Endringer i adaptive immunresponser og effektorcelleresponser ved neseallergeneksponering - en pilotstudie

Rasjonal av studien

Tidligere studier på dynamikken til in vivo kliniske og immunologiske responser på nasalt allergen har fokusert på spesielle parametere, men har ikke adressert kinetikken til samspillet mellom de forskjellige faktorene (dvs. allergenspesifikke IgE-nivåer, lokal IgE- og mediatorproduksjon, basofilfølsomhet, kutanfølsomhet). Etterforskerne foreslår derfor en randomisert dobbeltblind placebokontrollert studie der Utforskerne utfordrer pasienter intranasalt med allergenekstrakt og deretter nøye overvåker både kliniske og immunologiske immunresponser over en periode på 4 måneder. Etter dette vil det foregå ytterligere 4 besøk før og etter bjørkesesongen.

Etterforskerne vil se på umiddelbar og sen fase immunrespons på bjørkepollenekstrakt neseutfordring utenfor pollensesongen. Studiedeltakere vil i utgangspunktet gjennomgå 3 påfølgende dager med neseallergenutfordring og deretter følges tett opp i en periode på 1 år. For å vurdere klinisk respons på allergeneksponering, vil etterforskerne bruke hudpriktesten (SPT), total nasal symptomscore (TNSS), nasal endoskopi og Peak Inspiratory Nasal Flow Meter (PNIF). For å vurdere immunologiske reaksjoner vil det bli tatt prøver inkludert blod, neseslimhinneprøver og nesesekret.

Studere design

I denne enkeltsenter, randomiserte, placebokontrollerte, dobbeltblinde studien vil totalt 36 (6 for en forstudie) pasienter bli rekruttert til denne studien på frivillig basis og vil bli randomisert til å motta en neseutfordring med begge bjørkene. pollenekstrakt eller placebo. Randomisering vil bli stratifisert i henhold til Bet v 1-spesifikke IgE-nivåer for å tillate lik fordeling i begge grupper. 30 Studiedeltakere vil motta nasal provokasjon utenom bjørkepollensesongen med enten bjørkepollenekstrakt eller placebo i tre påfølgende dager og vil deretter bli fulgt opp med jevne mellomrom i inntil fire måneder.

I utgangspunktet, før studien på 30 pasienter, vil 6 personer som er allergiske mot bjørkepollen gjennomgå en kort protokoll for å sikre at

1. Allergenkonsentrasjonen som brukes til nasal provokasjon er tilstrekkelig til å fremkalle en økning av IgE-antistoffer
2. At titreringene av hudpriktesten er tilstrekkelige

3. At tidspunktet for å ta nesesekret for bestemmelse av mediatorer er tilstrekkelig.

   Skulle resultatene fra disse 6 pasientene avsløre at enten neseallergenkonsentrasjon, hudtesttitreringer eller tidspunkt for nesesekret ikke er tilstrekkelig, vil en endring bli sendt til den etiske komiteen.

   Den forkortede protokollen vil inkludere 5 besøk:

   • komplett screeningbesøk
   • komplett besøk N1
   • besøk N2 uten blodprøvetaking og uten neseprøve
   • besøk N3 uten blodprøvetaking og uten neseprøve
   • komplett besøk N7

   Screening besøk

   Fremgangsmåte

   • Signering av skjemaet for informert samtykke (versjon 2.1. for innledende studie med kort protokoll, versjon 1.8 (oppdatert for utvidelse) for hovedstudie)
   • Tildeling av visningsnummer
   • Demografisk data
   • Historie med allergi
   • Vurdering av inn- og eksklusjonskriterier
   • Graviditetstest for kvinner ved behov for SPT
   • Medisinsk historie
   • Samtidig medisinering
   • Fremre rhinoskopi
   • Standard SPT med kommersielt ekstrakt fra: hassel, ask, gressblanding, ragweed, bynke, D. pteronyssinus, D. farina, katte- og hundefass, alternaria, cladosporium, histamin og negativ kontroll
   • Titrert hudstikkprøve med kommersielt bjørkepollenekstrakt
   • Blodprøvetaking (maks 60ml heparinisert blod og serum) - En del av blodprøven vil bli sendt direkte til laboratoriet for analyse av basofil aktivering, total IgE, og spesifikt IgE til relevante allergener. Fra resten av blodet vil RNA bli tilberedt og lagret ved -80°C og serum vil bli separert og lagret ved -20°C
   • neseprøvetaking (neseskylling, mucosal curette prøvetaking og nasal sekresjon prøvetaking)

   Besøk N0

   Krav til tidspunkt: Besøk N0 er planlagt mellom 2 uker og 4 dager før besøk N1. Dette er kun for pasienter som ble screenet mer enn 3 uker før besøk N1

   Fremgangsmåte:

   • Blodprøvetaking
   • Innsamling av neseprøver (skylling, mukosal kyrettprøve og prøvetaking av nesesekret)
   • Titrert SPT
   • PNIF
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk N1

   Fremgangsmåte:

   • Revurdering av inn- og eksklusjonskriterier (allergenspesifikke IgE-resultater)
   • Randomisering: Forsøkspersonene vil bli tildelt et behandlingsnummer
   • Baseline Blodprøvetaking
   • Grunnlinjeinnsamling av neseprøver (skylling, prøvetaking av neseslimhinne og prøvetaking av sekresjon fra nese)
   • Baseline TNSS-poengsum
   • Bivirkningsregistrering (AE).
   • Samtidig medisinering
   • PNIF gitt til pasienter og forklaring/demonstrasjon av hvordan det fungerer. Pasientene vil få en papirdagbok for å holde styr på daglige PNIF-verdier (fra N1 til N5). Dette meieriet vil også bli brukt til å registrere daglige TNSS-score (N4-N5).
   • Graviditetstest
   • i. administrering av bjørkepollenekstrakt eller placebo
   • Dokumentasjon av symptomer umiddelbart etter provokasjon
   • Blod, PNIF, neseprøvetaking (neseskylling, mucosal curette prøvetaking og nasal sekresjon prøvetaking) og TNSS score, 20 min, 40 min, 1 t, 2 timer, 4 timer, 20-24 timer etter administrering av bjørkepollenekstrakt (20-24 timers tidspunkt vil bli utført ved besøk N2).
   • Neseprøvetaking, PNIF og TNSS score ved 10 minutter, 3 timer, 5 timer, 6 timer, 7 timer, 8 timer etter administrering av bjørkepollenekstrakt
   • Titrert SPT
   • administrering av redningsmedisin om nødvendig (azelastin nesespray, desloratadin 5mg)

   Besøk N2

   Krav til timing:

   Besøk N2 er planlagt dagen etter besøk N1

   Fremgangsmåte:

   • Blod, PNIF, neseprøvetaking (skylling, mucosal curette prøvetaking og nasal sekresjon prøvetaking) og TNSS score (20-24 timers tidspunkt etter administrering av bjørkepollenekstrakt i N1).
   • AE-opptak
   • Samtidig medisinering
   • i. administrering av bjørkepollenekstrakt eller placebo etterfulgt av en observasjonsperiode på 2 timer
   • Dokumentasjon av symptomer umiddelbart etter provokasjon
   • administrering av redningsmedisin om nødvendig (azelastin nesespray, desloratadin 5mg)
   • Merk: i de innledende 6 studiepersonene vil ikke nese- og blodprøvetaking bli utført

   Besøk N3

   Krav til timing:

   Besøk N3 er planlagt dagen etter besøk N2

   Fremgangsmåte:

   • Blodprøvetaking før provokasjon
   • Innsamling av neseprøver før provokasjon (skylling, mucosal curette prøvetaking og nasal sekresjon prøvetaking)
   • TNSS-score før provokasjon
   • Titrert SPT
   • Bivirkningsregistrering (AE).
   • Samtidig medisinering
   • i. administrering av bjørkepollenekstrakt eller placebo
   • Dokumentasjon av symptomer umiddelbart etter provokasjon
   • Blod, PNIF, neseprøvetaking (skylling, mucosal curette prøvetaking og nasal sekresjon prøvetaking) og TNSS score 20 min, 40 min, 1 t, 2 t, 4 timer, 20-24 timer og etter administrering av bjørkepollenekstrakt (20-24 timers tidspunkt vil bli utført kl. besøk N4).
   • Neseprøvetaking, PNIF og TNSS score ved 10 minutter, 3 timer, 5 timer, 6 timer, 7 timer, 8 timer etter administrering av bjørkepollenekstrakt
   • Administrering av redningsmedisin om nødvendig (azelastin nesespray, desloratadin 5mg)
   • Merk: i de innledende 6 studiepersonene vil ikke nese- og blodprøvetaking bli utført

   Besøk N4

   Krav til timing:

   Besøk N4 er planlagt dagen etter besøk N3

   Fremgangsmåte:

   • Blod, PNIF, neseprøvetaking (skylling, mucosal curette prøvetaking og nasal sekresjon prøvetaking) og TNSS score 20-24 timer etter administrering av bjørkepollenekstrakt.

   Besøk N5

   Besøk N5 er planlagt 14 ±4 dager etter besøk N4:

   Fremgangsmåte:

   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • PNIF
   • Titrert SPT
   • TNSS-poengsum
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden
   • Samling av papirdagbok fra Visit N1 til N5

   Besøk N6

   Krav til timing:

   Besøk N6 er planlagt 14 ±4 dager etter besøk N5

   Fremgangsmåte:

   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • PNIF
   • Titrert SPT
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk N7

   Krav til timing:

   Besøk N7 er planlagt 14 ±4 dager etter besøk N6

   Fremgangsmåte:

   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • PNIF
   • Titrert SPT
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk N8

   Krav til timing:

   Besøk N8 er planlagt 14 ±4 dager etter besøk N7

   Fremgangsmåte:

   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • PNIF
   • Titrert SPT
   • score
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk N9

   Krav til timing:

   Besøk N9 er planlagt 14 ±4 dager etter besøk N8

   Fremgangsmåte:

   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • PNIF
   • Titrert SPT
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk N10

   Krav til timing:

   Besøk N9 er planlagt 14 ±4 dager etter besøk N9

   Fremgangsmåte:

   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • PNIF
   • Titrert SPT
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk N11 - Endelig besøk av neseprovokasjonskomponent

   Krav til timing:

   Besøk N11 er planlagt 28 ±4 dager etter besøk N10

   Fremgangsmåte:

   • Blod for immunologiske parametere og neseprøvetaking (vasking, slimhinnekurette og nesesekresjonsprøve)
   • PNIF
   • Titrert SPT
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk S1 (utvidelse – godkjent av MUWs etiske komité 11. februar 2019)

   Krav til timing: Besøk S1 er planlagt 4 uker før forventet start på bjørkesesongen (+/- 7 dager)

   Fremgangsmåte:

   • Papirpollen og PNIF-dagbok forklarte pasientene og bedt om å fylle ut daglig i bjørkesesongen
   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • Titrert SPT
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk S2

   Krav til timing: Besøk S2 er planlagt 4 uker etter slutt på bjørkesesongen (+/- 7 dager)

   Fremgangsmåte:

   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • Samlepapirdagbok
   • Observert PNIF
   • Titrert SPT
   • TNSS-score ved besøk
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk S3

   Krav til timing:

   Besøk S3 er planlagt 4 uker etter besøk S2 - (+/- 7 dager)

   Fremgangsmåte:

   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • Observert PNIF
   • Titrert SPT
   • TNSS-score ved besøk
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden

   Besøk S4 og Slutt på studiet

   Krav til timing:

   Besøk S4 er planlagt 1 år etter oppstart av hele studiet (1 år etter besøk N0) +/- 7 dager

   Fremgangsmåte:

   • Blod- og neseprøvetaking (prøvetaking av skylling, slimhinnekyrett og nesesekresjon)
   • Observert PNIF
   • Titrert SPT
   • TNSS-score ved besøk
   • AE-opptak
   • Graviditetstest for kvinner hvis siste test var mer enn en måned siden
   • Slutt på studiet

   Beskrivelser av studieprosedyrer

   Sykehistorie til pasienter, demografiske data, samtidig medisinering Pasienter vil bli spurt om sin sykehistorie inkludert demografiske data og samtidig medisinering, deres allergiske symptomer inkludert intensitet og varighet og deres allergiske medisinhistorie.

   Historie med allergi og TNSS-score

   Pasienter vil bli bedt om forekomst av nysing, rhinoré, nesepruritus, nesetetthet og søvnkvalitet og om å gradere hvert symptom ved hvert besøk og føre journal hjemme. De vil bruke følgende symptomscoremetode: 0 = fraværende; 1 = mild - tilstede, men lett tolerert; 2 = moderat - tilstede, symptom er plagsomt, men forstyrrer ikke dagliglivets aktiviteter; 3 = alvorlig - symptom er vanskelig å tolerere og forstyrrer dagliglivets aktiviteter (24). I tillegg til dette vil det være en visuell analog skala over total sykdomsbelastning på skjemaet.

   Fremre rhinoskopi

   Fremre rhinoskopi vil bli utført én gang under screeningbesøket for å utelukke anatomiske varianser (f. septumavvik) eller patologiske endringer (f.eks. nesepolypper). Det vil bli utført ved å bruke et spekulum med pasienten sittende med hodet litt bakover.

   Peak Inspiratory Nasal Flow Meter (PNIF)

   Portabiliteten og enkelheten til PNIF gir en unik mulighet til å oppnå objektive målinger mens pasientene er hjemme. Det har også nylig blitt validert som et studieverktøy under neseallergenutfordring.

   Fremgangsmåte:

   Ved besøk vil 1 pasienter bli opplært i bruk av PNIF-enheten (In-check, Inspiratory flommåler) og vil få en som kan tas med hjem frem til N5. PNIF bruker et rør med variabel diameter kalibrert direkte i liter per minutt sammen med en indikatorring med lav treghet. Posisjonen til ringen etter en inspirasjonsmanøver indikerer maksimal strømning som oppnås. Enheten fungerer når en pasient inhalerer gjennom munnen eller nesen, dette fører til at luft trekkes gjennom måleren og en markør beveger seg langs skalaen for å indikere inhalasjonshastigheten. Den oppnådde strømningshastigheten kan noteres ved å kontrollere posisjonen til markøren mot den kalibrerte skalaen.

   PNIF i studiegjennomføring:

   PNIF vil bli gitt til studiedeltakerne å ta med hjem slik at de kan holde et daglig eller ukentlig meieri (avhengig av fasen av studien) av neseluftstrømmen. De vil også bli bedt om å ta dem med til alle studiebesøk slik at observerte PNIF-målinger kan tas.

   Hudstikktest

   4.5.1 Fremgangsmåte: Allergener settes inn i dermis på underarmen ved å stikke huden forsiktig gjennom en dråpe (20 ul) av en allergenholdig løsning med en steril lansett med minst 2 cm mellom hvert enkelt påføringspunkt. 0,9 % natriumkloridløsning vil bli brukt som negativ og histamin som positiv kontroll. Hos tidligere sensibiliserte individer vil kløende hevelse og en rødhet i huden (hvit- og oppblussreaksjon) oppstå innen 15 minutter etter utfordring med det respektive allergenet. Etter 20 minutter vil allergenløsninger bli tørket av og marginene til skjærene spores med en kulepenn. Gjennomsiktig tape vil limes på huden for å overføre omrisset av hvelvet til tapen for postene. Overflaten til hvalene vil bli beregnet ved hjelp av digital planimetri. For inkludering vil hvaler med en diameter på minst 3 mm anses som positive reaksjoner.

   Testløsninger:

   Kommersielt tilgjengelig bjørkepollenekstrakt og et panel av tre- og gresspollen, ugress- og flerårige allergener (Allergopharma, Wien, Østerrike) vil bli brukt ved screeningbesøket og vil bli lagret i henhold til produsentens instruksjoner. Som kontroller vil steril 0,9 % NaCl-løsning (negativ kontroll) og histamin (positiv kontroll, Allergopharma, Wien, Østerrike) brukes. De vil bli lagret i henhold til produsentens instruksjoner.

   SPT i studiegjennomføring:

   Screening besøk:

   En standard hudpriktest med kommersielt bjørkepollenekstrakt og et panel av tre- og gresspollen, ugress- og flerårige allergener (alle Allergopharma, Wien, Østerrike) som brukes i rutinediagnostikk i allergiklinikken til ØNH-avdelingen vil bli utført for å vurdere pasientens sensibiliseringsprofil ved screeningbesøket.

   Screening og besøk N0, N5 - N11, S1-S4 En titrert hudpriktest til bjørkeekstrakt vil bli utført med økende fortynninger (fortynninger økes med en faktor 3 opp til 1:60 000 (=11 fortynningstrinn) for å bestemme den laveste konsentrasjonen som fremkaller en hudrespons. Hudprøver for alle fortynninger vil bli utført i firedoblet. Kommersiell positiv kontrollløsning (histamin) og negativ kontroll vil bli utført i duplikater.

   Sikkerhetstiltak Som en sikkerhetstiltak vil pasienter overvåkes i 30 minutter etter testing. Alle undersøkelser vil bli gjort i poliklinikken ved ØNH-avdelingen, hvor fullt akuttutstyr er tilgjengelig.

   Blodprøvetaking og måling av immunologiske parametere

   Det vil bli tatt blodprøver ved screeningbesøket og ved alle studiebesøk ved punktering av antecubitalvenen før hudtesting. Maksimalt 60 ml per besøk vil bli tatt enten heparinisert (f.eks. for basofile sensitivitetsanalyser) eller for fremstilling av serum (f.eks. for vurdering av totale og allergenspesifikke immunglobulinnivåer eller RBL-analyse). Serumampuller vil bli behandlet og serum vil bli lagret ved -20°C. Allergenspesifikk IgE av blodprøver fra screeningbesøket vil bli målt av CAP-FEIA for å vurdere den allergenspesifikke RAST-klassen til pasientene. Måling av totalt, fritt og allergenspesifikk serum IgE, IgG, IgA og IgM vil utføres enten ved CAP-FEIA, ved mikroarraymåling eller ELISA. Målingen vil bli utført på slutten av studien i alle innsamlede serumprøver for å minimere interassayvariasjoner. Måling av basofile responser på allergen, fMLP og anti-IgE vil bli utført ved hvert besøk. Kort fortalt vil basofiler eksponeres for ulike konsentrasjoner av anti-IgE, fMLP eller rekombinante allergener i 15 minutter og deretter undersøkes for ekspresjon av CD 63 og CD203c ved hjelp av flowcytometri. Alternativt vil histaminfrigjøring bli bestemt av kommersielt tilgjengelige histaminfrigjøringssett.

   Graviditetstesting

   Hos kvinnelige pasienter vil graviditet utelukkes med en standard uringraviditetstest. Testen vil bli utført før første hudstikkprøve ved screeningbesøket og etterpå en gang i måneden.

   Samling av neseprøver

   Innsamling av neseprøver vil bli utført ved alle besøk. For hvert besøk vil det bli tatt prøver ved bruk av nasosorpsjon FXi/PU (som inneholder en syntetisk absorberende matrise (SAM)), eller en 10 cm lang plastkyrett (Begge enheter fra Hunt Developments, Storbritannia)

   Nasosorpsjon ved bruk av FXi/PU (Hunt Developments, Storbritannia):

   Under visualisering vil enheten settes inn i nesehulen og plasseres langs sideveggen mot den nedre turbinatet. Pasientens pekefinger vil bli brukt til å trykke på de ytre sidene av alarmen og laterale nesebruskene for å holde enheten på plass. Etter 1 minutt vil enhetene fjernes og væsken ekstraheres ved sentrifugering. Supernatanten vil fryses ved -70°C inntil videre analyse for tilstedeværelse av allergenspesifikke og totale Ig-nivåer, mediator- og cytokinnivåer.

   Slimhinne-mRNA-prøvetaking En 10 cm nesekyrett vil bli brukt. Under direkte visualisering vil kyretten bringes til å ligge mot den midtre nedre delen av den nedre turbinaten. Curetten vil bli presset mot slimhinneoverflaten flyttet utover 2-3 ganger. Denne bevegelsen gjentas 2-3 ganger for å sikre god prøvesamling. Denne kyretten og teknikken har vist seg å ikke forårsake betydelig ubehag for pasienter, og den har derfor fordelen av at det ikke er behov for lokalbedøvelse. Etter innsamling vil cellene lyseres i Qiagen RLT-buffer og lagres ved -70C for senere mRNA-analyse.

   4.9 Intranasal utfordring

   Bjørkepollenekstrakt (Allergopharma, Wien, Østerrike) vil bli ferskt fortynnet i steril 0,9 % natriumkloridløsning og vil bli administrert ved hjelp av en målerpumpe. Allergenet vil bli administrert med en målt pumpe som leverer 15 μl per drag til begge neseborene ved besøk N1, N2, N3. Hvis pasienten lider av nese- eller øyesymptomer etter utfordringen, vil azelastin nesespray eller desloratadin 5 mg bli gitt.

   Randomiseringsprosedyre

   Ved besøk N1 i hovedstudien vil pasientene bli randomisert til en av de to gruppene (bjørkepollenekstrakt eller placebo). Studieemner vil bli randomisert (forhold 2:1 for provokasjon versus kontroll) ved hjelp av det online randomiseringsprogrammet "randomizer" (www.meduniwien.ac.at/randomizer), som vedlikeholdes ved Institutt for medisinsk informatikk, statistikk og dokumentasjon ved Medical Universitetet i Graz, Graz, Østerrike. Forholdet 2:1 er valgt fordi variansen av Ig-målinger og avledede mengder forventes å være større i provokasjonsgruppen på grunn av forventet større totale Ig-nivåer, se også prøvestørrelsesbetraktningene senere i dette dokumentet.

   Randomiseringen vil bli utført av en person som ikke er involvert i studien og ikke har kontakt med pasientene for å sikre at studien blir dobbeltblindet.

   Utredningsprodukter og studiemedisin

   Bjørkepollenekstrakt:

   Bjørkepollenekstrakt (Allergopharma, Wien, Østerrike) vil bli brukt for intranasal utfordring. Bjørkepollenekstrakt vil ankomme frysetørket og vil bli oppløst i sterilt 0,9 % natriumklorid. Innholdet av Bet v 1 i ekstraktet vil bli bestemt ved immunblotting ved bruk av antistoffprober spesifikke for Bet v 1. Til slutt vil ekstraktet fortynnes slik at sluttkonsentrasjonen av Bet v 1 blir 50 μg/ml slik denne konsentrasjonen tidligere har vært. vist seg å fremkalle endringer i spesifikke IgE-nivåer ved nasal utfordring.

   Kontrollløsninger:

   Kontrollløsninger vil omfatte natriumklorid 0,9 % som negativ kontroll for hudpriktest og som placebo for intranasal utfordring. Histamin (Allergopharma, Wien, Østerrike) vil bli brukt som positiv kontroll for hudpricktesten. De vil bli lagret i henhold til produsentens instruksjoner.

   Samtidig medisinering

   Generell:

   All tilleggsmedisin som tas av forsøkspersonene ved inntreden i studien eller på et hvilket som helst tidspunkt i løpet av studien regnes som samtidig medisinering og vil bli dokumentert i kildedatafilen. Samtidig medisinering bør holdes på et minimum under studien, men hvis det anses nødvendig kan det gis dersom det ikke forstyrrer studieprotokollen.

   Redningsmedisin:

   Selv om anafylaktiske hendelser er svært usannsynlige i denne studien, må de alltid anses som mulige. Derfor vil et komplett nødsett være tilgjengelig umiddelbart i tilfelle anafylaktiske reaksjoner ved SPT eller nasal utfordring. Hvis pasienten lider av nese- og øyesymptomer etter den intranasale utfordringen, vil azelastin nesespray og/eller desloratadin 5 mg gis for å lindre symptomene.

   Forbudt samtidig medisinering:

   Forsøkspersonene må holde seg unna medisiner som forstyrrer studieprosedyrene så lenge studien varer. Følgende samtidige behandlinger er ikke tillatt under denne studien:

   • Systemiske eller aktuelle kortikosteroider
   • Andre immundempende legemidler
   • Antihistaminer eller dinatriumkromoglykat 3 dager før besøk
   • Systemiske eller intranasale adrenerge legemidler
   • Psykofarmakologiske legemidler
   • ACE-hemmere eller betablokkere

   Uønskede hendelser

   En uønsket hendelse er enhver hendelse under en klinisk studie, inkludert samtidig sykdom eller ulykke, som svekker individets velvære; det kan også ha form av en unormal laboratorieverdi. Begrepet uønsket hendelse innebærer ikke en årsakssammenheng med studiebehandlingen.

   Alle forsøkspersoner som opplever uønskede hendelser - enten de anses forbundet med bruken av studiebehandlingen eller ikke - vil bli overvåket til symptomene avtar og eventuell unormal laboratorieverdi har returnert til baseline, eller til det er en tilfredsstillende forklaring på endringene som er observert, eller til døden. , i så fall vil en fullstendig patologirapport fra en kvalifisert patolog bli gitt. Alle funn skal rapporteres på en «uønsket hendelse»-side i saksjournalskjemaet.

   Alle uønskede hendelser vil bli rapportert om og dokumentert som beskrevet nedenfor. Uønskede hendelser er delt inn i kategoriene "alvorlige" og "ikke-alvorlige". Dette bestemmer prosedyren som skal brukes for å rapportere/dokumentere den uønskede hendelsen.

   Definisjon av alvorlige og ikke-alvorlige uønskede hendelser

   En alvorlig bivirkning er:

   • Enhver hendelse som er dødelig eller livstruende
   • Enhver hendelse som er permanent deaktivert
   • Enhver hendelse som krever eller forlenger sykehusinnleggelse
   • Enhver hendelse som involverer kreft, medfødt abnormitet eller oppstår som et resultat av overdose (påføring av mer enn den fastsatte dosen).

   Bivirkninger som ikke faller inn under disse kategoriene, er definert som ikke-alvorlige.

   Vurdering av alvorlighetsgraden av AE

   Uavhengig av klassifiseringen av en bivirkning som alvorlig eller ikke-alvorlig (se ovenfor), må alvorlighetsgraden vurderes som mild, moderat eller alvorlig, i henhold til medisinske kriterier alene:

   Mild = forstyrrer ikke rutineaktiviteter, akseptabel Moderat = forstyrrer rutinemessige aktiviteter Alvorlig = umulig å utføre rutinemessige aktiviteter, anses som uakseptabel av legen, krever behandling, krever seponering av studien eller har resteffekt.

   Det skal bemerkes at en alvorlig uønsket hendelse ikke trenger å være alvorlig. Uavhengig av alvorlighetsgrad skal alle alvorlige bivirkninger rapporteres som nedenfor.

   Rapportering/dokumentasjon av uønskede hendelser

   Bivirkninger samles inn ved spontanrapportering.

   Rapportering/dokumentasjon av alvorlige uønskede hendelser

   Alle alvorlige uønskede hendelser som oppstår i løpet av denne studien, enten de anses å være assosiert med studiemedisinen eller ikke, skal dokumenteres på en "Uønsket hendelse"-side i saksjournalskjemaet.

   Det skal utarbeides en oppfølgingsrapport med all ny informasjon som er innhentet om den alvorlige hendelsen og vil bli samlet inn.

   Etterforskeren vil på forespørsel sende inn kopier av alle disse rapportene til den etiske komiteen. Der det er nødvendig vil etterforskerne informere myndighetene.

   Rapportering/dokumentasjon av ikke-alvorlige uønskede hendelser

   Disse skal dokumenteres på en «Uønsket hendelse»-side i saksjournalskjemaet.

   Statistisk analyse

   Siden dette er en pilotstudie, anses den utførte analysen som utforskende og hypotesegenererende.

   Pasientkarakteristikker og utfallsvariabler vil bli beskrevet ved å beregne maksimum, minimum, median, gjennomsnitt og standardavvik for metriske variabler og absolutte og relative frekvenser for kategoriske variabler.

   For å analysere tidsbaner for IgE-nivåer og andre utfallsvariabler, vil beskrivende statistikk samt 95 % konfidensintervaller for gjennomsnittet beregnes for hvert tidspunkt og hver behandlingsgruppe separat. For å ta hensyn til heterogene baseline-nivåer mellom pasienter, vil de observerte resultatene for hver pasient bli standardisert av de respektive baseline-verdiene for disse analysene. Videre vil gjennomsnittlige forskjeller mellom grupper og i henhold til 95 % konfidensintervaller beregnes for hvert tidspunkt. For grafisk illustrasjon vil de individuelle banene til hver pasient plottes.

   Dataene som ble observert i hudstikktesten består av en serie allergendoser og de resulterende områdemålingene. Basert på foreløpige data fra åtte pasienter i tidligere studie, ble det funnet at en eksponentiell modell av typen Area = A*(1-exp(-λ Dose) på en passende måte beskriver dose-respons-forholdet observert i hudstikktesten. Modellen vil passe for hvert tidspunkt i hver gruppe ved å bruke en ikke-lineær minste kvadraters algoritme. Fra disse modellene vil responsraten λ, platåområdet A og den 50 % effektive dosen rapporteres sammen med 95 % konfidensintervaller.

   Hvis det mangler verdier, vil all analyse bli gjort på et tilgjengelig saksgrunnlag.

   Betraktninger om prøvestørrelse:

   Gitt den utforskende karakteren til studien, er prøvestørrelsesbetraktningene basert på presisjonen til parameterestimater. Hovedmålet er analyse av IgE-nivåer over tid. Dato fra en tidligere studie viser en relativ økning av anti-Bet v 1 IgE fire uker etter nasal provokasjon med Bet v 1 med en gjennomsnittlig faktor på 1,4 og et standardavvik på ca. 0,5 mellom pasientene. Med et kontrollantigen var gjennomsnittsfaktoren 1,04 med et standardavvik på ca. 0,25. Maksimal statistisk presisjon for en sammenligning av middelverdier mellom de to gruppene oppnås hvis allokeringsforholdet er proporsjonalt med forholdet mellom standardavvik, som er 2:1 basert på tidligere data. Under de ovennevnte forutsetningene om effektstørrelser og standardavvik, vil en total prøvestørrelse på 30 (20:10) gi 95 % konfidensintervall med en halvbredde på omtrent 0,2 i hver gruppe. Den forventede halvbredden av et 95 % konfidensintervall for gjennomsnittlig forskjell mellom grupper er 0,28. (En tilsvarende to-prøve t-test vil ha en kraft på 80 % for å oppdage en gjennomsnittlig forskjell på 0,4 ved et 5 % signifikansnivå). For analysen av hudstikktesten antyder de foreløpige dataene at med en prøvestørrelse på 20, vil halvbredden på 95 % konfidensintervaller for den 50 % effektive dosen være omtrent 0,25 ganger den 50 % effektive dosen, som anses som som tilstrekkelig presisjon for denne pilotstudien. Se vedlegg for grafisk fremstilling

   Etiske og juridiske aspekter

   Studien vil bli utført i tråd med lokale lovkrav og GCP. Den vil bli utført i samsvar med retningslinjene i Helsinki-erklæringen (1964), inkludert gjeldende revisjoner.

   Informert samtykke fra subjektet

   Før opptak til studien må forsøkspersonen ha samtykket til å delta etter at arten, omfanget og mulige konsekvenser av den kliniske studien er forklart i en for ham/henne forståelig form. Observanden må gi skriftlig samtykke. Underskriften til etterforskeren vil bekrefte forsøkspersonens samtykke. Pasienten kan trekke tilbake samtykket, selv uten å gi kommentarer, når som helst og uten negative konsekvenser for hans fremtidige medisinske behandling.

   Bekreftelse/godkjenning av studien

   Før studiestart vil studieprotokollen sendes til den etiske komiteen ved det medisinske universitetet i Wien og det generelle sykehuset i Wien (Borschkegasse 8b/E 06, 1090 Wien, Østerrike).

   Forsikring

   Alle forsøkspersoner som deltar i denne studien vil være forsikret hos Zürich Insurance Company (Zürich-Versicherungs-Aktiengesellschaft, Schwarzenbergplatz 15, 1010 Wien, tlf. +43 50 1255 1255; forsikringsnummer: 07229622-2).

   konfidensialitet

   Alle forsøkspersoners navn vil bli holdt hemmelig i etterforskernes filer. Forsøkspersonene vil bli identifisert gjennom dokumentasjonen og evalueringen ved antall tildelt dem under studien. Forsøkspersonene vil bli fortalt at alle studiefunn vil bli lagret og håndtert strengt konfidensielt.

   Dokumentasjon og bruk av studiefunn

   Dokumentasjon av studiefunn

   Alle resultater samlet inn i løpet av studien vil bli samlet i en kildedatafil og vil senere bli overført til saksrapportskjemaene (CRF). Alle oppføringer på saksjournalskjemaene vil bli gjort leselig med svart eller blått blekk. Dersom det foretas rettelser i oppføringer i saksjournalskjemaet, vil ordene eller tallene bli ringmerket og et enkelt strøk trukket gjennom dem. Den riktige verdien vil bli lagt inn ved siden av den gamle oppføringen og datoen, og korrigeringen vil bli initialisert. Feil inntastinger må ikke dekkes med korrigeringsvæske eller slettes eller gjøres uleselige på noen måte. De utfylte CRF-ene vil bli signert av etterforskeren. CRF vil bli gjennomført umiddelbart etter avsluttende eksamen. De medisinske journalene som CRF er basert på, vil bli oppbevart i minst 15 år.

   Bruk av studiefunnene

   Resultatene av denne studien vil bli publisert av etterforskerne i et vitenskapelig tidsskrift og presentert i vitenskapelige møter. Manuskriptet vil bli sirkulert til alle medetterforskere før innlevering.