Изменения адаптивных иммунных ответов и ответов эффекторных клеток при воздействии назального аллергена - экспериментальное исследование

Рациональное исследование

Предыдущие исследования динамики клинических и иммунологических реакций in vivo на назальный аллерген были сосредоточены на конкретных параметрах, но не рассматривали кинетику взаимодействия между различными факторами (т. уровни аллерген-специфического IgE, локальная продукция IgE и медиаторов, чувствительность базофилов, кожная чувствительность). Поэтому исследователи предлагают рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование, в котором исследователи заражают пациентов интраназально экстрактом аллергена, а затем внимательно следят за клиническими и иммунологическими иммунными реакциями в течение 4 месяцев. После этого состоятся еще 4 визита до и после березового сезона.

Исследователи изучат немедленную и позднюю фазу иммунного ответа на назальное введение экстракта пыльцы березы вне сезона пыльцы. Участники исследования сначала будут подвергаться 3 дням подряд провокации назальным аллергеном, а затем будут тщательно наблюдаться в течение 1 года. Чтобы оценить клиническую реакцию на воздействие аллергена, исследователи будут использовать кожный прик-тест (SPT), общую оценку назальных симптомов (TNSS), назальную эндоскопию и пиковый назальный расходомер (PNIF). Для оценки иммунологического ответа будут взяты образцы, включая кровь, образцы слизистой оболочки носа и выделения из носа.

Дизайн исследования

В этом одноцентровом, рандомизированном, плацебо-контролируемом, двойном слепом исследовании в общей сложности 36 пациентов (6 для предварительного исследования) будут набраны в это исследование на добровольной основе и будут рандомизированы для проведения назальной провокации любой из берез. экстракт пыльцы или плацебо. Рандомизация будет стратифицирована в соответствии с уровнями IgE, специфичными для Bet v 1, чтобы обеспечить равное распределение в обеих группах. 30 Участники исследования будут подвергаться назальной провокации вне сезона пыльцы березы либо экстрактом пыльцы березы, либо плацебо в течение трех дней подряд, а затем будут регулярно наблюдаться в течение четырех месяцев.

Первоначально, перед исследованием у 30 пациентов, 6 субъектов с аллергией на пыльцу березы пройдут короткий протокол, чтобы убедиться, что

1. Концентрация аллергена, используемая для назальной провокации, достаточна для того, чтобы вызвать рост антител IgE.
2. Адекватность титрования прик-теста

3. Адекватные сроки забора назального секрета для определения медиаторов.

   Если результаты этих 6 пациентов покажут, что концентрация аллергена в носу, титрование кожных проб или время выделения из носа неадекватны, в комитет по этике будет представлена ​​поправка.

   Сокращенный протокол будет включать 5 посещений:

   • полный скрининг визит
   • полный визит N1
   • посещение N2 без забора крови и без забора носа
   • посещение N3 без забора крови и без забора носа
   • полный визит N7

   Контрольный визит

   Процедура

   • Подписание формы информированного согласия (Версия 2.1. для начального исследования с кратким протоколом, Версия 1.8 (обновленная для расширения) для основного исследования)
   • Присвоение номера проверки
   • Демографические данные
   • История аллергии
   • Оценка критериев включения и исключения
   • Тест на беременность для женщин, если требуется КПТ
   • История болезни
   • Сопутствующее лечение
   • Передняя риноскопия
   • Стандартный SPT с коммерческим экстрактом из: лещины, ясеня, смеси трав, амброзии, полыни, D. pteronyssinus, D. farina, перхоти кошек и собак, альтернариозов, кладоспориумов, гистамина и отрицательного контроля
   • Кожный прик-тест с титрованием экстрактом пыльцы березы промышленным
   • Забор крови (максимум 60 мл гепаринизированной крови и сыворотки). Часть образца крови будет отправлена ​​непосредственно в лабораторию для анализа активации базофилов, общего IgE и специфического IgE к соответствующим аллергенам. Из остальной крови получают РНК и хранят при -80°C, а сыворотку отделяют и хранят при -20°C.
   • забор проб из носа (промывание носа, забор слизистой кюреткой и забор назального секрета)

   Посетите N0

   Требования к срокам: посещение N0 запланировано за период от 2 недель до 4 дней до посещения N1. Это только для пациентов, которые прошли скрининг более чем за 3 недели до визита N1.

   Процедура:

   • Забор крови
   • Сбор образцов из носа (лаваж, забор слизистой кюреткой и забор носового секрета)
   • Титрованная КПТ
   • ПНИФ
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Посетите N1

   Процедура:

   • Повторная оценка In и критерии исключения (результаты аллерген-специфического IgE)
   • Рандомизация: Субъектам будет присвоен номер лечения.
   • Исходный образец крови
   • Базовый сбор образцов из носа (лаваж, забор слизистой оболочки носа и забор носового секрета)
   • Базовый показатель TNSS
   • Регистрация нежелательных явлений (НЯ)
   • Сопутствующее лечение
   • PNIF предоставляется пациентам и объяснение / демонстрация того, как это работает. Пациентам будет выдан бумажный дневник для отслеживания ежедневных значений PNIF (от N1 до N5). Эта молочная ферма также будет использоваться для записи ежедневных показателей TNSS (N4-N5).
   • Тест на беременность
   • в. введение экстракта пыльцы березы или плацебо
   • Документирование симптомов сразу после провокации
   • Кровь, PNIF, пробы из носа (промывание носа, пробы слизистой кюретки и пробы назального секрета) и оценка TNSS, 20 минут, 40 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 20-24 часа после введения экстракта пыльцы березы (будет выполнена временная точка 20-24 часов). при посещении N2).
   • Забор образцов из носа, оценка PNIF и TNSS через 10 минут, 3 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов после введения экстракта пыльцы березы
   • Титрованная КПТ
   • введение препаратов неотложной помощи при необходимости (назальный спрей азеластин, дезлоратадин 5 мг)

   Посетите N2

   Требования к срокам:

   Визит N2 назначается на следующий день после визита N1.

   Процедура:

   • Кровь, PNIF, пробы из носа (лаваж, пробы из кюретки слизистой оболочки и пробы назального секрета) и оценка TNSS (20-24-часовая временная точка после введения экстракта пыльцы березы в N1).
   • запись автоэкспозиции
   • Сопутствующее лечение
   • в. введение экстракта пыльцы березы или плацебо с последующим наблюдением в течение 2 часов
   • Документирование симптомов сразу после провокации
   • введение препаратов неотложной помощи при необходимости (назальный спрей азеластин, дезлоратадин 5 мг)
   • Примечание: у первоначальных 6 субъектов исследования забор носа и крови не будет выполняться.

   Посетите N3

   Требования к срокам:

   Визит N3 запланирован на следующий день после визита N2

   Процедура:

   • Забор крови перед провокацией
   • Сбор образцов из носа перед провокацией (лаваж, забор слизистой кюреткой и забор носового секрета)
   • Оценка TNSS до провокации
   • Титрованная КПТ
   • Регистрация нежелательных явлений (НЯ)
   • Сопутствующее лечение
   • в. введение экстракта пыльцы березы или плацебо
   • Документирование симптомов сразу после провокации
   • Кровь, PNIF, пробы из носа (лаваж, пробы слизистой кюретки и пробы назального секрета) и оценка по шкале TNSS через 20 минут, 40 минут, 1 час, 2 часа, 4 часа, 20–24 часа и после введения экстракта пыльцы березы (20–24 часа) посетите N4).
   • Забор образцов из носа, оценка PNIF и TNSS через 10 минут, 3 часа, 5 часов, 6 часов, 7 часов, 8 часов после введения экстракта пыльцы березы
   • Введение препаратов неотложной помощи при необходимости (назальный спрей азеластин, дезлоратадин 5 мг)
   • Примечание: у первоначальных 6 субъектов исследования забор носа и крови не будет выполняться.

   Посетите N4

   Требования к срокам:

   Визит N4 запланирован на следующий день после визита N3

   Процедура:

   • Кровь, PNIF, пробы из носа (лаваж, пробы слизистой кюреткой и пробы назального секрета) и оценка по шкале TNSS через 20–24 часа после введения экстракта пыльцы березы.

   Посетите N5

   Визит N5 запланирован через 14 ± 4 дня после визита N4:

   Процедура:

   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • оценка ТНСС
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад
   • Коллекция бумажных дневников с посещения N1 по N5

   Посетите N6

   Требования к срокам:

   Визит N6 запланирован через 14 ± 4 дня после визита N5.

   Процедура:

   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Посетите N7

   Требования к срокам:

   Визит N7 запланирован через 14 ± 4 дня после визита N6.

   Процедура:

   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Посетите N8

   Требования к срокам:

   Визит N8 запланирован через 14 ± 4 дня после визита N7.

   Процедура:

   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • счет
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Посетите N9

   Требования к срокам:

   Визит N9 запланирован через 14 ± 4 дня после визита N8.

   Процедура:

   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Посетите N10

   Требования к срокам:

   Визит N9 запланирован через 14 ± 4 дня после визита N9.

   Процедура:

   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Визит N11 - Заключительный визит компонента назальной провокации

   Требования к срокам:

   Визит N11 запланирован через 28 ± 4 дня после визита N10.

   Процедура:

   • Кровь для иммунологических показателей и забор носа (лаваж, кюретка из слизистой оболочки и забор назального секрета)
   • ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Визит S1 (продление — одобрено комитетом по этике MUW 11 февраля 2019 г.)

   Требования к срокам: посещение S1 запланировано за 4 недели до прогнозируемого начала сезона березы (+/- 7 дней).

   Процедура:

   • Пациентам объяснили бумажную пыльцу и дневник ПНИФ и попросили заполнять ежедневно в течение березового сезона.
   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • Титрованная КПТ
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Посетите S2

   Требования к срокам: посещение S2 запланировано через 4 недели после окончания березового сезона (+/- 7 дней).

   Процедура:

   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • Коллекционный бумажный дневник
   • Наблюдаемый ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • Оценка TNSS при посещении
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Посетите S3

   Требования к срокам:

   Визит S3 запланирован через 4 недели после визита S2 - (+/- 7 дней)

   Процедура:

   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • Наблюдаемый ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • Оценка TNSS при посещении
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад

   Посетите S4 и конец обучения

   Требования к срокам:

   Визит S4 запланирован через 1 год после начала всего исследования (через 1 год после визита N0) +/- 7 дней

   Процедура:

   • Заборы крови и носа (лаваж, слизистая кюретка и забор носового секрета)
   • Наблюдаемый ПНИФ
   • Титрованная КПТ
   • Оценка TNSS при посещении
   • запись автоэкспозиции
   • Тест на беременность для женщин, если последний тест был сделан более месяца назад
   • Конец учебы

   Описание процедур исследования

   Медицинский анамнез пациентов, демографические данные, сопутствующее лечение. Пациентам будет предложено указать их историю болезни, включая демографические данные и сопутствующее лечение, их аллергические симптомы, включая интенсивность и продолжительность, а также их историю лечения аллергическими препаратами.

   Аллергия в анамнезе и оценка по шкале TNSS

   Пациентов будут спрашивать о случаях чихания, ринореи, зуда в носу, заложенности носа и качестве сна, а также оценивать каждый симптом при каждом посещении и вести запись дома. Они будут использовать следующий метод оценки симптомов: 0 = отсутствует; 1 = легкая – присутствует, но легко переносится; 2 = умеренный - присутствует, симптом беспокоит, но не мешает повседневной жизни; 3 = тяжелый - симптом трудно переносится и мешает повседневной жизни (24). Кроме того, на бланке будет визуальная аналоговая шкала общего бремени болезни.

   Передняя риноскопия

   Передняя риноскопия будет выполнена один раз во время скринингового визита, чтобы исключить анатомические отклонения (например, искривление перегородки) или патологические изменения (например, носовые полипы). Это будет выполняться с использованием зеркала, когда пациент сидит, слегка запрокинув голову.

   Измеритель пиковой назальной скорости вдоха (PNIF)

   Портативность и простота PNIF дают уникальную возможность получить объективные измерения, пока пациенты находятся дома. Он также недавно был утвержден в качестве инструмента исследования при назальной провокации аллергеном.

   Процедура:

   При посещении 1 пациенты будут обучены использованию устройства PNIF (In-check, инспираторный расходомер) и получат одно устройство, которое можно взять с собой домой до N5. В PNIF используется трубка переменного диаметра, откалиброванная непосредственно в литрах в минуту, а также малоинерционное индикаторное кольцо. Положение кольца после инспираторного маневра указывает на достигнутый максимальный поток. Устройство работает, когда пациент вдыхает через рот или нос, при этом воздух проходит через глюкометр, а курсор перемещается по шкале, указывая скорость вдоха. Достигнутый расход можно отметить, проверив положение курсора на калиброванной шкале.

   PNIF в исследовании проводят:

   PNIF будет выдан участникам исследования, чтобы они могли взять их домой, чтобы они могли ежедневно или еженедельно (в зависимости от фазы исследования) поддерживать носовой поток воздуха. Их также попросят приносить их на все учебные визиты, чтобы можно было проводить наблюдаемые измерения PNIF.

   Кожный прик-тест

   4.5.1 Процедура. Аллергены вводятся в дерму предплечья путем осторожного прокола кожи через каплю (20 мкл) раствора, содержащего аллерген, стерильным ланцетом на расстоянии не менее 2 см между каждой отдельной точкой приложения. 0,9% раствор хлорида натрия будет использоваться в качестве отрицательного, а гистамин - в качестве положительного контроля. У ранее сенсибилизированных людей зудящий отек и покраснение кожи (реакция волдырей и воспалений) возникают в течение 15 минут после введения соответствующего аллергена. Через 20 минут растворы аллергенов удаляют, а края волдырей обводят шариковой ручкой. На кожу будет наклеена прозрачная лента для переноса контура волдыря на ленту для записей. Поверхность волдырей будет рассчитана с помощью цифровой планиметрии. При включении волдыри диаметром не менее 3 мм будут считаться положительной реакцией.

   Тестовые решения:

   Имеющиеся в продаже экстракт пыльцы березы и панель пыльцы деревьев и трав, сорняков и многолетних аллергенов (Allergopharma, Вена, Австрия) будут использоваться во время скринингового визита и будут храниться в соответствии с инструкциями производителя. В качестве контроля будут использоваться стерильный 0,9% раствор NaCl (отрицательный контроль) и гистамин (положительный контроль, Allergopharma, Вена, Австрия). Они будут храниться в соответствии с инструкциями производителя.

   КПТ в исследовании проводят:

   Проверочный визит:

   Стандартный кожный прик-тест с коммерческим экстрактом пыльцы березы и панелью пыльцы деревьев и трав, сорняков и многолетних аллергенов (все Allergopharma, Вена, Австрия), которые используются в рутинной диагностике в аллергологической клинике ЛОР-отделения, будет проводиться для оценки профиль сенсибилизации пациента на скрининговом визите.

   Скрининг и визиты N0, N5 - N11, S1-S4 Кожный прик-тест с титрованием экстракта березы будет проводиться с возрастающими разведениями (разведения будут увеличиваться в 3 раза до 1:60 000 (=11 шагов разведения) для определения минимальная концентрация, вызывающая кожную реакцию. Кожные пробы для всех разведений будут проводиться в четырехкратной повторности. Коммерческий положительный контрольный раствор (гистамин) и отрицательный контроль будут делаться в двух экземплярах.

   Меры предосторожности В целях безопасности пациенты будут находиться под наблюдением в течение 30 минут после тестирования. Все исследования будут проводиться в поликлинике ЛОР-отделения, где имеется полное оборудование для неотложной помощи.

   Забор крови и измерение иммунологических показателей

   Образцы крови будут браться во время скринингового визита и во время всех исследовательских визитов путем пункции локтевой вены перед кожными пробами. За одно посещение будет взято максимум 60 мл либо гепаринизированного (например, для анализа чувствительности базофилов), либо для приготовления сыворотки (например, для оценки уровней общего и аллерген-специфического иммуноглобулина или анализа RBL). Флаконы с сывороткой будут обработаны, а сыворотка будет храниться при температуре -20°C. Аллерген-специфический IgE в образцах крови во время скринингового визита будет измеряться с помощью CAP-FEIA для оценки аллерген-специфического класса RAST пациентов. Измерение общего, свободного и аллерген-специфического IgE, IgG, IgA и IgM в сыворотке будет выполняться либо с помощью CAP-FEIA, либо с помощью микрочипов, либо с помощью ELISA. Измерение будет выполнено в конце исследования во всех собранных образцах сыворотки, чтобы свести к минимуму вариации между анализами. Измерение реакции базофилов на аллерген, fMLP и анти-IgE будет проводиться при каждом посещении. Вкратце, базофилы подвергают воздействию различных концентраций анти-IgE, fMLP или рекомбинантных аллергенов в течение 15 минут, а затем исследуют на экспрессию CD 63 и CD203c с помощью проточной цитометрии. В качестве альтернативы высвобождение гистамина будет определяться с помощью имеющихся в продаже наборов для высвобождения гистамина.

   Тестирование на беременность

   У пациенток женского пола беременность будет исключена с помощью стандартного теста мочи на беременность. Тест будет проводиться перед первым кожным прик-тестом во время скринингового визита, а затем один раз в месяц.

   Сбор образцов из носа

   Сбор образцов из носа будет проводиться во время всех посещений. При каждом посещении образцы будут собираться с помощью назосорбции FXi/PU (содержащей синтетическую абсорбирующую матрицу (SAM)) или пластиковой кюретки длиной 10 см (оба устройства от Hunt Developments, Великобритания).

   Назосорбция с использованием FXi/PU (Hunt Developments, Великобритания):

   Под визуальным контролем устройство будет введено в полость носа и размещено вдоль боковой стенки к нижней носовой раковине. Указательный палец пациента будет использоваться для надавливания на внешние стороны крыльев носа и латеральных носовых хрящей, чтобы удерживать устройство на месте. Через 1 минуту устройства будут удалены, а жидкость извлечена центрифугированием. Супернатант замораживают при -70°C до дальнейшего анализа на наличие аллерген-специфических и общих уровней Ig, медиаторов и цитокинов.

   Забор мРНК слизистой оболочки. Будет использована носовая кюретка длиной 10 см. При прямой визуализации кюретка должна располагаться напротив средней нижней части нижней носовой раковины. Кюретка прижимается к поверхности слизистой оболочки, перемещаясь кнаружи 2-3 раза. Это движение будет повторяться 2-3 раза, чтобы обеспечить хороший сбор образцов. Было показано, что эта кюретка и техника не вызывают значительного дискомфорта у пациентов и, таким образом, имеют то преимущество, что не требуют применения местной анестезии. После сбора клетки лизируют в буфере Qiagen RLT и хранят при -70°C для последующего анализа мРНК.

   4.9 Интраназальная провокация

   Экстракт пыльцы березы (Allergopharma, Вена, Австрия) будет свежеразведен в стерильном 0,9% растворе хлорида натрия и будет вводиться с помощью дозирующего насоса. Аллерген будет вводиться с помощью дозирующего насоса, доставляющего 15 мкл на затяжку в обе ноздри при посещении N1, N2, N3. Если пациент страдает от назальных или глазных симптомов после заражения, будет предоставлен назальный спрей азеластин или дезлоратадин 5 мг.

   Процедура рандомизации

   При посещении N1 основного исследования пациенты будут рандомизированы в одну из двух групп (экстракт пыльцы березы или плацебо). Субъекты исследования будут рандомизированы (соотношение 2:1 для провокации и контроля) с использованием онлайн-программы рандомизации «randomizer» (www.meduniwien.ac.at/randomizer), которая поддерживается Институтом медицинской информатики, статистики и документации при Медицинском центре. Университет Граца, Грац, Австрия. Соотношение 2:1 выбрано потому, что ожидается, что дисперсия измерений Ig и производных количеств будет больше в группе провокации из-за ожидаемых более высоких общих уровней Ig, также см. вопросы размера выборки далее в этом документе.

   Рандомизация будет проводиться лицом, не участвующим в исследовании и не контактирующим с пациентами, чтобы гарантировать, что исследование будет двойным слепым.

   Исследуемые продукты и исследуемые препараты

   Экстракт пыльцы березы:

   Экстракт пыльцы березы (Allergopharma, Вена, Австрия) будет использоваться для интраназального заражения. Экстракт пыльцы березы поставляется лиофилизированным и растворяется в стерильном 0,9% растворе хлорида натрия. Содержание Bet v 1 в экстракте будет определяться иммуноблоттингом с использованием зондов антител, специфичных для Bet v 1. Наконец, экстракт будет разбавлен так, чтобы конечная концентрация Bet v 1 составляла 50 мкг/мл, поскольку эта концентрация была ранее определена. Показано, что при назальной провокации вызываются изменения уровней специфических IgE.

   Решения для управления:

   Контрольные растворы будут включать 0,9% хлорид натрия в качестве отрицательного контроля для кожного прик-теста и в качестве плацебо для интраназального заражения. Гистамин (Allergopharma, Вена, Австрия) будет использоваться в качестве положительного контроля для кожного прик-теста. Они будут храниться в соответствии с инструкциями производителя.

   Сопутствующее лечение

   Общий:

   Все дополнительные лекарства, принимаемые субъектами при включении в исследование или в любое время во время исследования, считаются сопутствующими лекарствами и будут задокументированы в файле исходных данных. Сопутствующие лекарства должны быть сведены к минимуму во время исследования, но при необходимости их можно назначать, если это не мешает протоколу исследования.

   Спасательные препараты:

   Хотя анафилактические события в этом исследовании очень маловероятны, их всегда следует считать возможными. Таким образом, в случае анафилактических реакций при КПТ или назальной провокации сразу же будет доступен полный набор для экстренной помощи. Кроме того, если пациент страдает от назальных и глазных симптомов после интраназальной провокации, для облегчения симптомов будет предоставлен назальный спрей азеластина и/или дезлоратадин 5 мг.

   Запрещенные сопутствующие препараты:

   Субъекты не должны принимать лекарства, мешающие процедурам исследования, на протяжении всего исследования. Следующие сопутствующие методы лечения не допускаются во время этого исследования:

   • Системные или местные кортикостероиды
   • Другие иммунодепрессанты
   • Антигистаминные препараты или динатрия кромогликат за 3 дня до визита
   • Системные или интраназальные адренергические препараты
   • Психофармакологические препараты
   • Ингибиторы АПФ или бета-блокаторы

   Неблагоприятные события

   Побочное явление — любое событие во время клинического исследования, включая интеркуррентное заболевание или несчастный случай, ухудшающее самочувствие субъекта; он также может принимать форму аномального лабораторного значения. Термин «нежелательное явление» не подразумевает причинно-следственной связи с исследуемым лечением.

   Все субъекты, испытывающие нежелательные явления, независимо от того, считаются ли они связанными с использованием исследуемого препарата или нет, будут находиться под наблюдением до тех пор, пока симптомы не исчезнут и любые аномальные лабораторные показатели не вернутся к исходному уровню, или пока не будет найдено удовлетворительное объяснение наблюдаемым изменениям, или до смерти. , и в этом случае будет предоставлен полный отчет о патологии от квалифицированного патологоанатома. Все результаты должны быть указаны на странице «Нежелательные явления» в форме записи случая.

   Обо всех нежелательных явлениях будет сообщено и задокументировано, как описано ниже. Нежелательные явления делятся на категории «серьезные» и «несерьезные». Это определяет процедуру, которая должна использоваться для сообщения/документирования нежелательного явления.

   Определение серьезных и несерьезных нежелательных явлений

   Серьезным нежелательным явлением является:

   • Любое событие, которое является смертельным или опасным для жизни
   • Любое событие, которое навсегда отключает
   • Любое событие, требующее или продлевающее госпитализацию
   • Любое событие, связанное с раком, врожденной аномалией или возникающее в результате передозировки (применение дозы, превышающей установленную).

   Нежелательные явления, не подпадающие под эти категории, определяются как несерьезные.

   Оценка тяжести НЯ

   Независимо от классификации нежелательного явления как серьезного или несерьезного (см. выше), его тяжесть должна оцениваться как легкая, умеренная или тяжелая только в соответствии с медицинскими критериями:

   Легкая = не мешает рутинной деятельности, приемлемая Умеренная = мешает рутинной деятельности Тяжелая = невозможно выполнять рутинную деятельность, рассматривается врачом как неприемлемая, требует лечения, требует прекращения исследования или имеет остаточный эффект.

   Следует отметить, что серьезное нежелательное явление не обязательно должно быть серьезным по своей природе. Независимо от тяжести, обо всех серьезных нежелательных явлениях необходимо сообщать, как указано ниже.

   Отчетность/документирование нежелательных явлений

   Нежелательные явления собираются путем спонтанных сообщений.

   Отчетность/документирование серьезных нежелательных явлений

   Все серьезные нежелательные явления, возникающие во время данного исследования, независимо от того, считаются ли они связанными с исследуемым препаратом или нет, должны быть задокументированы на странице «Нежелательные явления» в регистрационной форме.

   Последующий отчет, включающий всю новую информацию, полученную о серьезном событии, должен быть подготовлен и собран.

   Исследователь будет представлять по запросу копии всех этих отчетов в комитет по этике. При необходимости следователи информируют власти.

   Отчетность/документирование несерьезных нежелательных явлений

   Они должны быть задокументированы на странице «Нежелательные явления» в регистрационной форме.

   статистический анализ

   Поскольку это пилотное исследование, проведенный анализ рассматривается как исследовательский и генерирующий гипотезы.

   Характеристики пациентов и переменные исхода будут описаны путем расчета максимума, минимума, медианы, среднего значения и стандартного отклонения для метрических переменных и абсолютной и относительной частоты для категориальных переменных.

   Для анализа временных траекторий уровней IgE и других переменных результатов описательная статистика, а также 95% доверительные интервалы для среднего значения будут рассчитываться для каждой временной точки и каждой группы лечения отдельно. Чтобы учесть разнородные исходные уровни у пациентов, наблюдаемые исходы для каждого пациента будут стандартизированы по соответствующим исходным значениям для этих анализов. Кроме того, для каждой временной точки будут рассчитаны средние различия между группами и соответствующие 95% доверительные интервалы. Для графической иллюстрации будут нанесены индивидуальные траектории каждого пациента.

   Данные, наблюдаемые при кожном прик-тесте, состоят из серии доз аллергена и результирующих измерений площади. На основе предварительных данных, полученных от восьми пациентов в предыдущем исследовании, было обнаружено, что экспоненциальная модель типа Площадь = A*(1-exp(-λ Доза) надлежащим образом описывает зависимость доза-реакция, наблюдаемую в кожном прик-тесте. Модель будет соответствовать каждому моменту времени в каждой группе с использованием нелинейного алгоритма наименьших квадратов. Из этих моделей частота ответа λ, площадь плато A и 50% эффективная доза будут сообщаться вместе с 95% доверительными интервалами.

   Если есть пропущенные значения, весь анализ будет выполняться на доступной основе.

   Соображения относительно размера выборки:

   Учитывая исследовательский характер исследования, соображения о размере выборки основаны на точности оценок параметров. Основной целью является анализ уровней IgE во времени. Данные из предыдущего исследования показывают относительное увеличение анти-Bet v 1 IgE через четыре недели после назальной провокации Bet v 1 в среднем в 1,4 раза и при стандартном отклонении приблизительно 0,5 между пациентами. Для контрольного антигена средний коэффициент составил 1,04 при стандартном отклонении приблизительно 0,25. Максимальная статистическая точность сравнения средних значений между двумя группами достигается, если коэффициент распределения пропорционален отношению стандартных отклонений, которое составляет 2:1 на основе предыдущих данных. В соответствии с приведенными выше предположениями о величине эффекта и стандартном отклонении общий размер выборки 30 (20:10) обеспечит 95% доверительные интервалы с полушириной примерно 0,2 в любой группе. Ожидаемая полуширина 95% доверительного интервала для средней разницы между группами составляет 0,28. (Соответствующий t-тест для двух выборок будет иметь мощность 80% для обнаружения средней разницы 0,4 при уровне значимости 5%). Для анализа кожного прик-теста предварительные данные предполагают, что при размере выборки 20 полуширина 95% доверительных интервалов для 50% эффективной дозы будет примерно в 0,25 раза больше 50% эффективной дозы, которая считается как достаточная точность для этого экспериментального исследования. См. приложение для графического представления

   Этические и правовые аспекты

   Исследование будет проводиться в соответствии с требованиями местного законодательства и GCP. Он будет осуществляться в соответствии с руководящими принципами Хельсинкской декларации (1964 г.), включая текущие изменения.

   Информированное согласие субъекта

   Прежде чем быть допущенным к исследованию, субъект должен дать согласие на участие после того, как характер, объем и возможные последствия клинического исследования были объяснены в понятной для него форме. Субъект должен дать согласие в письменной форме. Подпись исследователя подтвердит согласие испытуемого. Пациент может отозвать свое согласие, даже не давая замечаний, в любое время и без негативных последствий для своего дальнейшего медицинского обслуживания.

   Признание/одобрение исследования

   Перед началом исследования протокол исследования будет представлен в комитет по этике медицинского университета Вены и больницы общего профиля Вены (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Вена, Австрия).

   Страхование

   Все испытуемые, участвующие в этом исследовании, будут застрахованы в страховой компании Цюриха (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Wien, тел. +43 50 1255 1255; страховой номер: 07229622-2).

   Конфиденциальность

   Имена всех субъектов будут храниться в секрете в файлах следователей. Субъекты будут идентифицированы во всей документации и оценке по номеру, присвоенному им во время исследования. Субъектам сообщат, что все результаты исследования будут храниться и обрабатываться в условиях строжайшей конфиденциальности.

   Документирование и использование результатов исследования

   Документирование результатов исследования

   Все результаты, собранные в ходе исследования, будут собраны в файле исходных данных, а затем будут перенесены в формы истории болезни (CRF). Все записи в регистрационных бланках делаются разборчиво черными или синими чернилами. В случае внесения исправлений в записи в регистрационном листе слова или цифры будут обведены и прочерчены одним штрихом. Правильное значение будет введено рядом со старой записью и датой, а исправление будет инициализировано. Неправильные записи нельзя замазывать корректирующей жидкостью, стирать или делать неразборчивыми каким-либо образом. Заполненные ИРК подписываются следователем. CRF будут заполнены сразу после итогового экзамена. Медицинские записи, на которых основана CRF, будут храниться не менее 15 лет.

   Использование результатов исследования

   Результаты этого исследования будут опубликованы исследователями в научном журнале и представлены на научных конференциях. Перед подачей рукопись будет распространена среди всех соисследователей.