Epitheliale mesenchymale overgangsmarkers in OSMF
Risicobeoordeling van kwaadaardige transformatie in orale submukeuze fibrose met behulp van epitheliale mesenchymale overgangshandtekeningen (EMT) in weefselmonsters en speeksel
Orale subslijmvliesfibrose (OSMF) is in wezen een onbalans tussen het collageenmetabolisme en het wondgenezingsmechanisme veroorzaakt door de gewoonte om op arecanut te kauwen. Klinisch verloopt de ziekte in fasen, waarbij patiënten zich presenteren met een branderig gevoel, intolerantie voor gekruid voedsel, blaasjes in het bijzonder in het gehemelte, ulceratie en droge mond, fibrose van het mondslijmvlies, leidend tot starheid van lippen, tong en gehemelte en tenslotte trismus. Aangezien de ziekte progressief slopend wordt en het potentieel heeft om te veranderen in kwaadaardige kanker, werd een studie opgezet om te beoordelen of er weefsel- of speekselmarkers zijn die kunnen worden beoordeeld voor een vroege diagnose en die eventuele kwaadaardige transformatie kunnen aangeven.
Deelnemers met OSMF en gewoontegeschiedenis, patiënten zonder OSMF maar gewoontegeschiedenis vormden de casusgroep waar normale patiënten zonder OSMF en geen gewoontegeschiedenis in de controlegroep zaten. In aanmerking komende kandidaten die ermee instemden deel te nemen aan de studie, werden onderworpen aan een biopsieprocedure en ook hun speekselmonsters werden verzameld. Biopsiemonsters werden onderworpen aan immunohistochemie (IHC) en polymerasekettingreactie (PCR) om de EMT-markers zoals vimentin, e-cadherine en collageen IV te beoordelen. miRNA-kopieën werden geëxtraheerd uit speeksel en werden onderworpen aan RT-PCR.
Onderzoeksvraag was:
- Is EMT een positieve handtekening in OSMF.
- Hebben histopathologische indeling en dysplasie bij OSMF enige correlatie met EMT.
- Kunnen afwijkende EMT-markers een betrouwbare indicator zijn voor risicobeoordeling van vroege kwaadaardige transformatie?
- Kan expressie van mi RNA 21 in speeksel de ernst van de ziekte voorspellen en, nog belangrijker, het risico van vroege kwaadaardige transformatie in OSMF beoordelen.
Studie Overzicht
Toestand
Conditie
Interventie / Behandeling
Gedetailleerde beschrijving
Epitheliale-mesenchymale transitie (EMT) beschrijft het proces waarbij cellen hun epitheliale eigenschappen verliezen en een meer mesenchymaal en invasief fenotype aannemen. Een continue moleculaire overspraak tussen epitheel- en mesenchymale cellen is vereist tijdens de embryonale ontwikkeling (epitheliale mesenchymale overgang) en speelt waarschijnlijk een belangrijke rol in pathologische processen zoals wondgenezing en tumorprogressie. De ontwikkeling van carcinomen is te wijten aan de genetische veranderingen in het doelepitheel. Aangezien er sprake is van omzetting van normaal epitheel in mogelijk kwaadaardig en in plaveiselcelcarcinoom, verandert het stroma ook van normaal in geactiveerd of tumor-geassocieerd, de stromale reactie genoemd. 10 EMT kan mesenchymale cellen genereren die α-gladde spieractine (αSMA) tot expressie brengen, zoals te zien is in myofibroblasten. Het is echter onduidelijk of functionele myofibroblasten die worden gezien bij fibrose of kanker afkomstig van epitheel- of endotheelcellen
Daarom werden in deze studie EMT-markers in OSMF beoordeeld. de volgende markeringen gekozen als:
- miRNA-21 reguleert celproliferatie, apoptose en de epitheliale naar mesenchymale overgang tijdens neoplastische progressie en wordt omhoog gereguleerd bij een verscheidenheid aan kankers. Een verhoogde expressie van miRNA-21 wordt gezien in myofibroblasten.12 Omdat we de rol van myofibroblasten in OSMF kennen, werd speekselexpressie van mi RNA-21 als marker opgenomen.
- Type IV collageen heeft het unieke kenmerk van zelfassociatie via intramoleculaire covalente bindingen, waardoor basale membranen barrière- en mechanische sterkte-eigenschappen krijgen. De verhoogde collageenafzetting in OSMF omvat talrijke fibroblasten die worden omgezet in myofibroblasten die worden aangetroffen in histologische secties van weefselspecimens. er is aangetoond dat een veranderde micro-omgeving of stroma, zoals aanhoudende myofibroblasten, leidt tot het ontstaan van tumoren en tumorprogressie
Cadherines zijn een klasse van type 1 transmembraaneiwitten die bekend staan om hun calciumafhankelijke cel-celadhesie-eigenschap. E-cadherines zijn leden van deze eiwitfamilie die wordt aangetroffen in epitheelcellen die een belangrijke rol spelen bij celadhesie door ervoor te zorgen dat cellen in weefsels aan elkaar worden gebonden. Het verlies van de functie of expressie van E-cadherine is betrokken bij de progressie en metastase van kanker. E-cadherine-expressie in het hoofd- en nekepitheel is essentieel voor de morfogenese en homeostase van epitheelweefsels. De door cadherine gemedieerde cel-celcontacten zijn vereist voor de verankeringsafhankelijke groei van epitheelcellen.
Daarom is een lagere expressie van E-cadherine een teken van verlies van epitheliale integriteit
- Het intermediaire filamenteiwit vimentine is betrokken bij de regulatie van celgedrag, morfologie en mechanische eigenschappen. Vimentin is een EMT-marker die tot expressie wordt gebracht in bindweefsel. Expressie van vimentine in epitheel is een positieve handtekening van EMT, en de evaluatie ervan in OSMF kan het belang van EMT-handtekening bij orale fibrose onthullen.
Studietype
Inschrijving (Werkelijk)
Deelname Criteria
Geschiktheidscriteria
Leeftijden die in aanmerking komen voor studie
Accepteert gezonde vrijwilligers
Geslachten die in aanmerking komen voor studie
Bemonsteringsmethode
Studie Bevolking
Beschrijving
Inclusiecriteria:
- Elke patiënt met een voorgeschiedenis van het kauwen op noten met klinische manifestaties van OSMF.
- Patiënten met een voorgeschiedenis van meer dan 1 jaar om op noten te kauwen en geen klinische symptomen van OSMF hadden.
- Gezonde menselijke vrijwilligers die geïndiceerd zijn voor het trekken van tanden en geen klinische kenmerken van OSMF hadden en geen gewoontegeschiedenis hadden
Uitsluitingscriteria:
- Patiënten met bloedingsstoornissen
- patiënten bij wie speekselklieraandoeningen zijn vastgesteld die de speekselstroom of samenstelling kunnen veranderen
Studie plan
Hoe is de studie opgezet?
Ontwerpdetails
Cohorten en interventies
Groep / Cohort |
Interventie / Behandeling |
|---|---|
|
Patiënt met gewoonten en met OSMF
Patiënten met een voorgeschiedenis van het kauwen op noten, in welke vorm en samenstelling dan ook en die geen behandeling hebben ondergaan voor hun huidige aandoening, d.w.z. OSMF
|
biopsiemonsters voor IHC-kleuring en PCR
Speekselmonsters voor miRNA 21-expressieanalyse
|
|
Patiënten met gewoonten en hadden geen klinische symptomen van OSMF
Patiënten met een voorgeschiedenis van canut-kauwgewoonte in welke vorm en samenstelling dan ook en hadden klinisch geen symptomen van OSMF
|
biopsiemonsters voor IHC-kleuring en PCR
Speekselmonsters voor miRNA 21-expressieanalyse
|
|
Gezonde menselijke vrijwilligers
patiënten die geen voorgeschiedenis van kauwgewoonten rapporteerden en geen klinische symptomen van OSMF hadden
|
biopsiemonsters voor IHC-kleuring en PCR
Speekselmonsters voor miRNA 21-expressieanalyse
|
Wat meet het onderzoek?
Primaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Verandering in expressie van E-cadherine-niveaus in alle groepen in IHC
Tijdsspanne: 10 dagen na monsterafname
|
Voor IHC: De criteria die werden gebruikt om E-cadherine-positieve cellen te definiëren, waren bruine kleuring in celmembraan van epitheelcellen; het percentage positief gekleurde cellen werd gescoord als - Percentage POSITIEVE CELLEN SCORE Geen cellen 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51%-80% 3 ≥81% 4 Kleurintensiteit werd ook beoordeeld in vergelijking met het positieve controleweefsel en dienovereenkomstig gescoord INTENSITEITSCORE Negatief 0 Zwak 1 Matig 2 Sterk 3 |
10 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in expressie van vimentineniveaus in alle groepen in IHC
Tijdsspanne: 10 dagen na monsterafname
|
vimentine-positieve cellen was bruine kleuring in het cytoplasma van epitheelcellen; het percentage positief gekleurde cellen werd gescoord als - Percentage POSITIEVE CELLEN SCORE Geen cellen 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51%-80% 3 ≥81% 4 Kleurintensiteit werd ook beoordeeld in vergelijking met het positieve controleweefsel en dienovereenkomstig gescoord INTENSITEITSCORE Negatief 0 Zwak 1 Matig 2 Sterk 3 |
10 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in expressie van collageen IV-niveaus in alle groepen in IHC
Tijdsspanne: 10 dagen na monsterafname
|
collageen IV-positieve cellen waren bruine kleuring in basaalmembraancellen; het percentage positief gekleurde cellen werd gescoord als - Percentage POSITIEVE CELLEN SCORE Geen cellen 0 ≤ 10% 1 11% -50 % 2 51%-80% 3 ≥81% 4 Kleurintensiteit werd ook beoordeeld in vergelijking met het positieve controleweefsel en dienovereenkomstig gescoord INTENSITEITSCORE Negatief 0 Zwak 1 Matig 2 Sterk 3 |
10 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in expressie van miRNA 21 in alle drie de groepen met behulp van Real Time-PCR
Tijdsspanne: 10 dagen na monsterafname
|
Gezien de uitdrukking van miRNA21 in normaal monster (N) als 1, werd de uitdrukking van alle monsters berekend. De gebruikte formule is: aantal kopieën = (hoeveelheid * 6.022x1023) / (lengte * 1x109 * 650)
|
10 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in E-cadherinespiegels in PCR
Tijdsspanne: 20 dagen na monsterafname
|
Na extractie van DNA uit biopsiemonsters werden de primers voor E-cadherine ontworpen met behulp van Primer Express-software, gesynthetiseerd en HPLC-gezuiverd voor real-time PCR voor kwantificering.
|
20 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in vimentinespiegels in PCR
Tijdsspanne: 20 dagen na monsterafname
|
Na extractie van DNA uit de biopsiemonsters werden de primers voor Vimentin ontworpen met behulp van Primer Express-software, gesynthetiseerd en HPLC-gezuiverd voor real-time PCR voor kwantificering
|
20 dagen na monsterafname
|
Secundaire uitkomstmaten
Uitkomstmaat |
Maatregel Beschrijving |
Tijdsspanne |
|---|---|---|
|
Verandering in e-cadherine-expressie met betrekking tot ziektecategorie klinisch bij OSMF-patiënten met gewoonten
Tijdsspanne: 15 dagen na monsterafname
|
E-cadherine-niveau in weefselmonsters met betrekking tot verschillende klinische expressie van ziekte volgens het classificatiesysteem van Kerr et al.
|
15 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in e-cadherine-expressie met betrekking tot ziektecategorie histologisch bij OSMF-patiënten met gewoonten
Tijdsspanne: 15 dagen na monsterafname
|
E-cadherineniveau in weefselmonsters met betrekking tot verschillende klinische expressie van ziekte volgens het classificatiesysteem van Kanna en Andrade et al.
|
15 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in vimentine-expressie met betrekking tot ziektecategorie klinisch bij OSMF-patiënten met gewoonten
Tijdsspanne: 15 dagen na monsterafname
|
Vimentine-niveau in weefselmonsters met betrekking tot verschillende klinische expressie volgens het classificatiesysteem van Kerr et al.
|
15 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in vimentine-expressie met betrekking tot ziektecategorie histologisch bij OSMF-patiënten met gewoonten
Tijdsspanne: 15 dagen na monsterafname
|
Vimentine-niveau in weefselmonsters met betrekking tot verschillende histologische expressie volgens het classificatiesysteem van Khanna en Andrade.
|
15 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in collageen IV-expressie met betrekking tot ziektecategorie klinisch bij OSMF-patiënten met gewoonten
Tijdsspanne: 15 dagen na monsterafname
|
Collageen-IV-niveau in weefselmonsters met betrekking tot verschillende klinische expressiecategorieën volgens het classificatiesysteem van Kerr et al.
|
15 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in collageen IV-expressie met betrekking tot ziektecategorie hstologisch bij OSMF-patiënten met gewoonten
Tijdsspanne: 15 dagen na monsterafname
|
Collageen-IV-niveau in weefselmonsters met betrekking tot verschillende histologische expressie volgens het classificatiesysteem van Khanna en Andred et al.
|
15 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in mi RNA 21-expressie met betrekking tot ziektecategorie klinisch bij OSMF-patiënten met gewoonten
Tijdsspanne: 15 dagen na monsterafname
|
miRNA 21-niveau in speekselmonsters met betrekking tot verschillende klinische expressie van OSMF volgens het classificatiesysteem van Kerr et al.
|
15 dagen na monsterafname
|
|
Verandering in mi RNA 21-expressie met betrekking tot ziektecategorie histologisch bij OSMF-patiënten met gewoonten
Tijdsspanne: 15 dagen na monsterafname
|
miRNA 21-niveau in speekselmonsters met betrekking tot verschillende histologische expressie volgens het classificatiesysteem van Khanna en Andred et al.
|
15 dagen na monsterafname
|
Medewerkers en onderzoekers
Publicaties en nuttige links
Algemene publicaties
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
Studie record data
Bestudeer belangrijke data
Studie start (WERKELIJK)
Primaire voltooiing (WERKELIJK)
Studie voltooiing (WERKELIJK)
Studieregistratiedata
Eerst ingediend
Eerst ingediend dat voldeed aan de QC-criteria
Eerst geplaatst (WERKELIJK)
Updates van studierecords
Laatste update geplaatst (WERKELIJK)
Laatste update ingediend die voldeed aan QC-criteria
Laatst geverifieerd
Meer informatie
Termen gerelateerd aan deze studie
Trefwoorden
Aanvullende relevante MeSH-voorwaarden
Andere studie-ID-nummers
- Oxford DC
Plan Individuele Deelnemersgegevens (IPD)
Bent u van plan om gegevens van individuele deelnemers (IPD) te delen?
Informatie over medicijnen en apparaten, studiedocumenten
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd geneesmiddel
Bestudeert een door de Amerikaanse FDA gereguleerd apparaatproduct
Deze informatie is zonder wijzigingen rechtstreeks van de website clinicaltrials.gov gehaald. Als u verzoeken heeft om uw onderzoeksgegevens te wijzigen, te verwijderen of bij te werken, neem dan contact op met register@clinicaltrials.gov. Zodra er een wijziging wordt doorgevoerd op clinicaltrials.gov, wordt deze ook automatisch bijgewerkt op onze website .