Marcatori di transizione epiteliale mesenchimale in OSMF
Valutazione del rischio di trasformazione maligna nella fibrosi sottomucosa orale utilizzando le firme di transizione epiteliale mesenchimale (EMT) in campioni di tessuto e saliva
La fibrosi sottomucosa orale (OSMF) è essenzialmente uno squilibrio tra il metabolismo del collagene e il meccanismo di guarigione della ferita indotto dall'abitudine di masticare l'arecanut. Clinicamente la malattia progredisce in fasi con pazienti che presentano sensazione di bruciore, intolleranza al cibo piccante, vescicole in particolare sul palato, ulcerazione e secchezza della bocca, fibrosi della mucosa orale, che porta a rigidità delle labbra, della lingua e del palato e infine trisma. Poiché la malattia è progressivamente debilitante e ha il potenziale per trasformarsi in cancro maligno, è stato progettato uno studio per valutare se esistono marcatori tissutali o salivari che possono essere valutati per la diagnosi precoce e indicare eventuali trasformazioni maligne.
I partecipanti che avevano OSMF e storia di abitudine, pazienti senza OSMF ma storia di abitudine formavano il gruppo dei casi in cui i pazienti normali senza OSMF e nessuna storia di abitudine erano nel gruppo di controllo. I candidati idonei che hanno acconsentito a partecipare allo studio sono stati sottoposti a procedura di biopsia e sono stati raccolti anche i loro campioni di saliva. I campioni bioptici sono stati sottoposti a immunoistochimica (IHC) e reazione a catena della polimerasi (PCR) per valutare i marcatori EMT come vimentina, e-caderina e collagene IV. Le copie di miRNA sono state estratte dalla saliva e sono state sottoposte a RT-PCR.
La domanda di ricerca era:
- EMT è una firma positiva in OSMF.
- La classificazione istopatologica e la displasia nell'OSMF hanno qualche correlazione con l'EMT.
- I marcatori EMT aberranti possono essere un indicatore affidabile per la valutazione del rischio di trasformazione maligna precoce.
- L'espressione del mi RNA 21 nella saliva può prevedere la gravità della malattia e, cosa più importante, valutare il rischio di trasformazione maligna precoce nell'OSMF.
Panoramica dello studio
Stato
Condizioni
Intervento / Trattamento
Descrizione dettagliata
La transizione epiteliale-mesenchimale (EMT) descrive il processo mediante il quale le cellule perdono le loro proprietà epiteliali e adottano un fenotipo più mesenchimale e invasivo. Durante lo sviluppo embrionale (transizione epiteliale mesenchimale) è necessario un continuo cross talk molecolare tra le cellule epiteliali e mesenchimali e probabilmente svolge un ruolo importante nel processo patologico come la guarigione delle ferite e la progressione del tumore. Lo sviluppo dei carcinomi è dovuto ai cambiamenti genetici all'interno dell'epitelio bersaglio. Poiché vi è la conversione dell'epitelio normale in carcinoma potenzialmente maligno ea cellule squamose, anche lo stroma cambia da normale a attivato o associato al tumore, chiamato reazione stromale. 10 L'EMT può generare cellule mesenchimali che esprimono l'actina del muscolo liscio α (αSMA), come si vede nei miofibroblasti. Tuttavia, non è chiaro se i miofibroblasti funzionali osservati nella fibrosi o nel cancro derivino da cellule epiteliali o endoteliali
Quindi i marcatori EMT in OSMF sono stati valutati in questo studio. i seguenti marcatori scelti come:
- miRNA-21 regola la proliferazione cellulare, l'apoptosi e la transizione da epiteliale a mesenchimale durante la progressione neoplastica ed è sovraregolato in una varietà di tumori. Un'aumentata espressione di miRNA-21 è osservata nei miofibroblasti.12 Poiché conosciamo il ruolo dei miofibroblasti nell'OSMF, l'espressione salivare di mi RNA-21 è stata inclusa come marcatore.
- Il collagene di tipo IV ha la caratteristica unica di autoassociarsi attraverso legami covalenti intramolecolari, fornendo proprietà di barriera e resistenza meccanica alle membrane basali. L'aumento della deposizione di collagene nell'OSMF coinvolge numerosi fibroblasti che vengono convertiti in miofibroblasti trovati nelle sezioni istologiche dei campioni di tessuto. è stato dimostrato che un microambiente alterato o uno stroma come i miofibroblasti persistenti provocano tumorigenesi e progressione del tumore
Le caderine sono una classe di proteine transmembrana di tipo 1 note per la loro proprietà di adesione cellula-cellula dipendente dal calcio. Le E-caderine sono membri di questa famiglia di proteine presenti nelle cellule epiteliali che svolgono ruoli importanti nell'adesione cellulare assicurando che le cellule all'interno dei tessuti siano legate insieme. La perdita della funzione o dell'espressione della E-caderina è stata implicata nella progressione e nella metastasi del cancro. L'espressione della E-caderina nell'epitelio della testa e del collo è essenziale per la morfogenesi e l'omeostasi dei tessuti epiteliali. I contatti cellula-cellula mediati dalla caderina sono necessari per la crescita dipendente dall'ancoraggio delle cellule epiteliali.
Quindi una minore espressione di E-caderina è un segno di perdita di integrità epiteliale
- La proteina del filamento intermedio vimentina è coinvolta nella regolazione del comportamento cellulare, della morfologia e delle proprietà meccaniche. La vimentina è un marcatore EMT espresso nel tessuto connettivo. L'espressione della vimentina nell'epitelio è una firma positiva dell'EMT e la sua valutazione nell'OSMF può svelare l'importanza della firma EMT nella fibrosi orale.
Tipo di studio
Iscrizione (Effettivo)
Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Accetta volontari sani
Sessi ammissibili allo studio
Metodo di campionamento
Popolazione di studio
Descrizione
Criterio di inclusione:
- Qualsiasi paziente che avesse una storia di abitudine alla masticazione di arecanut con manifestazioni cliniche di OSMF.
- Pazienti che avevano una storia di abitudine alla masticazione di arecanut di oltre 1 anno e non presentavano sintomi clinici di OSMF.
- Volontari umani sani che sono indicati per l'estrazione del dente e non avevano caratteristiche cliniche di OSMF e non avevano una storia di abitudine
Criteri di esclusione:
- Pazienti con disturbi emorragici
- pazienti a cui vengono diagnosticati disturbi delle ghiandole salivari che possono alterare il flusso o la composizione della saliva
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
Coorti e interventi
Gruppo / Coorte |
Intervento / Trattamento |
|---|---|
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Paziente con abitudini e con OSMF
Pazienti che avevano una storia di abitudine alla masticazione di arecanut in qualsiasi forma e composizione e che non sono stati sottoposti ad alcun trattamento per la loro condizione attuale, ad esempio OSMF
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campioni bioptici per colorazione IHC e PCR
Campioni di saliva per l'analisi dell'espressione di miRNA 21
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I pazienti con abitudini e non avevano sintomi clinici di OSMF
Pazienti che avevano una storia di abitudine alla masticazione di arecanut in qualsiasi forma e composizione e non presentavano clinicamente sintomi di OSMF
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campioni bioptici per colorazione IHC e PCR
Campioni di saliva per l'analisi dell'espressione di miRNA 21
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Volontari umani sani
pazienti che non hanno riportato una storia di abitudini masticatorie di areacnut e non hanno avuto sintomi clinici di OSMF
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campioni bioptici per colorazione IHC e PCR
Campioni di saliva per l'analisi dell'espressione di miRNA 21
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Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
|---|---|---|
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Cambiamento nell'espressione dei livelli di E-caderina in tutti i gruppi in IHC
Lasso di tempo: 10 giorni dal prelievo del campione
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Per IHC: i criteri utilizzati per definire le cellule positive alla E-caderina erano la colorazione marrone nella membrana cellulare delle cellule epiteliali; la percentuale di cellule colorate positivamente è stata valutata come - Percentuale di PUNTEGGIO CELLULE POSITIVE Nessuna cella 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51%-80% 3 ≥81% 4 Anche l'intensità della colorazione è stata valutata rispetto al tessuto di controllo positivo e valutata di conseguenza PUNTEGGIO DI INTENSITÀ Negativo 0 Debole 1 Moderato 2 Forte 3 |
10 giorni dal prelievo del campione
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Cambiamento nell'espressione dei livelli di vimentina in tutti i gruppi in IHC
Lasso di tempo: 10 giorni dal prelievo del campione
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le cellule positive alla vimentina erano una colorazione marrone nel citoplasma delle cellule epiteliali; la percentuale di cellule colorate positivamente è stata valutata come - Percentuale di PUNTEGGIO CELLULE POSITIVE Nessuna cella 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51%-80% 3 ≥81% 4 Anche l'intensità della colorazione è stata valutata rispetto al tessuto di controllo positivo e valutata di conseguenza PUNTEGGIO DI INTENSITÀ Negativo 0 Debole 1 Moderato 2 Forte 3 |
10 giorni dal prelievo del campione
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Cambiamento nell'espressione dei livelli di collagene IV in tutti i gruppi in IHC
Lasso di tempo: 10 giorni dal prelievo del campione
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le cellule positive al collagene IV erano di colore marrone nelle cellule della membrana basale; la percentuale di cellule colorate positivamente è stata valutata come - Percentuale di PUNTEGGIO CELLULE POSITIVE Nessuna cella 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51%-80% 3 ≥81% 4 Anche l'intensità della colorazione è stata valutata rispetto al tessuto di controllo positivo e valutata di conseguenza PUNTEGGIO DI INTENSITÀ Negativo 0 Debole 1 Moderato 2 Forte 3 |
10 giorni dal prelievo del campione
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Modifica dell'espressione del miRNA 21 in tutti e tre i gruppi mediante Real Time-PCR
Lasso di tempo: 10 giorni dal prelievo del campione
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Considerando l'espressione di miRNA21 nel campione normale (N) pari a 1, è stata calcolata l'espressione di tutti i campioni. La formula utilizzata è: numero di copie = (quantità * 6.022x1023) / (lunghezza * 1x109 * 650)
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10 giorni dal prelievo del campione
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Variazione dei livelli di caderina E nella PCR
Lasso di tempo: 20 giorni dopo il prelievo del campione
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Dopo l'estrazione del DNA dai campioni bioptici, i primer per E-caderina sono stati progettati utilizzando il software Primer Express, sintetizzati e purificati con HPLC per la PCR in tempo reale per la quantificazione.
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20 giorni dopo il prelievo del campione
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Variazione dei livelli di vimentina nella PCR
Lasso di tempo: 20 giorni dopo il prelievo del campione
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Dopo l'estrazione del DNA dai campioni bioptici, i primer per la vimentina sono stati progettati utilizzando il software Primer Express, sintetizzati e purificati con HPLC per la PCR in tempo reale per la quantificazione
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20 giorni dopo il prelievo del campione
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Misure di risultato secondarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
|---|---|---|
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Cambiamento nell'espressione di e-caderina rispetto alla categoria di malattia clinicamente nei pazienti con OSMF con abitudini
Lasso di tempo: 15 giorni dal prelievo del campione
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Livello di caderina E nei campioni di tessuto rispetto alla diversa espressione clinica della malattia secondo il sistema di classificazione di Kerr et al.
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15 giorni dal prelievo del campione
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Cambiamento nell'espressione di e-caderina rispetto alla categoria della malattia istologicamente nei pazienti OSMF con abitudini
Lasso di tempo: 15 giorni dal prelievo del campione
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Livello di caderina E nei campioni di tessuto rispetto alla diversa espressione clinica della malattia secondo il sistema di classificazione di Kanna e Andrade et al.
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15 giorni dal prelievo del campione
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Cambiamento nell'espressione della vimentina rispetto alla categoria della malattia clinicamente nei pazienti OSMF con abitudini
Lasso di tempo: 15 giorni dal prelievo del campione
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Livello di vimentina nei campioni di tessuto rispetto alla diversa espressione clinica secondo il sistema di classificazione di Kerr et al.
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15 giorni dal prelievo del campione
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Cambiamento nell'espressione della vimentina rispetto alla categoria della malattia istologicamente nei pazienti OSMF con abitudini
Lasso di tempo: 15 giorni dal prelievo del campione
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Livello di vimentina nei campioni di tessuto rispetto alla diversa espressione istologica secondo il sistema di classificazione Khanna e Andrade.
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15 giorni dal prelievo del campione
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Cambiamento nell'espressione del collagene IV rispetto alla categoria di malattia clinicamente nei pazienti OSMF con abitudini
Lasso di tempo: 15 giorni dal prelievo del campione
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Livello di collagene-IV nei campioni di tessuto rispetto alla diversa categoria di espressione clinica secondo il sistema di classificazione di Kerr et al.
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15 giorni dal prelievo del campione
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Cambiamento dell'espressione del collagene IV rispetto alla categoria di malattia istologicamente nei pazienti OSMF con abitudini
Lasso di tempo: 15 giorni dal prelievo del campione
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Livello di collagene-IV nei campioni di tessuto rispetto alla diversa espressione istologica secondo il sistema di classificazione di Khanna e Andred et al.
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15 giorni dal prelievo del campione
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Cambiamento nell'espressione di mi RNA 21 rispetto alla categoria di malattia clinicamente nei pazienti OSMF con abitudini
Lasso di tempo: 15 giorni dal prelievo del campione
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livello di miRNA 21 nei campioni di saliva rispetto alla diversa espressione clinica di OSMF secondo il sistema di classificazione di Kerr et al.
|
15 giorni dal prelievo del campione
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Cambiamento nell'espressione di mi RNA 21 rispetto alla categoria di malattia istologicamente nei pazienti OSMF con abitudini
Lasso di tempo: 15 giorni dal prelievo del campione
|
livello di miRNA 21 nei campioni di saliva rispetto alla diversa espressione istologica secondo il sistema di classificazione di Khanna e Andred et al.
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15 giorni dal prelievo del campione
|
Collaboratori e investigatori
Pubblicazioni e link utili
Pubblicazioni generali
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
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