverad i studien och inte har någon kontakt med patienterna för att säkerställa att studien blir dubbelblindad.

   Utredningsprodukter och studiemedicin

   Björkpollenextrakt:

   Björkpollenextrakt (Allergopharma, Wien, Österrike) kommer att användas för intranasal utmaning. Björkpollenextrakt kommer att anlända frystorkat och kommer att lösas i steril 0,9 % natriumklorid. Innehållet av Bet v 1 i extraktet kommer att bestämmas genom immunblotting med antikroppssonder specifika för Bet v 1. Slutligen kommer extraktet att spädas ut så att den slutliga koncentrationen av Bet v 1 blir 50 μg/ml som denna koncentration tidigare har varit visat sig framkalla förändringar i specifika IgE-nivåer vid nasal utmaning.

   Kontrolllösningar:

   Kontrolllösningar kommer att innehålla natriumklorid 0,9 % som negativ kontroll för hudpricktest och som placebo för intranasal utmaning. Histamin (Allergopharma, Wien, Österrike) kommer att användas som en positiv kontroll för hudpricktestet. De kommer att förvaras enligt tillverkarens instruktioner.

   Samtidig medicinering

   Allmän:

   All ytterligare medicinering som tas av försökspersonerna vid inträde i studien eller när som helst under studien betraktas som samtidig medicinering och kommer att dokumenteras i källdatafilen. Samtidig medicinering bör hållas till ett minimum under studien, men om det anses nödvändigt kan det ges om det inte stör studieprotokollet.

   Räddningsmedicin:

   Även om anafylaktiska händelser är mycket osannolika i denna studie måste de alltid anses möjliga. Därför kommer ett komplett akutpaket att finnas tillgängligt omedelbart i händelse av anafylaktiska reaktioner vid SPT eller nasal utmaning. Om patienten lider av näs- och ögonsymtom efter den intranasala utmaningen kommer azelastin nässpray och/eller desloratadin 5 mg att ges för att lindra symptomen.

   Förbjuden samtidig medicinering:

   Försökspersonerna måste förbli utan mediciner som stör studieprocedurerna under hela studien. Följande samtidiga behandlingar är inte tillåtna under denna studie:

   • Systemiska eller topikala kortikosteroider
   • Andra immunsuppressiva läkemedel
   • Antihistaminer eller dinatriumkromoglykat 3 dagar före besök
   • Systemiska eller intranasala adrenerga läkemedel
   • Psykofarmakologiska läkemedel
   • ACE-hämmare eller betablockerare

   Biverkningar

   En oönskad händelse är varje händelse under en klinisk studie, inklusive interkurrent sjukdom eller olycka, som försämrar patientens välbefinnande; det kan också ta formen av ett onormalt laboratorievärde. Termen biverkning innebär inte ett orsakssamband med studiebehandlingen.

   Alla försökspersoner som upplever biverkningar - oavsett om de anses associerade med användningen av studiebehandlingen eller inte - kommer att övervakas tills symtomen avtar och eventuella onormala laboratorievärden har återgått till baslinjen, eller tills det finns en tillfredsställande förklaring för de observerade förändringarna, eller tills döden , i vilket fall en fullständig patologirapport från en kvalificerad patolog kommer att tillhandahållas. Alla fynd ska rapporteras på en "biverkningssida" i ärendeprotokollet.

   Alla biverkningar kommer att rapporteras och dokumenteras enligt beskrivningen nedan. Biverkningar delas in i kategorierna "allvarliga" och "icke allvarliga". Detta bestämmer vilket förfarande som ska användas för att rapportera/dokumentera den negativa händelsen.

   Definition av allvarliga och icke-allvarliga biverkningar

   En allvarlig biverkning är:

   • Varje händelse som är dödlig eller livshotande
   • Alla händelser som permanent inaktiveras
   • Varje händelse som kräver eller förlänger sjukhusvistelse
   • Varje händelse som involverar cancer, medfödd abnormitet eller uppstår som ett resultat av överdosering (tillämpning av mer än den föreskrivna dosen).

   Biverkningar som inte faller inom dessa kategorier definieras som icke allvarliga.

   Bedömning av svårighetsgraden av AE

   Oavsett klassificeringen av en biverkning som allvarlig eller icke-allvarlig (se ovan), måste dess svårighetsgrad bedömas som lindrig, måttlig eller allvarlig, enbart enligt medicinska kriterier:

   Mild = stör inte rutinaktiviteter, acceptabelt Måttlig = stör rutinaktiviteter Allvarlig = omöjlig att utföra rutinaktiviteter, anses vara oacceptabel av läkaren, kräver behandling, kräver avbrytande av studien eller har kvarvarande effekt.

   Det bör noteras att en allvarlig biverkning inte behöver vara allvarlig till sin natur. Oavsett svårighetsgrad måste alla allvarliga biverkningar rapporteras enligt nedan.

   Rapportering/dokumentation av biverkningar

   Biverkningar samlas in genom spontanrapportering.

   Rapportering/dokumentation av allvarliga biverkningar

   Alla allvarliga biverkningar som inträffar under denna studie, oavsett om de anses vara förknippade med studiemedicinen eller inte, måste dokumenteras på en "Biverkning"-sida i journalformuläret.

   En uppföljningsrapport inklusive all ny information som erhållits om den allvarliga händelsen ska upprättas och kommer att samlas in.

   Utredaren kommer på begäran att lämna in kopior av alla dessa rapporter till den etiska kommittén. Vid behov kommer utredarna att informera myndigheterna.

   Rapportering/dokumentation av icke allvarliga biverkningar

   Dessa ska dokumenteras på en sida "Biverkning" i ärendeprotokollet.

   Statistisk analys

   Eftersom detta är en pilotstudie anses den utförda analysen vara explorativ och hypotesgenererande.

   Patientegenskaper och utfallsvariabler kommer att beskrivas genom att beräkna maximi-, minimum-, median-, medel- och standardavvikelse för metriska variabler och absoluta och relativa frekvenser för kategoriska variabler.

   För att analysera tidsbanor för IgE-nivåer och andra utfallsvariabler kommer beskrivande statistik samt 95 % konfidensintervall för medelvärdet att beräknas för varje tidpunkt och varje behandlingsgrupp separat. För att ta hänsyn till heterogena baslinjenivåer mellan patienterna kommer de observerade resultaten för varje patient att standardiseras av respektive baslinjevärden för dessa analyser. Vidare kommer medelskillnader mellan grupper och enligt 95 % konfidensintervall att beräknas för varje tidpunkt. För grafisk illustration kommer de individuella banorna för varje patient att plottas.

   Data som observerades i hudpricktestet består av en serie allergendoser och de resulterande ytmätningarna. Baserat på preliminära data från åtta patienter i tidigare studie, visade sig en exponentiell modell av typen Area = A*(1-exp(-λ Dose) på ett lämpligt sätt beskriva dos-responssambandet som observerades i hudpricktestet. Modellen kommer att passa för varje tidpunkt i varje grupp med hjälp av en icke-linjär minsta kvadratalgoritm. Från dessa modeller kommer svarsfrekvensen λ, platåområdet A och den 50 % effektiva dosen att rapporteras tillsammans med 95 % konfidensintervall.

   Om det saknas värden kommer all analys att göras på ett tillgängligt fall.

   Överväganden om provstorlek:

   Med tanke på studiens explorativa karaktär är övervägandena av urvalsstorleken baserade på precisionen av parameteruppskattningar. Det primära målet är analys av IgE-nivåer över tid. Datum från en tidigare studie visar en relativ ökning av anti-Bet v 1 IgE fyra veckor efter nasal provokation med Bet v 1 med en medelfaktor på 1,4 och en standardavvikelse på cirka 0,5 mellan patienter. Med ett kontrollantigen var medelfaktorn 1,04 med en standardavvikelse på ungefär 0,25. Den maximala statistiska precisionen för en jämförelse av medelvärden mellan de två grupperna uppnås om allokeringsförhållandet är proportionellt mot förhållandet mellan standardavvikelser, vilket är 2:1 baserat på tidigare data. Under ovanstående antaganden om effektstorlekar och standardavvikelser kommer en total urvalsstorlek på 30 (20:10) att ge 95 % konfidensintervall med en halvbredd på cirka 0,2 i båda grupperna. Den förväntade halva bredden av ett 95 % konfidensintervall för medelskillnaden mellan grupperna är 0,28. (Ett motsvarande t-test med två sampel skulle ha en styrka på 80 % för att detektera en medelskillnad på 0,4 vid en 5 % signifikansnivå). För analysen av hudpricktestet tyder de preliminära data på att med en provstorlek på 20 kommer halvbredden på 95 % konfidensintervall för den 50 % effektiva dosen att vara ungefär 0,25 gånger den 50 % effektiva dosen, vilket anses vara som tillräcklig precision för denna pilotstudie. Se bilagan för grafisk representation

   Etiska och juridiska aspekter

   Studien kommer att genomföras i enlighet med lokala lagkrav och GCP. Den kommer att utföras i enlighet med riktlinjerna i Helsingforsdeklarationen (1964), inklusive aktuella revisioner.

   Subjektets informerade samtycke

   Före antagning till studien måste försökspersonen ha samtyckt till att delta efter att den kliniska studiens art, omfattning och eventuella konsekvenser har förklarats i en för honom/henne begriplig form. Försökspersonen måste ge skriftligt samtycke. Utredarens underskrift bekräftar försökspersonens samtycke. Patienten kan när som helst och utan negativa konsekvenser för hans framtida sjukvård återkalla samtycket, även utan att lämna synpunkter.

   Bekräftelse/godkännande av studien

   Innan studien startar kommer studieprotokollet att lämnas in till den etiska kommittén vid det medicinska universitetet i Wien och det allmänna sjukhuset i Wien (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Wien, Österrike).

   Försäkring

   Alla försökspersoner som deltar i denna studie kommer att vara försäkrade hos Zürich Insurance Company (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Wien, Tel. +43 50 1255 1255; försäkringsnummer: 07229622-2).

   Sekretess

   Alla försökspersoners namn kommer att hållas hemliga i utredarnas akter. Försökspersoner kommer att identifieras genom hela dokumentationen och utvärderingen av det antal som tilldelats dem under studien. Försökspersonerna kommer att få veta att alla studieresultat kommer att lagras och hanteras strikt konfidentiellt.

   Dokumentation och användning av studieresultat

   Dokumentation av studieresultat

   Alla resultat som samlas in under studien kommer att samlas i en källdatafil och kommer senare att överföras till fallrapportformulären (CRF). Alla anteckningar på ärendeformuläret kommer att göras läsligt med svart eller blått bläck. Om korrigeringar görs i anteckningar i ärendeprotokollet kommer orden eller siffrorna att ringmärkas och ett enda streck dras igenom dem. Rätt värde kommer att anges bredvid den gamla inmatningen och datumet och korrigeringen kommer att initialiseras. Felaktiga inmatningar får inte täckas med korrigeringsvätska eller raderas eller göras oläsliga på något sätt. De ifyllda CRF:erna kommer att undertecknas av utredaren. CRF kommer att slutföras omedelbart efter slutprovet. De journaler som ligger till grund för CRF kommer att bevaras i minst 15 år.

   Användning av studiens resultat

   Resultaten av denna studie kommer att publiceras av utredarna i en vetenskaplig tidskrift och presenteras vid vetenskapliga möten. Manuskriptet kommer att cirkuleras till alla medutredare innan det skickas in.