OSMF에서 상피 중간엽 전이 표지자
조직 샘플 및 타액에서 EMT(Epithelial Mesenchymal Transition) 시그니처를 사용한 구강 점막하 섬유증의 악성 변형 위험 평가
구강점막하 섬유증(OSMF)은 본질적으로 아레카넛 씹는 습관에 의해 유발된 콜라겐 대사와 상처 치유 메커니즘 사이의 불균형입니다. 임상적으로 이 질병은 화끈거림, 매운 음식에 대한 과민증, 특히 구개에 수포, 구강 궤양 및 건조, 구강 점막의 섬유화, 입술, 혀 및 입천장 경직, 마지막으로 트리스무스를 나타내는 환자와 함께 단계적으로 진행됩니다. 질병이 점진적으로 쇠약해지고 악성 암으로 발전할 가능성이 있기 때문에 조기 진단을 위해 평가할 수 있는 조직 또는 타액 마커가 있는지 평가하고 악성 변형이 있는 경우 이를 나타내는 연구가 설계되었습니다.
OSMF와 습관력이 있는 참가자, OSMF는 없지만 습관력이 있는 환자는 OSMF가 없고 습관력이 없는 정상 환자가 대조군인 케이스 그룹을 구성했습니다. 연구 참여에 동의한 적격 후보자는 생검 절차를 밟았고 타액 샘플도 수집했습니다. 생검 샘플은 vimentin, e-cadherin 및 콜라겐 IV와 같은 EMT 마커를 평가하기 위해 면역조직화학(IHC) 및 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 받았습니다. 타액에서 miRNA 사본을 추출하고 RT-PCR을 수행했습니다.
연구 질문은 다음과 같습니다.
- EMT는 오픈스트리트맵 재단의 긍정적인 특징입니다.
- OSMF의 조직병리학적 등급 및 이형성증은 EMT와 상관관계가 있습니까?
- 비정상적인 EMT 마커가 초기 악성 변형의 위험 평가를 위한 신뢰할 수 있는 지표가 될 수 있습니까?
- 타액에서 mi RNA 21의 발현이 질병의 중증도를 예측하고 더 중요하게는 OSMF에서 조기 악성 변형의 위험을 평가할 수 있습니까?
연구 개요
상세 설명
EMT(Epithelial-mesenchymal transition)는 세포가 상피 특성을 버리고 보다 중간엽 및 침습적인 표현형을 채택하는 과정을 설명합니다. 배아 발달(상피 중간엽 이행) 동안 상피 세포와 중간엽 세포 사이의 지속적인 분자 혼선이 필요하며 아마도 상처 치유 및 종양 진행과 같은 병리학적 과정에서 중요한 역할을 할 것입니다. 암종의 발생은 표적 상피 내의 유전적 변화에 기인한다. 정상 상피가 잠재적 악성 및 편평 세포 암종으로 전환됨에 따라 간질도 정상에서 활성화되거나 간질 반응이라고 하는 관련 종양으로 바뀝니다. 10 EMT는 근섬유모세포에서 볼 수 있듯이 α-평활근 액틴(αSMA)을 발현하는 중간엽 세포를 생성할 수 있습니다. 그러나 기능적 근섬유아세포가 섬유증에서 보이는지 또는 상피 또는 내피 세포에서 유래된 암인지는 불분명합니다.
따라서 이 연구에서는 OSMF의 EMT 마커를 평가했습니다. 다음과 같이 선택된 마커:
- miRNA-21은 종양이 진행되는 동안 세포 증식, 세포사멸 및 상피에서 중간엽으로의 전이를 조절하고 다양한 암에서 상향 조절됩니다. miRNA-21의 발현 증가는 근섬유모세포에서 나타납니다.12 우리는 OSMF에서 근섬유모세포의 역할을 알고 있기 때문에 mi RNA-21의 타액 발현이 마커로 포함되었습니다.
- 유형 IV 콜라겐은 분자 내 공유 결합을 통해 자가 결합하는 독특한 특징을 가지고 있어 기저막에 장벽 및 기계적 강도 특성을 제공합니다. OSMF에서 증가된 콜라겐 침착은 조직 표본의 조직학적 섹션에서 발견되는 근섬유아세포로 전환되는 수많은 섬유아세포를 포함합니다. 지속적인 근섬유모세포와 같은 변경된 미세 환경 또는 기질은 종양 형성 및 종양 진행을 초래하는 것으로 나타났습니다.
Cadherin은 칼슘 의존성 세포-세포 부착 특성으로 알려진 유형 1 막 횡단 단백질의 한 부류입니다. E-카드헤린은 조직 내의 세포가 서로 결합되도록 함으로써 세포 접착에서 중요한 역할을 하는 상피 세포에서 발견되는 이 단백질 계열의 구성원입니다. E-cadherin 기능 또는 발현의 손실은 암 진행 및 전이와 관련이 있습니다. 두경부 상피에서 E-cadherin 발현은 상피 조직의 형태 형성 및 항상성에 필수적입니다. 카드헤린-매개 세포-세포 접촉은 상피 세포의 고정-의존적 성장에 필요하다.
따라서 E-cadherin의 낮은 발현은 상피 완전성 상실의 신호입니다.
- 중간 필라멘트 단백질인 비멘틴은 세포 행동, 형태 및 기계적 특성의 조절에 관여합니다. Vimentin은 결합 조직에서 발현되는 EMT 마커입니다. 상피에서 vimentin의 발현은 EMT의 양성 신호이며 OSMF에서의 평가는 구강 섬유증에서 EMT 신호의 중요성을 밝힐 수 있습니다.
연구 유형
등록 (실제)
참여기준
자격 기준
공부할 수 있는 나이
건강한 자원 봉사자를 받아들입니다
연구 대상 성별
샘플링 방법
연구 인구
설명
포함 기준:
- OSMF의 임상 증상을 동반한 저작 습관의 병력이 있는 모든 환자.
- 1년 이상의 아레카넛 씹는 습관이 있고 OSMF의 임상 증상이 없는 환자.
- 발치를 위해 적응증이 있고 OSMF의 임상적 특징이 없고 습관력이 없는 건강한 지원자
제외 기준:
- 출혈 장애가 있는 환자
- 침의 흐름이나 구성을 바꿀 수 있는 침샘 장애로 진단받은 환자
공부 계획
연구는 어떻게 설계됩니까?
디자인 세부사항
코호트 및 개입
그룹/코호트 |
개입 / 치료 |
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습관이 있고 OSMF가 있는 환자
어떤 형태 및 구성의 아르카넛 씹는 습관의 병력이 있고 현재 상태에 대한 치료(예: OSMF)를 받지 않은 환자
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IHC 염색 및 PCR을 위한 생검 샘플
MiRNA 21 발현 분석을 위한 타액 샘플
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습관이 있고 OSMF의 임상 증상이 없는 환자
어떤 형태 및 구성의 아레카넛 씹는 습관의 병력이 있고 임상적으로 OSMF 증상이 없는 환자
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IHC 염색 및 PCR을 위한 생검 샘플
MiRNA 21 발현 분석을 위한 타액 샘플
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건강한 인간 지원자
견과류 씹는 습관의 병력이 없고 OSMF의 임상 증상이 없다고 보고한 환자
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IHC 염색 및 PCR을 위한 생검 샘플
MiRNA 21 발현 분석을 위한 타액 샘플
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연구는 무엇을 측정합니까?
주요 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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IHC의 모든 그룹에서 E-cadherin 수준의 발현 변화
기간: 검체채취일로부터 10일
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IHC의 경우: E-cadherin 양성 세포를 정의하는 데 사용된 기준은 상피 세포의 세포막에서 갈색 염색이었습니다. 양성으로 염색된 세포의 백분율은 다음과 같이 기록되었습니다. 양성 세포 점수의 백분율 세포 없음 0 ≤ 10% 1 11% -50% 2 51%-80% 3 ≥81% 4 염색 강도도 양성 대조군 조직과 비교하여 평가하고 그에 따라 점수를 매겼습니다. 강도 점수 마이너스 0 약함 1 보통 2 강함 3 |
검체채취일로부터 10일
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IHC의 모든 그룹에서 vimentin 수준의 발현 변화
기간: 검체채취일로부터 10일
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vimentin 양성 세포는 상피세포의 세포질에서 갈색으로 염색되었고; 양성으로 염색된 세포의 백분율은 다음과 같이 기록되었습니다. 양성 세포 점수의 백분율 세포 없음 0 ≤ 10% 1 11% -50% 2 51%-80% 3 ≥81% 4 염색 강도도 양성 대조군 조직과 비교하여 평가하고 그에 따라 점수를 매겼습니다. 강도 점수 마이너스 0 약함 1 보통 2 강함 3 |
검체채취일로부터 10일
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IHC의 모든 그룹에서 콜라겐 IV 수준의 발현 변화
기간: 검체채취일로부터 10일
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콜라겐 IV 양성 세포는 기저막 세포에서 갈색으로 염색되었고; 양성으로 염색된 세포의 백분율은 다음과 같이 기록되었습니다. 양성 세포 점수의 백분율 세포 없음 0 ≤ 10% 1 11% -50% 2 51%-80% 3 ≥81% 4 염색 강도도 양성 대조군 조직과 비교하여 평가하고 그에 따라 점수를 매겼습니다. 강도 점수 마이너스 0 약함 1 보통 2 강함 3 |
검체채취일로부터 10일
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Real Time-PCR을 사용하여 세 그룹 모두에서 miRNA 21의 발현 변화
기간: 검체채취일로부터 10일
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정상 샘플(N)에서 miRNA21의 발현을 1로 고려하여 모든 샘플의 발현을 계산했습니다. 사용된 공식은 다음과 같습니다: 복제 수 = (양 * 6.022x1023) / (길이 * 1x109 * 650)
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검체채취일로부터 10일
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PCR에서 E 카드헤린 수준의 변화
기간: 검체 채취 후 20일
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생검 샘플에서 DNA를 추출한 후 Primer Express 소프트웨어를 사용하여 E-cadherin용 프라이머를 설계하고 정량화를 위한 실시간 PCR을 위해 HPLC를 합성 및 정제했습니다.
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검체 채취 후 20일
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PCR에서 vimentin 수준의 변화
기간: 검체 채취 후 20일
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생검 샘플에서 DNA를 추출한 후 Primer Express 소프트웨어를 사용하여 Vimentin용 프라이머를 설계하고 정량화를 위한 실시간 PCR을 위해 합성 및 HPLC 정제했습니다.
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검체 채취 후 20일
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2차 결과 측정
결과 측정 |
측정값 설명 |
기간 |
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습관이 있는 OSMF 환자에서 임상적으로 질병 범주와 관련하여 e-cadherin 발현의 변화
기간: 검체채취일로부터 15일
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Kerr et al 분류 시스템에 따른 질병의 다양한 임상 발현에 대한 조직 샘플의 E 카드헤린 수준.
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검체채취일로부터 15일
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습관이 있는 OSMF 환자에서 조직학적으로 질병 범주에 따른 e-cadherin 발현의 변화
기간: 검체채취일로부터 15일
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Kanna 및 Andrade et al 분류 시스템에 따른 질병의 다양한 임상 발현에 대한 조직 샘플의 E 카드헤린 수준.
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검체채취일로부터 15일
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습관성 OSMF 환자에서 임상적으로 질병 범주에 따른 비멘틴 발현의 변화
기간: 검체채취일로부터 15일
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Kerr et al 분류 시스템에 따른 다양한 임상 발현에 대한 조직 샘플의 비멘틴 수준.
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검체채취일로부터 15일
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습관성 OSMF 환자에서 조직학적으로 질병 범주에 따른 비멘틴 발현의 변화
기간: 검체채취일로부터 15일
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Khanna 및 Andrade 분류 시스템에 따른 다양한 조직학적 발현과 관련하여 조직 샘플의 Vimentin 수준.
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검체채취일로부터 15일
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습관성 OSMF 환자에서 임상적으로 질병 범주에 따른 콜라겐 IV 발현의 변화
기간: 검체채취일로부터 15일
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Kerr et al 분류 시스템에 따른 다양한 임상 표현 범주에 대한 조직 샘플의 콜라겐-IV 수준.
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검체채취일로부터 15일
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습관이 있는 OSMF 환자에서 조직학적으로 질병 범주에 따른 콜라겐 IV 발현의 변화
기간: 검체채취일로부터 15일
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Khanna 및 Andred et al 분류 시스템에 따른 다양한 조직학적 발현과 관련하여 조직 샘플의 콜라겐-IV 수준.
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검체채취일로부터 15일
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습관이 있는 OSMF 환자에서 임상적으로 질병 범주에 따른 mi RNA 21 발현의 변화
기간: 검체채취일로부터 15일
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Kerr et al 분류 시스템에 따른 OSMF의 다른 임상적 발현에 대한 타액 샘플의 miRNA 21 수준.
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검체채취일로부터 15일
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습관이 있는 OSMF 환자에서 조직학적으로 질병 범주에 따른 mi RNA 21 발현의 변화
기간: 검체채취일로부터 15일
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Khanna 및 Andred et al 분류 시스템에 따른 다양한 조직학적 발현과 관련하여 타액 샘플의 miRNA 21 수준.
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검체채취일로부터 15일
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공동 작업자 및 조사자
간행물 및 유용한 링크
일반 간행물
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
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연구 완료 (실제)
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