Epitheliale mesenchymale Übergangsmarker in OSMF
Risikobewertung der malignen Transformation bei oraler submuköser Fibrose unter Verwendung von Signaturen des epithelialen mesenchymalen Übergangs (EMT) in Gewebeproben und Speichel
Die orale submuköse Fibrose (OSMF) ist im Wesentlichen ein Ungleichgewicht zwischen dem Kollagenstoffwechsel und dem Wundheilungsmechanismus, das durch die Kaugewohnheit der Arekanuss induziert wird. Klinisch verläuft die Krankheit stufenweise mit brennendem Gefühl, Unverträglichkeit scharfer Speisen, Bläschen besonders am Gaumen, Geschwürbildung und Mundtrockenheit, Fibrose der Mundschleimhaut, die zu einer Steifheit von Lippen, Zunge und Gaumen und schließlich zu Trismus führt. Da die Krankheit zunehmend schwächend ist und sich möglicherweise in bösartigen Krebs verwandeln kann, wurde eine Studie entwickelt, um festzustellen, ob es Gewebe- oder Speichelmarker gibt, die für eine frühzeitige Diagnose bewertet werden können und auf eine bösartige Transformation hinweisen, falls vorhanden.
Teilnehmer mit OSMF und Anamnese, Patienten ohne OSMF, aber Anamnese bildeten die Fallgruppe, in der sich normale Patienten ohne OSMF und ohne Anamnese in der Kontrollgruppe befanden. Geeignete Kandidaten, die der Teilnahme an der Studie zugestimmt hatten, wurden einem Biopsieverfahren unterzogen und auch ihre Speichelproben wurden entnommen. Biopsieproben wurden der Immunhistochemie (IHC) und der Polymerase-Kettenreaktion (PCR) unterzogen, um die EMT-Marker wie Vimentin, E-Cadherin und Kollagen IV zu bestimmen. miRNA-Kopien wurden aus Speichel extrahiert und einer RT-PCR unterzogen.
Forschungsfrage war:
- Ist EMT eine positive Signatur in OSMF.
- Gibt es eine Korrelation zwischen histopathologischer Einstufung und Dysplasie bei OSMF und EMT?
- Können abweichende EMT-Marker ein zuverlässiger Indikator für die Risikobewertung einer frühen malignen Transformation sein?
- Kann die Expression von mi-RNA 21 im Speichel die Schwere der Erkrankung vorhersagen und, was noch wichtiger ist, das Risiko einer frühen malignen Transformation bei OSMF abschätzen.
Studienübersicht
Status
Bedingungen
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Epithelial-mesenchymaler Übergang (EMT) beschreibt den Prozess, bei dem Zellen ihre epithelialen Eigenschaften verlieren und einen mesenchymaleren und invasiveren Phänotyp annehmen. Ein kontinuierlicher molekularer Austausch zwischen epithelialen und mesenchymalen Zellen ist während der Embryonalentwicklung (epithelialer mesenchymaler Übergang) erforderlich und spielt wahrscheinlich eine wichtige Rolle bei pathologischen Prozessen wie Wundheilung und Tumorprogression. Die Entstehung von Karzinomen ist auf genetische Veränderungen innerhalb des Zielepithels zurückzuführen. Da es zu einer Umwandlung von normalem Epithel in potenziell bösartiges und in Plattenepithelkarzinom kommt, ändert sich auch das Stroma von normal zu aktiviert oder tumorassoziiert, was als Stromareaktion bezeichnet wird. 10 EMT kann mesenchymale Zellen erzeugen, die α-glattes Muskelaktin (αSMA) exprimieren, wie es in Myofibroblasten zu sehen ist. Es ist jedoch unklar, ob funktionelle Myofibroblasten, die bei Fibrose oder Krebs zu sehen sind, von Epithel- oder Endothelzellen stammen
Daher wurden in dieser Studie EMT-Marker in OSMF bewertet. Die folgenden Marker wurden ausgewählt als:
- miRNA-21 reguliert Zellproliferation, Apoptose und den Übergang von Epithel zu Mesenchym während der neoplastischen Progression und wird bei einer Vielzahl von Krebsarten hochreguliert. Eine erhöhte Expression von miRNA-21 wird in Myofibroblasten beobachtet.12 Da wir die Rolle von Myofibroblasten bei OSMF kennen, wurde die Expression von mi RNA-21 im Speichel als Marker aufgenommen.
- Typ-IV-Kollagen hat die einzigartige Eigenschaft, sich durch intramolekulare kovalente Bindungen selbst zu assoziieren und den Basalmembranen Barriere- und mechanische Festigkeitseigenschaften zu verleihen. Die erhöhte Kollagenablagerung bei OSMF betrifft zahlreiche Fibroblasten, die in Myofibroblasten umgewandelt werden, die in histologischen Schnitten von Gewebeproben gefunden werden. Es wurde gezeigt, dass eine veränderte Mikroumgebung oder ein verändertes Stroma wie persistente Myofibroblasten zur Tumorentstehung und Tumorprogression führen
Cadherine sind eine Klasse von Typ-1-Transmembranproteinen, die für ihre calciumabhängige Zell-Zell-Adhäsionseigenschaft bekannt sind. E-Cadherine sind Mitglieder dieser Proteinfamilie, die in Epithelzellen vorkommen und eine wichtige Rolle bei der Zelladhäsion spielen, indem sie sicherstellen, dass Zellen innerhalb von Geweben miteinander verbunden sind. Der Verlust der E-Cadherin-Funktion oder -Expression wurde mit dem Fortschreiten und der Metastasierung von Krebs in Verbindung gebracht. Die E-Cadherin-Expression im Kopf- und Halsepithel ist für die Morphogenese und Homöostase von Epithelgeweben wesentlich. Die Cadherin-vermittelten Zell-Zell-Kontakte sind für das verankerungsabhängige Wachstum von Epithelzellen erforderlich.
Daher ist eine geringere Expression von E-Cadherin ein Zeichen für den Verlust der epithelialen Integrität
- Das intermediäre Filamentprotein Vimentin ist an der Regulation des Zellverhaltens, der Morphologie und der mechanischen Eigenschaften beteiligt. Vimentin ist ein EMT-Marker, der im Bindegewebe exprimiert wird. Die Expression von Vimentin im Epithel ist eine positive Signatur von EMT, und seine Bewertung in OSMF kann die Bedeutung der EMT-Signatur bei oraler Fibrose enthüllen.
Studientyp
Einschreibung (Tatsächlich)
Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Studienberechtigte Geschlechter
Probenahmeverfahren
Studienpopulation
Beschreibung
Einschlusskriterien:
- Jeder Patient, der in der Vorgeschichte Arekanuss-Kaugewohnheiten mit klinischen Manifestationen von OSMF hatte.
- Patienten mit Arecanuss-Kaugewohnheiten von mehr als 1 Jahr und ohne klinische OSMF-Symptome.
- Gesunde menschliche Freiwillige, die für die Extraktion von Zähnen indiziert sind und keine klinischen Merkmale von OSMF und keine Gewohnheitsgeschichte aufwiesen
Ausschlusskriterien:
- Patienten mit Blutgerinnungsstörungen
- Patienten, bei denen Speicheldrüsenerkrankungen diagnostiziert wurden, die den Speichelfluss oder die Speichelzusammensetzung verändern können
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
Kohorten und Interventionen
Gruppe / Kohorte |
Intervention / Behandlung |
|---|---|
|
Patient mit Gewohnheiten und OSMF
Patienten, die in irgendeiner Form und Zusammensetzung Arekanuss-Kaugewohnheiten hatten und die keiner Behandlung für ihren aktuellen Zustand, d. h. OSMF, unterzogen wurden
|
Biopsieproben für IHC-Färbung und PCR
Speichelproben für die miRNA 21-Expressionsanalyse
|
|
Patienten mit Gewohnheiten und ohne klinische Symptome von OSMF
Patienten, die in irgendeiner Form und Zusammensetzung Arecanuss-Kaugewohnheiten hatten und klinisch keine OSMF-Symptome aufwiesen
|
Biopsieproben für IHC-Färbung und PCR
Speichelproben für die miRNA 21-Expressionsanalyse
|
|
Gesunde menschliche Freiwillige
Patienten, die keine Vorgeschichte von Areacnut-Kaugewohnheiten berichteten und keine klinischen Symptome von OSMF hatten
|
Biopsieproben für IHC-Färbung und PCR
Speichelproben für die miRNA 21-Expressionsanalyse
|
Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
|
Veränderung der Expression von E-Cadherin-Spiegeln in allen Gruppen in IHC
Zeitfenster: 10 Tage ab Probenentnahme
|
Für IHC: Das zur Definition von E-Cadherin-positiven Zellen verwendete Kriterium war eine braune Färbung in der Zellmembran von Epithelzellen; der Prozentsatz positiv gefärbter Zellen wurde bewertet als – Prozentsatz POSITIVER ZELLWERTE Keine Zellen 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 % - 80 % 3 ≥81 % 4 Die Färbungsintensität wurde auch im Vergleich mit dem positiven Kontrollgewebe bewertet und entsprechend bewertet INTENSITÄTSWERT Negativ 0 Schwach 1 Mäßig 2 Stark 3 |
10 Tage ab Probenentnahme
|
|
Veränderung der Expression von Vimentinspiegeln in allen Gruppen in IHC
Zeitfenster: 10 Tage ab Probenentnahme
|
Vimentin-positive Zellen zeigten eine braune Färbung im Cytoplasma von Epithelzellen; der Prozentsatz positiv gefärbter Zellen wurde bewertet als – Prozentsatz POSITIVER ZELLWERTE Keine Zellen 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 % - 80 % 3 ≥81 % 4 Die Färbungsintensität wurde auch im Vergleich mit dem positiven Kontrollgewebe bewertet und entsprechend bewertet INTENSITÄTSWERT Negativ 0 Schwach 1 Mäßig 2 Stark 3 |
10 Tage ab Probenentnahme
|
|
Veränderung der Expression von Kollagen-IV-Spiegeln in allen Gruppen in IHC
Zeitfenster: 10 Tage ab Probenentnahme
|
Collagen-IV-positive Zellen waren in Basalmembranzellen braun gefärbt; der Prozentsatz positiv gefärbter Zellen wurde bewertet als – Prozentsatz POSITIVER ZELLWERTE Keine Zellen 0 ≤ 10 % 1 11 % -50 % 2 51 % - 80 % 3 ≥81 % 4 Die Färbungsintensität wurde auch im Vergleich mit dem positiven Kontrollgewebe bewertet und entsprechend bewertet INTENSITÄTSWERT Negativ 0 Schwach 1 Mäßig 2 Stark 3 |
10 Tage ab Probenentnahme
|
|
Veränderung der Expression von miRNA 21 in allen drei Gruppen mittels Real Time-PCR
Zeitfenster: 10 Tage ab Probenentnahme
|
Unter Berücksichtigung der Expression von miRNA21 in der normalen Probe (N) als 1 wurde die Expression aller Proben berechnet. Die verwendete Formel lautet: Anzahl der Kopien = (Menge * 6,022 x 1023) / (Länge * 1 x 109 * 650)
|
10 Tage ab Probenentnahme
|
|
Änderung der E-Cadherin-Spiegel in der PCR
Zeitfenster: 20 Tage nach Probenentnahme
|
Nach der Extraktion von DNA aus Biopsieproben wurden die Primer für E-Cadherin mit der Primer Express-Software entworfen, synthetisiert und für die Echtzeit-PCR zur Quantifizierung HPLC-gereinigt.
|
20 Tage nach Probenentnahme
|
|
Veränderung der Vimentinspiegel in der PCR
Zeitfenster: 20 Tage nach Probenentnahme
|
Nach der Extraktion von DNA aus den Biopsieproben wurden die Primer für Vimentin mit der Primer Express-Software entworfen, synthetisiert und für die Echtzeit-PCR zur Quantifizierung HPLC-gereinigt
|
20 Tage nach Probenentnahme
|
Sekundäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
|---|---|---|
|
Veränderung der E-Cadherin-Expression in Bezug auf die Krankheitskategorie klinisch bei OSMF-Patienten mit Gewohnheiten
Zeitfenster: 15 Tage ab Probenentnahme
|
E-Cadherin-Gehalt in Gewebeproben in Bezug auf verschiedene klinische Krankheitsausprägungen gemäß dem Klassifikationssystem von Kerr et al.
|
15 Tage ab Probenentnahme
|
|
Änderung der E-Cadherin-Expression in Bezug auf die Krankheitskategorie, histologisch bei OSMF-Patienten mit Gewohnheiten
Zeitfenster: 15 Tage ab Probenentnahme
|
E-Cadherin-Gehalt in Gewebeproben in Bezug auf verschiedene klinische Krankheitsausprägungen gemäß dem Klassifikationssystem von Kanna und Andrade et al.
|
15 Tage ab Probenentnahme
|
|
Veränderung der Vimentin-Expression in Bezug auf die Krankheitskategorie klinisch bei OSMF-Patienten mit Gewohnheiten
Zeitfenster: 15 Tage ab Probenentnahme
|
Vimentin-Spiegel in Gewebeproben in Bezug auf verschiedene klinische Ausprägungen gemäß dem Klassifikationssystem von Kerr et al.
|
15 Tage ab Probenentnahme
|
|
Änderung der Vimentin-Expression in Bezug auf die Krankheitskategorie, histologisch bei OSMF-Patienten mit Gewohnheiten
Zeitfenster: 15 Tage ab Probenentnahme
|
Vimentinspiegel in Gewebeproben in Bezug auf unterschiedliche histologische Ausprägungen nach dem Klassifikationssystem von Khanna und Andrade.
|
15 Tage ab Probenentnahme
|
|
Veränderung der Kollagen-IV-Expression in Bezug auf die Krankheitskategorie klinisch bei OSMF-Patienten mit Gewohnheiten
Zeitfenster: 15 Tage ab Probenentnahme
|
Kollagen-IV-Spiegel in Gewebeproben in Bezug auf verschiedene klinische Expressionskategorien gemäß dem Klassifikationssystem von Kerr et al.
|
15 Tage ab Probenentnahme
|
|
Veränderung der Kollagen-IV-Expression in Bezug auf die Krankheitskategorie, histologisch bei OSMF-Patienten mit Gewohnheiten
Zeitfenster: 15 Tage ab Probenentnahme
|
Kollagen-IV-Spiegel in Gewebeproben in Bezug auf unterschiedliche histologische Expression gemäß dem Klassifikationssystem von Khanna und Andred et al.
|
15 Tage ab Probenentnahme
|
|
Veränderung der mi-RNA-21-Expression in Bezug auf die Krankheitskategorie klinisch bei OSMF-Patienten mit Gewohnheiten
Zeitfenster: 15 Tage ab Probenentnahme
|
miRNA 21-Spiegel in Speichelproben in Bezug auf unterschiedliche klinische Expression von OSMF gemäß dem Klassifikationssystem von Kerr et al.
|
15 Tage ab Probenentnahme
|
|
Änderung der mi-RNA-21-Expression in Bezug auf die Krankheitskategorie, histologisch bei OSMF-Patienten mit Gewohnheiten
Zeitfenster: 15 Tage ab Probenentnahme
|
miRNA 21-Level in Speichelproben in Bezug auf unterschiedliche histologische Expression gemäß dem Klassifikationssystem von Khanna und Andred et al.
|
15 Tage ab Probenentnahme
|
Mitarbeiter und Ermittler
Publikationen und hilfreiche Links
Allgemeine Veröffentlichungen
- Yang Y, Li YX, Yang X, Jiang L, Zhou ZJ, Zhu YQ. Progress risk assessment of oral premalignant lesions with saliva miRNA analysis. BMC Cancer. 2013 Mar 19;13:129. doi: 10.1186/1471-2407-13-129.
- Sawant SS, Vaidya Mm, Chaukar DA, Alam H, Dmello C, Gangadaran P, Kannan S, Kane S, Dange PP, Dey N, Ranganathan K, D'Cruz AK. Clinical significance of aberrant vimentin expression in oral premalignant lesions and carcinomas. Oral Dis. 2014 Jul;20(5):453-65. doi: 10.1111/odi.12151. Epub 2013 Jul 19.
- Pinto GA, Vassallo J, Andrade LA, Magna LA. Immunohistochemical study of basement membrane collagen IV in uterine cervix carcinoma. Sao Paulo Med J. 1998 Nov-Dec;116(6):1846-51. doi: 10.1590/s1516-31801998000600004.
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn (TATSÄCHLICH)
Primärer Abschluss (TATSÄCHLICH)
Studienabschluss (TATSÄCHLICH)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (TATSÄCHLICH)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (TATSÄCHLICH)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Schlüsselwörter
Zusätzliche relevante MeSH-Bedingungen
Andere Studien-ID-Nummern
- Oxford DC
Plan für individuelle Teilnehmerdaten (IPD)
Planen Sie, individuelle Teilnehmerdaten (IPD) zu teilen?
Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
Diese Informationen wurden ohne Änderungen direkt von der Website clinicaltrials.gov abgerufen. Wenn Sie Ihre Studiendaten ändern, entfernen oder aktualisieren möchten, wenden Sie sich bitte an register@clinicaltrials.gov. Sobald eine Änderung auf clinicaltrials.gov implementiert wird, wird diese automatisch auch auf unserer Website aktualisiert .