- ICH GCP
- Registr klinických studií v USA
- Klinická studie NCT03732872
Epiteliální mezenchymální přechodové markery v OSMF
Hodnocení rizika maligní transformace u orální submukózní fibrózy pomocí epiteliálních mezenchymálních přechodových (EMT) signatur ve vzorcích tkání a slin
Orální podslizniční fibróza (OSMF) je v podstatě nerovnováha mezi metabolismem kolagenu a mechanismem hojení ran vyvolaná návykem žvýkání arecanut. Klinicky nemoc postupuje ve stádiích, kdy se u pacientů projevuje pocit pálení, nesnášenlivost kořeněného jídla, vezikuly zejména na patře, ulcerace a sucho v ústech, fibróza ústní sliznice vedoucí ke ztuhlosti rtů, jazyka a patra a nakonec k trismu. Vzhledem k tomu, že onemocnění je progresivně vysilující a má potenciál přejít v maligní rakovinu, byla navržena studie, která měla posoudit, zda existují nějaké tkáňové nebo slinné markery, které lze hodnotit pro včasnou diagnózu, a případně indikovat maligní transformaci.
Účastníci, kteří měli OSMF a anamnézu, pacienti bez OSMF, ale anamnézou návyku, tvořili skupinu případů, kde jako normální pacienti bez OSMF a bez anamnézy byli v kontrolní skupině. Způsobilí kandidáti, kteří souhlasili s účastí ve studii, byli podrobeni bioptickému postupu a také byly odebrány vzorky jejich slin. Bioptické vzorky byly podrobeny imunohistochemii (IHC) a polymerázové řetězové reakci (PCR), aby se vyhodnotily markery EMT, jako je vimentin, e-cadherin a kolagen IV. Kopie miRNA byly extrahovány ze slin a byly podrobeny RT-PCR.
Výzkumná otázka zněla:
- Je EMT pozitivní podpis v OSMF.
- Má histopatologický grading a dysplazie u OSMF nějakou korelaci s EMT?
- Mohou být aberantní markery EMT spolehlivým indikátorem pro hodnocení rizika časné maligní transformace?
- Může exprese mi RNA 21 ve slinách predikovat závažnost onemocnění a co je důležitější posoudit riziko časné maligní transformace v OSMF.
Přehled studie
Postavení
Podmínky
Intervence / Léčba
Detailní popis
Epiteliálně-mezenchymální přechod (EMT) popisuje proces, při kterém se buňky zbavují svých epiteliálních vlastností a přijímají více mezenchymální a invazivní fenotyp. Během embryonálního vývoje (epiteliální mezenchymální přechod) je vyžadován nepřetržitý molekulární cross talk mezi epiteliálními a mezenchymovými buňkami a pravděpodobně hraje důležitou roli v patologických procesech, jako je hojení ran a progrese nádoru. Vznik karcinomů je způsoben genetickými změnami v cílovém epitelu. Vzhledem k tomu, že dochází ke konverzi normálního epitelu na potenciálně maligní a na spinocelulární karcinom, stroma se také mění z normálního na aktivované nebo spojené s nádorem nazývané stromální reakce. 10 EMT může generovat mezenchymální buňky, které exprimují α-aktin hladkého svalstva (αSMA), jak je vidět v myofibroblastech. Není však jasné, zda funkční myofibroblasty pozorované u fibrózy nebo rakoviny pocházející z epiteliálních nebo endoteliálních buněk
V této studii byly tedy hodnoceny markery EMT v OSMF. následující značky vybrané jako:
- miRNA-21 reguluje buněčnou proliferaci, apoptózu a epiteliální a mezenchymální přechod během neoplastické progrese a je regulována u různých druhů rakoviny. Zvýšená exprese miRNA-21 je pozorována v myofibroblastech.12 Protože známe roli myofibroblastů v OSMF, byla jako marker zahrnuta exprese mi RNA-21 ve slinách.
- Kolagen typu IV má jedinečnou vlastnost samovolné asociace prostřednictvím intramolekulárních kovalentních vazeb, čímž poskytuje bariérové a mechanické pevnostní vlastnosti bazálních membrán. Zvýšená depozice kolagenu v OSMF zahrnuje četné fibroblasty, které jsou přeměněny na myofibroblasty nalezené v histologických řezech tkáňových vzorků. bylo prokázáno, že změněné mikroprostředí nebo stroma, jako jsou perzistentní myofibroblasty, vedou k tumorigenezi a progresi tumoru
Kadheriny jsou třídou transmembránových proteinů typu 1, které jsou známé pro svou adhezi mezi buňkami závislou na vápníku. E-cadheriny jsou členy této rodiny proteinů nacházející se v epiteliálních buňkách, které hrají důležitou roli v buněčné adhezi tím, že zajišťují, že buňky v tkáních jsou vázány dohromady. Ztráta funkce nebo exprese E-cadherinu se podílí na progresi rakoviny a metastáz. Exprese E-cadherinu v epitelu hlavy a krku je nezbytná pro morfogenezi a homeostázu epiteliálních tkání. Cadherinem zprostředkované kontakty buňka-buňka jsou nutné pro růst epiteliálních buněk závislý na ukotvení.
Nižší exprese E-cadherinu je tedy známkou ztráty integrity epitelu
- Intermediární filamentový protein vimentin se podílí na regulaci buněčného chování, morfologie a mechanických vlastností. Vimentin je EMT marker exprimovaný v pojivové tkáni. Exprese vimentinu v epitelu je pozitivní signaturou EMT a její hodnocení v OSMF může odhalit důležitost signatury EMT u orální fibrózy.
Typ studie
Zápis (Aktuální)
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
Přijímá zdravé dobrovolníky
Pohlaví způsobilá ke studiu
Metoda odběru vzorků
Studijní populace
Popis
Kritéria pro zařazení:
- Každý pacient, který měl v anamnéze návyk na žvýkání arecanut s klinickými projevy OSMF.
- Pacienti, kteří měli anamnézu návyku na žvýkání delší než 1 rok a neměli žádné klinické příznaky OSMF.
- Zdraví dobrovolníci, kteří jsou indikováni k extrakci zubu a neměli žádné klinické příznaky OSMF a neměli žádnou anamnézu
Kritéria vyloučení:
- Pacienti s poruchami krvácení
- pacientů, u kterých jsou diagnostikovány poruchy slinných žláz, které mohou změnit tok nebo složení slin
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
Kohorty a intervence
Skupina / kohorta |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
Pacient s návyky a OSMF
Pacienti, kteří měli v anamnéze zvyk žvýkat arecanut v jakékoli formě a složení a kteří nepodstoupili žádnou léčbu pro svůj současný stav, tj. OSMF
|
bioptické vzorky pro IHC barvení a PCR
Vzorky slin pro analýzu exprese miRNA 21
|
|
Pacienti s návyky a bez klinických příznaků OSMF
Pacienti, kteří měli v anamnéze návyk na žvýkání arecanut v jakékoli formě a složení a neměli klinicky žádné příznaky OSMF
|
bioptické vzorky pro IHC barvení a PCR
Vzorky slin pro analýzu exprese miRNA 21
|
|
Zdraví lidští dobrovolníci
pacienti, kteří v anamnéze neuváděli žvýkací návyky areacnut a neměli žádné klinické příznaky OSMF
|
bioptické vzorky pro IHC barvení a PCR
Vzorky slin pro analýzu exprese miRNA 21
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Změna v expresi hladin E-cadherinu ve všech skupinách v IHC
Časové okno: 10 dní od odběru vzorku
|
Pro IHC: Kritériem použitým k definování E-cadherin pozitivních buněk bylo hnědé barvení v buněčné membráně epiteliálních buněk; procento pozitivně obarvených buněk bylo hodnoceno jako - Procento POZITIVNÍHO SKÓRE BUNĚK Žádné buňky 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 %-80 % 3 ≥81 % 4 Intenzita barvení byla také hodnocena ve srovnání s pozitivní kontrolní tkání a podle toho hodnocena SKÓRE INTENZITY Negativní 0 Slabé 1 Střední 2 Silné 3 |
10 dní od odběru vzorku
|
|
Změna v expresi hladin vimentinu ve všech skupinách v IHC
Časové okno: 10 dní od odběru vzorku
|
buňky pozitivní na vimentin byly hnědé zbarvení v cytoplazmě epiteliálních buněk; procento pozitivně obarvených buněk bylo hodnoceno jako - Procento POZITIVNÍHO SKÓRE BUNĚK Žádné buňky 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 %-80 % 3 ≥81 % 4 Intenzita barvení byla také hodnocena ve srovnání s pozitivní kontrolní tkání a podle toho hodnocena SKÓRE INTENZITY Negativní 0 Slabé 1 Střední 2 Silné 3 |
10 dní od odběru vzorku
|
|
Změna v expresi hladin kolagenu IV ve všech skupinách v IHC
Časové okno: 10 dní od odběru vzorku
|
buňky pozitivní na kolagen IV byly hnědé zbarvení v buňkách bazální membrány; procento pozitivně obarvených buněk bylo hodnoceno jako - Procento POZITIVNÍHO SKÓRE BUNĚK Žádné buňky 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 %-80 % 3 ≥81 % 4 Intenzita barvení byla také hodnocena ve srovnání s pozitivní kontrolní tkání a podle toho hodnocena SKÓRE INTENZITY Negativní 0 Slabé 1 Střední 2 Silné 3 |
10 dní od odběru vzorku
|
|
Změna exprese miRNA 21 ve všech třech skupinách pomocí Real Time-PCR
Časové okno: 10 dní od odběru vzorku
|
S ohledem na expresi miRNA21 v normálním vzorku (N) jako 1 byla vypočtena exprese všech vzorků. Použitý vzorec je: počet kopií = (množství * 6,022x1023) / (délka * 1x109 * 650)
|
10 dní od odběru vzorku
|
|
Změna hladin E kadherinu v PCR
Časové okno: 20 dní po odběru vzorku
|
Po extrakci DNA ze vzorků biopsie byly primery pro E-cadherin navrženy pomocí softwaru Primer Express, syntetizovány a purifikovány pomocí HPLC pro PCR v reálném čase pro kvantifikaci.
|
20 dní po odběru vzorku
|
|
Změna hladin vimentinu v PCR
Časové okno: 20 dní po odběru vzorku
|
Po extrakci DNA ze vzorků biopsie byly primery pro Vimentin navrženy pomocí softwaru Primer Express, syntetizovány a purifikovány pomocí HPLC pro PCR v reálném čase pro kvantifikaci
|
20 dní po odběru vzorku
|
Sekundární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Změna exprese e-cadherinu s ohledem na kategorii onemocnění klinicky u pacientů s OSMF s návyky
Časové okno: 15 dní od odběru vzorku
|
Hladina E kadherinu ve vzorcích tkání s ohledem na různé klinické projevy onemocnění podle klasifikačního systému Kerr et al.
|
15 dní od odběru vzorku
|
|
Změna exprese e-cadherinu s ohledem na kategorii onemocnění histologicky u pacientů s OSMF s návyky
Časové okno: 15 dní od odběru vzorku
|
Hladina E kadherinu ve vzorcích tkání s ohledem na různé klinické projevy onemocnění podle klasifikačního systému Kanna a Andrade et al.
|
15 dní od odběru vzorku
|
|
Změna exprese vimentinu s ohledem na kategorii onemocnění klinicky u pacientů s OSMF s návyky
Časové okno: 15 dní od odběru vzorku
|
Hladina vimentinu ve vzorcích tkání s ohledem na různé klinické projevy podle klasifikačního systému Kerr et al.
|
15 dní od odběru vzorku
|
|
Změna exprese vimentinu s ohledem na kategorii onemocnění histologicky u pacientů s OSMF s návyky
Časové okno: 15 dní od odběru vzorku
|
Hladina vimentinu ve vzorcích tkání s ohledem na rozdílnou histologickou expresi podle klasifikačního systému Khanna a Andrade.
|
15 dní od odběru vzorku
|
|
Změna exprese kolagenu IV s ohledem na kategorii onemocnění klinicky u pacientů s OSMF s návyky
Časové okno: 15 dní od odběru vzorku
|
Hladina kolagenu-IV ve vzorcích tkání s ohledem na různé kategorie klinické exprese podle klasifikačního systému Kerr et al.
|
15 dní od odběru vzorku
|
|
Změna exprese kolagenu IV s ohledem na kategorii onemocnění hstologicky u pacientů s OSMF s návyky
Časové okno: 15 dní od odběru vzorku
|
Hladina kolagenu-IV ve vzorcích tkání s ohledem na rozdílnou histologickou expresi podle klasifikačního systému Khanna a Andred et al.
|
15 dní od odběru vzorku
|
|
Změna v expresi mi RNA 21 s ohledem na kategorii onemocnění klinicky u pacientů s OSMF s návyky
Časové okno: 15 dní od odběru vzorku
|
hladina miRNA 21 ve vzorcích slin s ohledem na odlišnou klinickou expresi OSMF podle klasifikačního systému Kerr et al.
|
15 dní od odběru vzorku
|
|
Změna v expresi mi RNA 21 s ohledem na kategorii onemocnění histologicky u pacientů s OSMF s návyky
Časové okno: 15 dní od odběru vzorku
|
hladina miRNA 21 ve vzorcích slin s ohledem na rozdílnou histologickou expresi podle klasifikačního systému Khanna a Andred et al.
|
15 dní od odběru vzorku
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Publikace a užitečné odkazy
Obecné publikace
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia (AKTUÁLNÍ)
Primární dokončení (AKTUÁLNÍ)
Dokončení studie (AKTUÁLNÍ)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (AKTUÁLNÍ)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (AKTUÁLNÍ)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Klíčová slova
Další relevantní podmínky MeSH
Další identifikační čísla studie
- Oxford DC
Plán pro data jednotlivých účastníků (IPD)
Plánujete sdílet data jednotlivých účastníků (IPD)?
Informace o lécích a zařízeních, studijní dokumenty
Studuje lékový produkt regulovaný americkým FDA
Studuje produkt zařízení regulovaný americkým úřadem FDA
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .