Changements dans les réponses immunitaires adaptatives et les réponses des cellules effectrices lors de l'exposition nasale aux allergènes - une étude pilote

Justification de l'étude

Des études antérieures sur la dynamique des réponses cliniques et immunologiques in vivo à l'allergène nasal se sont concentrées sur des paramètres particuliers mais n'ont pas abordé la cinétique de l'interaction entre les différents facteurs (c'est-à-dire taux d'IgE spécifiques de l'allergène, production locale d'IgE et de médiateurs, sensibilité aux basophiles, sensibilité cutanée). Les enquêteurs proposent donc une étude randomisée en double aveugle contrôlée par placebo où les enquêteurs défient les patients par voie intranasale avec un extrait d'allergène, puis surveillent étroitement les réponses immunitaires cliniques et immunologiques sur une période de 4 mois. Après cela, 4 autres visites auront lieu avant et après la saison des bouleaux.

Les chercheurs examineront les réponses immunitaires immédiates et tardives à la provocation nasale à l'extrait de pollen de bouleau en dehors de la saison pollinique. Les participants à l'étude subiront initialement 3 jours consécutifs de provocation par allergènes nasaux, puis seront suivis de près pendant une période d'un an. Pour évaluer la réponse clinique à l'exposition aux allergènes, les chercheurs utiliseront le test cutané (SPT), le score total des symptômes nasaux (TNSS), l'endoscopie nasale et le débitmètre nasal inspiratoire maximal (PNIF). Pour évaluer les réponses immunologiques, des échantillons de sang, de muqueuse nasale et de sécrétions nasales seront prélevés.

Étudier le design

Dans cette étude monocentrique, randomisée, contrôlée par placebo et en double aveugle, un total de 36 patients (6 pour une pré-étude) seront recrutés dans cette étude sur une base volontaire et seront randomisés pour recevoir un défi nasal avec soit du bouleau extrait de pollen ou placebo. La randomisation sera stratifiée en fonction des niveaux d'IgE spécifiques de Bet v 1 pour permettre une répartition égale dans les deux groupes. 30 Les participants à l'étude recevront une provocation nasale en dehors de la saison pollinique du bouleau avec de l'extrait de pollen de bouleau ou un placebo pendant trois jours consécutifs et seront ensuite suivis régulièrement pendant jusqu'à quatre mois.

Dans un premier temps, avant l'étude chez 30 patients, 6 sujets allergiques au pollen de bouleau subiront un protocole court afin de s'assurer que

1. La concentration d'allergène utilisée pour la provocation nasale est suffisante pour provoquer une augmentation des anticorps IgE
2. Que les titrages du test cutané sont adéquats

3. Que le moment de la prise des sécrétions nasales pour la détermination des médiateurs est adéquat.

   Si les résultats de ces 6 patients révèlent que la concentration nasale d'allergènes, les titrages des tests cutanés ou le moment des sécrétions nasales ne sont pas adéquats, un amendement sera soumis au comité d'éthique.

   Le protocole raccourci comprendra 5 visites :

   • visite de dépistage complète
   • visite complète N1
   • visite N2 sans prélèvement sanguin et sans prélèvement nasal
   • visite N3 sans prélèvement sanguin et sans prélèvement nasal
   • visite complète N7

   Visite de dépistage

   Procédure

   • Signature du formulaire de consentement éclairé (version 2.1. pour étude initiale avec protocole court, Version 1.8 (mise à jour pour extension) pour étude principale)
   • Attribution du numéro de présélection
   • Données démographiques
   • Antécédents d'allergie
   • Évaluation des critères d'admission et d'exclusion
   • Test de grossesse pour les femmes si besoin SPT
   • Antécédents médicaux
   • Médicament concomitant
   • rhinoscopie antérieure
   • SPT standard avec extrait commercial de : noisetier, frêne, mélange de graminées, herbe à poux, armoise, D. pteronyssinus, D. farina, squames de chat et de chien, alternaria, cladosporium, histamine et contrôle négatif
   • Test cutané titré avec extrait commercial de pollen de bouleau
   • Prélèvement sanguin (max 60 ml de sang hépariné et de sérum) - Une partie de l'échantillon sanguin sera directement envoyée au laboratoire pour analyse de l'activation des basophiles, des IgE totales et des IgE spécifiques aux allergènes concernés. Du reste du sang, l'ARN sera préparé et stocké à -80°C et le sérum sera séparé et stocké à -20°C
   • prélèvement nasal (lavage nasal, prélèvement par curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)

   Visite N0

   Exigences concernant le calendrier : La visite N0 est prévue entre 2 semaines et 4 jours avant la visite N1. Ceci est uniquement pour les patients qui ont été dépistés plus de 3 semaines avant la visite N1

   Procédure:

   • Prise de sang
   • Prélèvement d'échantillons nasaux (lavage, prélèvement de curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • SPT titré
   • PNIF
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visitez N1

   Procédure:

   • Réévaluation des critères d'inclusion et d'exclusion (résultats IgE spécifiques à l'allergène)
   • Randomisation : les sujets se verront attribuer un numéro de traitement
   • Prélèvement sanguin de base
   • Collecte d'échantillons nasaux de base (lavage, échantillonnage de la muqueuse nasale et échantillonnage des sécrétions nasales)
   • Score TNSS de base
   • Enregistrement des événements indésirables (EI)
   • Médicament concomitant
   • PNIF remis aux patients et explication/démonstration de son fonctionnement. Les patients recevront un journal papier pour suivre les valeurs quotidiennes du PNIF (de N1 à N5). Cette laiterie sera également utilisée pour enregistrer les scores TNSS quotidiens (N4-N5).
   • Test de grossesse
   • dans. administration d'extrait de pollen de bouleau ou de placebo
   • Documentation des symptômes immédiatement après la provocation
   • Sang, PNIF, prélèvement nasal (lavage nasal, prélèvement de curette muqueuse et prélèvement de sécrétion nasale) et score TNSS, 20min, 40min, 1h, 2h, 4h, 20-24h après l'administration d'extrait de pollen de bouleau (un point de temps de 20-24h sera effectué à la visite N2).
   • Prélèvement nasal, score PNIF et TNSS à 10min, 3h, 5h, 6h, 7h, 8h après administration d'extrait de pollen de bouleau
   • SPT titré
   • administration d'un médicament de secours si nécessaire (spray nasal d'azélastine, desloratadine 5mg)

   Visitez N2

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite N2 est prévue le lendemain de la visite N1

   Procédure:

   • Sang, PNIF, prélèvement nasal (lavage, prélèvement par curette muqueuse et prélèvement des sécrétions nasales) et score TNSS (point 20-24 heures après l'administration d'extrait de pollen de bouleau en N1).
   • Enregistrement AE
   • Médicament concomitant
   • dans. administration d'extrait de pollen de bouleau ou de placebo suivie d'une période d'observation de 2 heures
   • Documentation des symptômes immédiatement après la provocation
   • administration d'un médicament de secours si nécessaire (spray nasal d'azélastine, desloratadine 5mg)
   • Remarque : dans les 6 premiers sujets de l'étude, aucun prélèvement nasal et sanguin ne sera effectué

   Visitez N3

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite N3 est prévue le lendemain de la visite N2

   Procédure:

   • Prise de sang avant provocation
   • Prélèvement d'échantillons nasaux avant provocation (lavage, prélèvement de curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • Score TNSS avant provocation
   • SPT titré
   • Enregistrement des événements indésirables (EI)
   • Médicament concomitant
   • dans. administration d'extrait de pollen de bouleau ou de placebo
   • Documentation des symptômes immédiatement après la provocation
   • Sang, PNIF, prélèvement nasal (lavage, prélèvement de curette muqueuse et prélèvement de sécrétion nasale) et score TNSS 20min, 40min, 1h, 2h, 4h, 20-24h et après l'administration d'extrait de pollen de bouleau (le point de temps de 20-24h sera effectué à visiter N4).
   • Prélèvement nasal, score PNIF et TNSS à 10min, 3h, 5h, 6h, 7h, 8h après administration d'extrait de pollen de bouleau
   • Administration d'un médicament de secours si nécessaire (spray nasal d'azélastine, desloratadine 5mg)
   • Remarque : dans les 6 premiers sujets de l'étude, aucun prélèvement nasal et sanguin ne sera effectué

   Visitez N4

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite N4 est prévue le lendemain de la visite N3

   Procédure:

   • Prélèvement sanguin, PNIF, nasal (lavage, prélèvement à la curette muqueuse et prélèvement des sécrétions nasales) et score TNSS 20-24h après administration d'extrait de pollen de bouleau.

   Visitez N5

   La visite N5 est programmée 14 ±4 jours après la visite N4 :

   Procédure:

   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • PNIF
   • SPT titré
   • Score TNSS
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois
   • Collecte d'agenda papier de la Visite N1 à N5

   Visitez N6

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite N6 est programmée 14 ±4 jours après la visite N5

   Procédure:

   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • PNIF
   • SPT titré
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visitez N7

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite N7 est programmée 14 ±4 jours après la visite N6

   Procédure:

   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • PNIF
   • SPT titré
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visitez N8

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite N8 est programmée 14 ±4 jours après la visite N7

   Procédure:

   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • PNIF
   • SPT titré
   • score
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visitez N9

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite N9 est prévue 14 ± 4 jours après la visite N8

   Procédure:

   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • PNIF
   • SPT titré
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visitez N10

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite N9 est prévue 14 ± 4 jours après la visite N9

   Procédure:

   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • PNIF
   • SPT titré
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visite N11 - Visite finale de la composante de provocation nasale

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite N11 est programmée 28 ±4 jours après la visite N10

   Procédure:

   • Sang pour paramètres immunologiques et prélèvement nasal (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • PNIF
   • SPT titré
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visitez S1 (Extension - Approuvée par le Comité d'éthique de MUW le 11 février 2019)

   Exigences concernant le calendrier : La visite S1 est prévue 4 semaines avant le début prévu de la saison des bouleaux (+/- 7 jours)

   Procédure:

   • Carnet de pollen papier et PNIF expliqué aux patients et à remplir quotidiennement pendant la saison des bouleaux
   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • SPT titré
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visitez S2

   Exigences concernant le calendrier : La visite S2 est prévue 4 semaines après la fin de la saison des bouleaux (+/- 7 jours)

   Procédure:

   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • Journal papier collection
   • PNIF observé
   • SPT titré
   • Score TNSS à la visite
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visitez S3

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite S3 est prévue 4 semaines après la visite S2 - (+/- 7 jours)

   Procédure:

   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • PNIF observé
   • SPT titré
   • Score TNSS à la visite
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois

   Visite S4 et fin d'étude

   Exigences concernant le calendrier :

   La visite S4 est programmée 1 an après le début de toute l'étude (1 an après la visite N0) +/- 7 jours

   Procédure:

   • Prélèvements sanguins et nasaux (lavage, curette muqueuse et prélèvement de sécrétions nasales)
   • PNIF observé
   • SPT titré
   • Score TNSS à la visite
   • Enregistrement AE
   • Test de grossesse pour les femmes si le dernier test remonte à plus d'un mois
   • Fin d'étude

   Descriptions des procédures d'étude

   Antécédents médicaux des patients, données démographiques, médication concomitante Les patients seront interrogés sur leurs antécédents médicaux, y compris les données démographiques et la médication concomitante, leurs symptômes allergiques, y compris l'intensité et la durée, et leurs antécédents de médication allergique.

   Antécédents d'allergie et score TNSS

   Il sera demandé aux patients de signaler la survenue d'éternuements, de rhinorrhée, de prurit nasal, de congestion nasale et la qualité du sommeil, de noter chaque symptôme à chaque visite et de conserver un dossier à domicile. Ils utiliseront la méthode de score des symptômes suivante : 0 = absent ; 1 = léger - présent mais facilement toléré ; 2 = modéré - présent, le symptôme est gênant mais n'interfère pas avec les activités de la vie quotidienne ; 3 = sévère - le symptôme est difficile à tolérer et interfère avec les activités de la vie quotidienne (24). En plus de cela, il y aura une échelle visuelle analogique de la charge totale de morbidité sur le formulaire.

   rhinoscopie antérieure

   Une rhinoscopie antérieure sera effectuée une fois au cours de la visite de sélection pour exclure les variations anatomiques (par ex. déviation septale) ou des changements pathologiques (par ex. polypes nasaux). Elle sera réalisée à l'aide d'un spéculum avec le patient assis avec la tête légèrement en arrière.

   Débitmètre nasal inspiratoire de pointe (PNIF)

   La portabilité et la facilité du PNIF offrent une opportunité unique d'obtenir des mesures objectives pendant que les patients sont à la maison. Il a également été récemment validé comme outil d'étude lors d'un test allergène nasal.

   Procédure:

   Lors de la visite 1, les patients seront formés à l'utilisation de l'appareil PNIF (In-check, débitmètre inspiratoire) et en recevront un à emporter chez eux jusqu'à N5. Le PNIF utilise un tube à diamètre variable calibré directement en litres par minute ainsi qu'une bague indicatrice à faible inertie. La position de l'anneau après une manœuvre inspiratoire indique le débit maximal atteint. L'appareil fonctionne lorsqu'un patient inhale par la bouche ou le nez, ce qui provoque l'aspiration d'air à travers le compteur et un curseur se déplace le long de l'échelle pour indiquer la vitesse d'inhalation. Le débit atteint peut être noté en vérifiant la position du curseur par rapport à l'échelle calibrée.

   PNIF dans la conduite des études :

   Le PNIF sera remis aux participants à l'étude pour qu'ils l'emportent chez eux afin qu'ils puissent conserver une laiterie quotidienne ou hebdomadaire (selon la phase de l'étude) de leur flux d'air nasal. Il leur sera également demandé de les apporter à toutes les visites d'étude afin que les mesures PNIF observées puissent être prises.

   Test cutané

   4.5.1 Procédure : Les allergènes sont insérés dans le derme de l'avant-bras en piquant doucement la peau à travers une goutte (20 ul) d'une solution contenant des allergènes avec une lancette stérile avec au moins 2 cm entre chaque point d'application individuel. Une solution de chlorure de sodium à 0,9 % sera utilisée comme contrôle négatif et l'histamine comme contrôle positif. Chez les personnes précédemment sensibilisées, un gonflement avec démangeaisons et un rougissement de la peau (réaction de papule et de poussée) se produiront dans les 15 minutes suivant la provocation avec l'allergène respectif. Après 20 minutes, les solutions d'allergènes seront essuyées et les bords des papules seront tracés avec un stylo à bille. Une bande transparente sera collée sur la peau afin de transférer le contour de la papule sur la bande pour les enregistrements. La surface des papules sera calculée par planimétrie numérique. Pour l'inclusion, les papules d'au moins 3 mm de diamètre seront considérées comme des réactions positives.

   Tester les solutions :

   Un extrait de pollen de bouleau disponible dans le commerce et un panel de pollen d'arbres et de graminées, de mauvaises herbes et d'allergènes vivaces (Allergopharma, Vienne, Autriche) seront utilisés lors de la visite de dépistage et seront conservés conformément aux instructions du fabricant. Comme témoins, une solution stérile de NaCl à 0,9 % (témoin négatif) et de l'histamine (témoin positif, Allergopharma, Vienne, Autriche) seront utilisées. Ils seront stockés conformément aux instructions du fabricant.

   SPT dans la conduite de l'étude :

   Visite de dépistage:

   Un test cutané standard avec un extrait commercial de pollen de bouleau et un panel d'allergènes de pollen d'arbres et de graminées, de mauvaises herbes et de plantes vivaces (tous Allergopharma, Vienne, Autriche) tels qu'utilisés dans le diagnostic de routine dans la clinique d'allergie du service ORL sera effectué pour évaluer le profil de sensibilisation du patient lors de la visite de dépistage.

   Dépistage et visites N0, N5 - N11, S1-S4 Un test cutané titré à l'extrait de bouleau sera effectué avec des dilutions croissantes (les dilutions seront augmentées d'un facteur de 3 jusqu'à 1:60 000 (= 11 étapes de dilution) pour déterminer la concentration la plus faible qui provoque une réponse cutanée. Des tests cutanés à toutes les dilutions seront effectués en quadruple. La solution commerciale de contrôle positif (histamine) et le contrôle négatif seront effectués en double.

   Précautions de sécurité Par mesure de sécurité, les patients seront surveillés pendant 30 minutes après le test. Toutes les investigations seront effectuées dans la clinique externe du service ORL, où un équipement d'urgence complet est disponible.

   Prélèvement sanguin et mesure des paramètres immunologiques

   Des échantillons de sang seront prélevés lors de la visite de dépistage et lors de toutes les visites d'étude par ponction de la veine antécubitale avant le test cutané. Un maximum de 60 ml par visite sera prélevé soit sous héparine (par exemple pour les tests de sensibilité aux basophiles), soit pour la préparation de sérum (par exemple pour l'évaluation des taux d'immunoglobulines totales et spécifiques à l'allergène ou le test RBL). Les flacons de sérum seront traités et le sérum sera stocké à -20 °C. Les IgE spécifiques à l'allergène des échantillons de sang de la visite de dépistage seront mesurées par CAP-FEIA pour évaluer la classe RAST spécifique à l'allergène des patients. La mesure des IgE, IgG, IgA et IgM sériques totales, libres et allergènes spécifiques sera effectuée soit par CAP-FEIA, soit par mesure par microarray, soit par ELISA. La mesure sera effectuée à la fin de l'étude dans tous les échantillons de sérum collectés afin de minimiser les variations inter-essais. La mesure des réponses des basophiles à l'allergène, au fMLP et aux anti-IgE sera effectuée à chaque visite. En bref, les basophiles seront exposés à diverses concentrations d'anti-IgE, de fMLP ou d'allergènes recombinants pendant 15 minutes, puis examinés pour l'expression de CD 63 et CD203c au moyen d'une cytométrie en flux. En variante, la libération d'histamine sera déterminée par des kits de libération d'histamine disponibles dans le commerce.

   Test de grossesse

   Chez les patientes, une grossesse sera exclue avec un test de grossesse urinaire standard. Le test sera effectué avant le premier test cutané lors de la visite de dépistage et ensuite une fois par mois.

   Prélèvement d'échantillons nasaux

   La collecte d'échantillons nasaux sera effectuée à toutes les visites. Pour chaque visite, des échantillons seront prélevés à l'aide de la nasosorption FXi/PU (contenant une matrice absorbante synthétique (SAM)), ou d'une curette en plastique de 10 cm de long (les deux appareils de Hunt Developments, Royaume-Uni)

   Nasosorption utilisant FXi/PU (Hunt Developments, Royaume-Uni) :

   Sous visualisation, le dispositif sera inséré dans la cavité nasale et placé le long de la paroi latérale contre le cornet inférieur. L'index du patient sera utilisé pour appuyer sur les aspects externes des cartilages nasaux alaires et latéraux pour maintenir le dispositif en place. Après 1 minute, les dispositifs seront retirés et le liquide sera extrait par centrifugation. Le surnageant sera congelé à -70 °C jusqu'à une analyse plus approfondie de la présence de niveaux d'Ig spécifiques à l'allergène et totaux, de niveaux de médiateurs et de cytokines.

   Prélèvement d'ARNm muqueux Une curette nasale de 10 cm sera utilisée. Sous visualisation directe, la curette sera amenée à reposer contre la partie médiane inférieure du cornet inférieur. La curette sera pressée contre la surface muqueuse déplacée vers l'extérieur 2-3 fois. Ce mouvement sera répété 2 à 3 fois pour assurer une bonne collecte d'échantillons. Il a été démontré que cette curette et cette technique ne causent aucun inconfort significatif aux patients et présentent donc l'avantage de ne nécessiter aucune anesthésie locale. Après la collecte, les cellules seront lysées dans du tampon Qiagen RLT et stockées à -70 ° C pour une analyse ultérieure de l'ARNm.

   4.9 Provocation intranasale

   L'extrait de pollen de bouleau (Allergopharma, Vienne, Autriche) sera fraîchement dilué dans une solution stérile de chlorure de sodium à 0,9% et sera administré à l'aide d'une pompe doseuse. L'allergène sera administré à l'aide d'une pompe doseuse délivrant 15 µl par bouffée dans les deux narines lors des visites N1, N2, N3. Si le patient souffre de symptômes nasaux ou oculaires après le test, un spray nasal d'azélastine ou desloratadine 5 mg sera fourni.

   Procédure de randomisation

   A la visite N1 de l'étude principale, les patients seront randomisés dans l'un des deux groupes (extrait de pollen de Bouleau ou Placebo). Les sujets de l'étude seront randomisés (rapport 2: 1 pour la provocation par rapport au contrôle) à l'aide du programme de randomisation en ligne "randomizer" (www.meduniwien.ac.at/randomizer), qui est maintenu à l'Institut d'informatique médicale, de statistiques et de documentation à Medical Université de Graz, Graz, Autriche. Le rapport 2:1 est choisi parce que la variance des mesures d'Ig et des quantités dérivées devrait être plus grande dans le groupe de provocation en raison des niveaux d'Ig globaux plus importants attendus, voir également les considérations relatives à la taille de l'échantillon plus loin dans ce document.

   La randomisation sera effectuée par une personne qui n'est pas impliquée dans l'étude et n'a aucun contact avec les patients pour s'assurer que l'étude sera en double aveugle.

   Produits expérimentaux et médicaments à l'étude

   Extrait de Pollen de Bouleau :

   L'extrait de pollen de bouleau (Allergopharma, Vienne, Autriche) sera utilisé pour le challenge intranasal. L'extrait de pollen de bouleau arrivera lyophilisé et sera dissous dans du chlorure de sodium stérile à 0,9 %. La teneur en Bet v 1 dans l'extrait sera déterminée par immunotransfert à l'aide de sondes anticorps spécifiques de Bet v 1. Enfin l'extrait sera dilué pour que la concentration finale en Bet v 1 soit de 50 μg/ml car cette concentration a été précédemment montré pour provoquer des changements dans les niveaux d'IgE spécifiques lors d'une provocation nasale.

   Solutions de contrôle :

   Les solutions de contrôle comprendront du chlorure de sodium à 0,9 % comme contrôle négatif pour le test cutané et comme placebo pour la provocation intranasale. L'histamine (Allergopharma, Vienne, Autriche) sera utilisée comme contrôle positif pour le test cutané. Ils seront stockés conformément aux instructions du fabricant.

   Médicament concomitant

   Général:

   Tous les médicaments supplémentaires pris par les sujets à l'entrée dans l'étude ou à tout moment pendant l'étude sont considérés comme des médicaments concomitants et seront documentés dans le fichier de données source. Les médicaments concomitants doivent être réduits au minimum pendant l'étude, mais si cela est jugé nécessaire, ils peuvent être administrés s'ils n'interfèrent pas avec le protocole de l'étude.

   Médicament de secours :

   Bien que les événements anaphylactiques soient très peu probables dans cette étude, ils doivent toujours être considérés comme possibles. Par conséquent, une trousse d'urgence complète sera disponible immédiatement en cas de réactions anaphylactiques au SPT ou de provocation nasale. De plus, si le patient souffre de symptômes nasaux et oculaires après la provocation intranasale, un spray nasal d'azélastine et/ou de desloratadine 5 mg sera fourni pour améliorer les symptômes.

   Médicaments concomitants interdits :

   Les sujets doivent rester sans médicaments interférant avec les procédures d'étude pendant toute la durée de l'étude. Les traitements concomitants suivants ne sont pas autorisés au cours de cette étude :

   • Corticostéroïdes systémiques ou topiques
   • Autres médicaments immunosuppresseurs
   • Antihistaminiques ou cromoglycate disodique 3 jours avant les visites
   • Médicaments adrénergiques systémiques ou intranasaux
   • Médicaments psychopharmacologiques
   • Inhibiteurs de l'ECA ou bêta-bloquants

   Événements indésirables

   Un événement indésirable est tout événement au cours d'une étude clinique, y compris une maladie ou un accident intercurrent, qui altère le bien-être du sujet ; il peut également prendre la forme d'une valeur de laboratoire anormale. Le terme événement indésirable n'implique pas de relation causale avec le traitement à l'étude.

   Tous les sujets présentant des événements indésirables - qu'ils soient considérés comme associés à l'utilisation du traitement à l'étude ou non - seront surveillés jusqu'à ce que les symptômes disparaissent et que toute valeur de laboratoire anormale soit revenue à la ligne de base, ou jusqu'à ce qu'il y ait une explication satisfaisante des changements observés, ou jusqu'au décès , auquel cas un rapport pathologique complet d'un pathologiste qualifié sera fourni. Tous les résultats doivent être signalés sur une page "événement indésirable" dans le formulaire d'enregistrement de cas.

   Tous les événements indésirables seront signalés et documentés comme décrit ci-dessous. Les événements indésirables sont divisés en catégories « graves » et « non graves ». Cela détermine la procédure qui doit être utilisée pour signaler/documenter l'événement indésirable.

   Définition des événements indésirables graves et non graves

   Un événement indésirable grave est :

   • Tout événement mortel ou mettant la vie en danger
   • Tout événement qui désactive de façon permanente
   • Tout événement nécessitant ou prolongeant une hospitalisation
   • Tout événement impliquant un cancer, une anomalie congénitale ou résultant d'un surdosage (application d'une dose supérieure à la dose stipulée).

   Les événements indésirables qui n'entrent pas dans ces catégories sont définis comme non graves.

   Évaluation de la gravité de l'EI

   Quelle que soit la classification d'un événement indésirable comme grave ou non grave (voir ci-dessus), sa gravité doit être évaluée comme légère, modérée ou sévère, selon les seuls critères médicaux :

   Léger = n'interfère pas avec les activités de routine, acceptable Modéré = interfère avec les activités de routine Sévère = impossible d'effectuer les activités de routine, considéré comme inacceptable par le médecin, nécessite un traitement, nécessite l'arrêt de l'étude ou a un effet résiduel.

   Il convient de noter qu'un événement indésirable grave n'a pas besoin d'être de nature grave. Quelle que soit leur gravité, tous les événements indésirables graves doivent être signalés comme indiqué ci-dessous.

   Notification/documentation des événements indésirables

   Les événements indésirables sont collectés par notification spontanée.

   Notification/documentation des événements indésirables graves

   Tous les événements indésirables graves qui surviennent au cours de cette étude, qu'ils soient considérés comme associés ou non au médicament à l'étude, doivent être documentés sur une page « Événement indésirable » dans le formulaire d'enregistrement de cas.

   Un rapport de suivi comprenant toutes les nouvelles informations obtenues sur l'événement grave doit être préparé et sera recueilli.

   L'investigateur remettra sur demande des copies de tous ces rapports au comité d'éthique. Le cas échéant, les enquêteurs informeront les autorités.

   Notification/documentation des événements indésirables non graves

   Ceux-ci doivent être documentés sur une page "Evénement indésirable" dans le formulaire d'enregistrement de cas.

   analyses statistiques

   Comme il s'agit d'une étude pilote, les analyses effectuées sont considérées comme exploratoires et génératrices d'hypothèses.

   Les caractéristiques des patients et les variables de résultats seront décrites en calculant le maximum, le minimum, la médiane, la moyenne et l'écart type pour les variables métriques et les fréquences absolues et relatives pour les variables catégorielles.

   Pour analyser les trajectoires temporelles des niveaux d'IgE et d'autres variables de résultat, des statistiques descriptives ainsi que des intervalles de confiance à 95 % pour la moyenne seront calculés pour chaque point temporel et chaque groupe de traitement séparément. Pour tenir compte des niveaux de référence hétérogènes entre les patients, les résultats observés pour chaque patient seront standardisés par les valeurs de référence respectives pour ces analyses. En outre, les différences moyennes entre les groupes et selon les intervalles de confiance à 95 % seront calculées pour chaque point dans le temps. Pour une illustration graphique, les trajectoires individuelles de chaque patient seront tracées.

   Les données observées dans le test cutané consistent en une série de doses d'allergènes et les mesures de surface qui en résultent. Sur la base des données préliminaires de huit patients dans une étude précédente, un modèle exponentiel du type Area = A*(1-exp(-λ Dose) s'est avéré décrire de manière appropriée la relation dose-réponse observée dans le test cutané. Le modèle sera ajusté pour chaque point temporel de chaque groupe à l'aide d'un algorithme des moindres carrés non linéaires. À partir de ces modèles, le taux de réponse λ, la zone de plateau A et la dose efficace à 50 % seront rapportés avec des intervalles de confiance à 95 %.

   S'il y a des valeurs manquantes, toute l'analyse sera effectuée sur la base des cas disponibles.

   Considérations relatives à la taille de l'échantillon :

   Compte tenu de la nature exploratoire de l'étude, les considérations relatives à la taille de l'échantillon sont fondées sur la précision des estimations des paramètres. L'objectif principal est l'analyse des taux d'IgE dans le temps. La date d'une étude précédente montre une augmentation relative des IgE anti-Bet v 1 quatre semaines après la provocation nasale avec Bet v 1 d'un facteur moyen de 1,4 et d'un écart type d'environ 0,5 entre les patients. Avec un antigène témoin, le facteur moyen était de 1,04 avec un écart type d'environ 0,25. La précision statistique maximale pour une comparaison des valeurs moyennes entre les deux groupes est atteinte si le rapport d'allocation est proportionnel au rapport des écarts-types, qui est de 2:1 sur la base des données précédentes. Sous les hypothèses ci-dessus sur les tailles d'effet et les écarts-types, une taille d'échantillon totale de 30 (20:10) fournira des intervalles de confiance à 95 % avec une demi-largeur d'environ 0,2 dans l'un ou l'autre groupe. La demi-largeur attendue d'un intervalle de confiance à 95 % pour la différence moyenne entre les groupes est de 0,28. (Un test t correspondant à deux échantillons aurait une puissance de 80 % pour détecter une différence moyenne de 0,4 à un niveau de signification de 5 %). Pour l'analyse du prick test cutané, les données préliminaires suggèrent qu'avec une taille d'échantillon de 20, la demi-largeur des intervalles de confiance à 95 % pour la dose efficace à 50 % sera d'environ 0,25 fois la dose efficace à 50 %, qui est considérée comme une précision suffisante pour cette étude pilote. Veuillez consulter l'annexe pour la représentation graphique

   Aspects éthiques et juridiques

   L'étude sera réalisée conformément aux exigences légales locales et aux BPC. Elle sera réalisée conformément aux directives de la Déclaration d'Helsinki (1964), y compris les révisions en vigueur.

   Consentement éclairé du sujet

   Avant d'être admis à l'étude, le sujet doit avoir consenti à participer après que la nature, la portée et les conséquences possibles de l'étude clinique lui aient été expliquées sous une forme compréhensible pour lui. Le sujet doit donner son consentement par écrit. La signature de l'investigateur confirmera le consentement du sujet. Le patient peut retirer son consentement, même sans faire de commentaires, à tout moment et sans conséquences négatives pour ses soins médicaux futurs.

   Reconnaissance/approbation de l'étude

   Avant le début de l'étude, le protocole d'étude sera soumis au comité d'éthique de l'université médicale de Vienne et de l'hôpital général de Vienne (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Vienne, Autriche).

   Assurance

   Tous les sujets participant à cette étude seront assurés auprès de la compagnie d'assurances de Zürich (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Vienne, tél. +43 50 1255 1255 ; numéro d'assurance : 07229622-2).

   Confidentialité

   Tous les noms des sujets seront gardés secrets dans les dossiers des enquêteurs. Les sujets seront identifiés tout au long de la documentation et de l'évaluation par le numéro qui leur est attribué au cours de l'étude. Les sujets seront informés que tous les résultats de l'étude seront stockés et traités dans la plus stricte confidentialité.

   Documentation et utilisation des résultats de l'étude

   Documentation des résultats de l'étude

   Tous les résultats recueillis au cours de l'étude seront rassemblés dans un fichier de données source et seront ensuite transférés dans les formulaires de rapport de cas (CRF). Toutes les inscriptions sur les formulaires d'enregistrement de cas seront faites lisiblement à l'encre noire ou bleue. Si des corrections sont apportées aux entrées dans le formulaire d'enregistrement de cas, les mots ou les chiffres seront entourés d'un cercle et d'un seul trait tracé à travers eux. La valeur correcte sera inscrite à côté de l'ancienne entrée et de la date et la correction sera paraphée. Les inscriptions incorrectes ne doivent pas être couvertes de liquide correcteur ou effacées ou rendues illisibles de quelque façon que ce soit. Les CRF remplis seront signés par l'investigateur. Les CRF seront remplis immédiatement après l'examen final. Les dossiers médicaux sur lesquels le CRF est basé seront conservés pendant au moins 15 ans.

   Utilisation des résultats de l'étude

   Les résultats de cette étude seront publiés par les investigateurs dans une revue scientifique et présentés lors de réunions scientifiques. Le manuscrit sera distribué à tous les co-chercheurs avant d'être soumis.